Способ диагностики активности туберкулеза легких Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности к фтизиатрии и иммунологии, и предназначено для диагностики активности туберкулеза легких.

Известен способ диагностики туберкулеза, включающий забор крови, выделение нейтрофилов, инкубацию их с латексом с последующим определением активности (АФ) и интенсивности (ИФ) фагоцитоза. При этом, если значения полученных показателей ниже нормы, диагностируют активную форму туберкулеза легких III.

Недостатком известного способа является его невысокая точность.

Цель изобретения - повышение точности способа диагн -стики.

Для достижения поставленной цели чистую популяцию йтрофилов крови больного культивируют в присутствии полисти- рольного монодисперсного латекса диаметром 1,7 мкм с последующим выделением супернатанта активированных нейтрофилов. Дополнительно выделяют моноциты донора, к которым добавляют суперна- тант со взвесью частиц латекса в соотношении 1:20 с последующим определением активности (АФ) и интенсивности фагоцитоза моноцитов по отношению к частицам латекса и вычислением индекса интенсивности фагоцитоза по формулам:

1Л1ЛФ ИФ моноцитов донора и супернатанте ИФ моноцитов донора в среде 199

мдф - АФ моноцитов донора в супернатанте АФ моноцитов донора в среде 199

и при значениях этих индексов меньше 1 диагностируют активную форму туберкулеза легких,

Следующие примеры иллюстрируют осуществление предлагаемого способа.

П-р и м е р 1. Степанов В,П., 27 лет. Поступил в стационар для уточнения активности туберкулезного процесса в легких.

Ч 00

со

Јь 00

ел

Патология в легких выявлена впервые при профосмотре. Жалобы на незначительную слабость. Снижение аппетита. При перкуссии и аускультации локальные изменения не отмечены. При многократных микробиологических обследованиях различными методиками микобактерии туберкулеза не выявлены. На обзорной рентгенограмме легких, томограммах левой верхушки 6-7 см в верхней доле левого легкого - одиночные крупные средней интенсивности очаги относительно четкими контурами, однородной структуры. Заключение: очаговый туберкулез верхней доли левого легкого, фаза инфильтрации.

Анализ крови: гемоглобин - 162, СОЭ - 4, л - 5,9 105, п - 3, С - 49, л - 39, м - 9.

Проведено исследование в соответствии с предлагаемым способом. Из венозной гепаринизированной крови (25 ед. гепарина на 1 мл крови) больного (15 мл) выделили чистую популяцию нейтрофилов путем центрифугирования на двойном градиенте плотности фиколл-верографин (Д1-1.077, Да-1,093) по методу Wong-Wilson в течение 40 мин при 1500 об/мин. Взвесь гранулоци- тов из кольца, образовавшегося на границе между растворами, разводили средой 199 до концентрации 5- 106 клеток(нейтрофилов) в 1 мл и вносили в нее взвесь частиц монодисперсного полистирольного латекса диаметром 1,7 м км из расчета 50 частиц на 1 -нейтрофил, Пробирку со взвесью помещали в термостат при 37°С на 1 ч для получения супернатанта активированных латексом нейтрофилов. Содержимое пробирки центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 мин для удаления клеток и частиц латекса.

Дополнительно выделяли моноциты донора, для чего мононуклеары, выделенные из периферической крови, центрифугировали на двойной градиенте плотности. Образовавшееся кольцо мононуклеаров отсасывали и отм лвали двукратно средой 199. Мононуклеары в концентрации 106 клеток в 1 мл инкубировали в течение 1 ч при 37°С в пробирках - сапожках, на дне которых находились покровные стекла. Затем клетки, прилипшие к стеклу, отмывали от лимфоцитов средой 199 и использовали для исследования фагоцитарной активности в качестве клеток-мишеней для действия секреторных продуктов нейтрофилов. Контролем служили моноциты, инкубированные в среде 199.

В опытные пробирки - сапожки добавляли по 1 мл супернатанта активированных латексом нейтрофилов (САН). После часовой инкубации в опытные и контрольные пробирки добавляли по 0,1 мл взвеси стандартизованных микросфер латекса диаметром 1,7 мкм в соотношении 1:20. Пробирки

помещали на 1 ч в термостат, после чего монослой трехкратно отмывали средой 199 и окрашивали по Романовскому-Гимзе и определяли активность (Аф) и интенсивность (ИФ) фагоцитоза латекса моноцитами донора в опыте и контроле: в монослое подсчитывали количество фагоцитирующих клеток на 100, что отражает активность фагоцитоза, и количество поглощенных частиц латекса в 100 подсчитанных клетках интенсивность фагоцитоза:

АФ199 31, АФСАН 16, ИФ199 127, ИФСАН 61.

Определяли значения индексов активности фагоцитоза (ИАФ) и интенсивности фагоцитоза (ИИФ):

25

ИИФ ,48 ИАФ 4у 0,31

Значения обоих показателей меньше 1,0, что в соответствии с предлагаемым способом свидетельствует об активном туберкулезе легких.

Наблюдение за больным в дальнейшем подтвердило правильность поставленного диагноза.

Пример 2. Габдурахманов З.Г., 36лет.

Поступил на дообследование и лечение. Патология в легких выявлена флюорографиче- ски при профосмотре. В легких: перкуторно-легочный звук, аускультативно - дыхание везикулярное, хрипов нет. Рентгенологически на обзорных снимках, томограммах правой верхушки 6-7-8 см. Справа в верхней доле немного численные очаги средней интенсивности, контуры четкие малой и средней величины. Слева во 11-11 межреберье мелкие средней интенсивности очаги.

В анализе крови при поступлении: гем. 175, СОЭ - 13, Л - 4,0, э - 2, п - 1, с - 53, л - 35, м - 2. Анализ мочи без патологии. Реакция Манту - 7 мм. В анализе мокроты мето- дом люминесцентным и посева многократно В К не выявлено.

В соответствии с предлагаемым способом АФ моноцитов донора с САН больного

составила 29, ИФ - 107; АФ моноцитов донора в среде 199-41 ИФ моноцитов донора в среде 199- 132.

ИАФ ,7 ИИФ .8

I О

Значения обоих показателей меньше 1,0, что позволило диагностировать активный туберкулезный процесс в легких больного.

В последующем через 2,5 месяца диагноз уточнен на ЦВКК: очаговый туберкулез в/доли правого легкого, фаза инфильтрации. ВК- 1 группа диспансерного учета.

Точность предлагаемого способа составляет 96% против 60% по способу-прототипу.

0

Формула изобретения Способ диагностики активности туберкулеза легких, включающий забор крови, выделение клеток крови, инкубацию в присутствии латекса, вычисление показателей активности и интенсивности фагоциноза, о т- личающийся тем что, с целью повышения точности способа, после инкубации клеток крови выделяют супернатант, инкубируют с ним моноциты донора человека с последующим вычислением показателей, активности и интенсивности фагоцитоза и при их величине ниже 1 диагностируют активную форму туберкулеза.

Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии и иммунологии. Цель изобретения - повышение точности-способа. У больного производят забор крови, выделяют нейтрофилы, инкубируют в присутствии латекса и с последующим отделением супернатанта и инкубацией с ним нейтрофилов донора, вычисляют активность и интенсивность фагоцитоза и при величине этих показателей ниже 1 диагностируют активную форму туберкулеза. По сравнению с прототипом точность увеличивается на 56%.