Способ дифференциальной диагностики бактериальных и вирусных менингитов Советский патент 1990 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности медицинской микробиологии и может быть использовано при диаг- йостике менингитов.

Целью изобретения является повышение чувствительности и упрощение

способа, а также сокращение сроков исследования.

Способ осуществляется следующим образом.

Готовят 2%-ный раствор агара из бактоагара Дифко или простого агар

агара отечественного производства на О,1 М бифталатном буфере или 0,5%-ном гипотоническом растворе NaCl с рН 6,2. Готовят раствор поли- миксина № сульфата в концентрации 2-4 тыс. ЕД/мл, для чего берут навеску порошка или таблетку антибиотика, содержащую 500 тыс. ЕД и растворяют в 250-175 мл буфера или солевого раствора. Навеску сухой массы тест культуры М. lysodeikticus берут из расчета 0,15% к общему объему среды и тщательно растирают в ступке с 1-2 каплями буфера или гипотонического раствора. В расплавленный 2%-ный агар добавляют равное по объему количество приготовленного раствора полимик- сина, смесь охлаждают до температуры 44-55°С, ГЬсле чего соединяют с приготовленной навеской культуры микрококка и наносят по 4 мл на предметные стекла. В застывшей среде делают лунки диаметром 2 мм на расстоянии 1 см одна от другой.

Перед исследованием предметные стекла со средой предварительно подогревают в термостате в течение 15- 20 мин. Лунки заполняют испытуемыми образцами спинно-мозговой жидкости, после чего предметные стекла выдерживают в термостате в течение 15- 120 мин. О наличии лизоцима судят по появлению зоны лизиса вокруг лунки в течение указанного периода вре- мени. При обнаружении лизиса в течение 15-120 мин диагностируют бактериальную этиологию менингита, а при отсутствии лизиса в течение указанно го времени - вирусную.

J

Пример 1. Больной Н., 12 лет

поступил с предварительным диагнозом: острый менингит неучтенной этиологии. Больному произведена спинномозговая пункция. При исследовании спинно-мозговой жидкости установлено: ликвор прозрачный, цитоз 198 106 кл/л, нейтрофилы 48%, лимфоциты 52%, белок 0,33 г/л,сахар 2,4 ммоль/л хлориды 125 ммоль/л. С целью установления этиологии менингита изучена лизоцимная активность спинно-мозговой жидкости больного. Гельбактери- альную смесь готовили впрок на 20 предполагаемых исследований. За еди- Ъшцу расчета принимали 4 мл среды, необходимые для одного предметного стекла, и оптимальное число возмож

0

5

0

5

jO jj

40

45

50

55

ых исследований на нем (2-3 пробы ликвора). Для выполнения намеченного количества исследований потребовалось 28 нп гелъбактериальной смеси. 14 мл 2%-ного раствора агара готовили из простого агар-агара отечественного производства на 0,5%-ном растворе хлористого натрия, рН 6,2. Раствор полимиксина М сульфата, содержащий 4 тыс. ЕД/мл, готовили путем растворения 1 таблетки антибиотика (500 тыс. ЕД) в 175 мл 0,5%-ного раствора хлористого натрия.

Навеску сухой культуры М. lysodeikticus (42 мкг) тщательно растирали в ступке с 1-2 каплями гипотонического раствора NaCl. К 14 мл расплавленного 2%-ного агара добавляли 14 мл приготовленного раствора полимиксина У сульфата, смесь охлаждали до 50 С, после чего соединяли с навеской культуры микрококка. Среду разливали по 4 мл на 7 предметных стекол. В застывшей среде делали по 3 лунки на расстоянии 1 см одна от другой. С помощью пастеровской пипетки заполняли лунку исследуемым образцам ликвора, после чего предметное стекло клали на дно чашки Петри и просматривали через каждые 10-15 мин в течение 2 ч. Появление зоны лизиса, визуально воспринимающееся как просветление среды вокруг лунки, началось через 115 мин, что позволило сделать заключение о бактериальной природе менингита у данного больного и назначить этиотропную терапию. Результаты бактериологического исследования спин- но-моэговой жидкости больного подтвердили менингококковую этиологию заболевания на третьи сутки,

П р и м е р 2. Больной К., 16 лет, госпитализирован с диагнозом: менин- гококковая инфекция менингит. Ликво- рологические данные: цитоз 700х 10 кл/л, нейтрофилы 55%, лимфоциты 45%, белок 0,48 мг/л, сахар 2,8 ммоль/л, хлориды 115 ммоль/л.Результаты бактериоскопии мазка ликвора отрицательные. Определение лизо- цимной активности спинно-мозговой жидкости проводили по предлагаемому способу. Гельбактериальную смесь готовили так же, как. в примере I, за исключением того, что доза полимиксина в среде была 1 тыс. ЕД/мл. Ход исследования тот же. Появление зоны лизиса вокруг лунки с ликвором больно5

го отмечено через 15 мин инкубации в термостате. Сделано заключение о бактериальной природе заболевания. До постановки окончательного диагноза в очаге проведен врачебный осмот общавшихся, выявлены и изолированы больные с характерными клиническими признаками назофарингита. На 3-й день бактериологического обследования из носоглотки больного был выделен менингококк, а в РИГА на 7-й день отмечено нарастание титров антител к ме- нингококковому полисахариду. Окончательный диагноз: менингококковая ин- фекция, менингит. Количественное определение у данного больного лизоцима проведенное известным способом, показало наличие его в дозе 16 мкг/мл.

Использование предлагаемого спосо- ба позволяет повысить чувствительност диагностики менингитов на 30%, упростить способ за счет простоты подготовки и учета реакции и сократить сроки проведения исследований до 2 ч.

66

В таблице приведено количество обнаруженного лизоцима предлагаемым и и известным способами.

Формула изобретения

Способ дифференциальной диагностики бактериальных и вирусных менингитов, включающий определение лизоцима в биологической жидкости методом диффузии в агаре с тест-культурой М. 1у- sodeikticus, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности, упрощения способа и сокращения сроков исследования, определение проводят в спинно-мозговой жидкости, при этом в агар добавляют 1-2 тыс. ЕД/мл полимиксина К сульфата, после чего визуально определяют зоны лизиса среды и при обнаружении лизиса в течение 15-120 мин диагностируют бактериальную этиологию менингита, а при отсутствии лизиса в течение указанного времени - вирусную.

Изобретение относится к медицине, в частности к медицинской микробиологии, и может быть использовано при диагностике менингитов. Целью изобретения является повышение чувствительности и упрощение способа, а также сокращение сроков исследования. Для этого предварительно готовят 2%-ный раствор агара на 0,1 М бифталатном буфере или 0,5%-ном гипотоническом растворе NACL с PH 6,2, раствор полимиксина М сульфата в концентрации 2-4 тыс. ЕД/мл, сухую массу тест-культуры М. LYSODEIRTICUS из расчета 0,15% к общему объему среды, которую растирают в ступке с 1-2 каплями буфера или гипотонического раствора. В расплавленный агар добавляют равное по объему количество раствора полимиксина, смесь охлаждают до 44-55°С, после чего добавляют культуру микрококка и наносят по 4 мл на предметные стекла. В застывшей среде делают лунки диаметром 2 мм на расстоянии 1 см друг от друга. Лунки заполняют образцами спинно-мозговой жидкости, после чего предметные стекла выдерживают в термостате в течение 15-120 мин. О наличии лизоцима судят по появлению зоны лизиса вокруг лунки в течение указанного периода наблюдения. При обнаружении лизиса в течение 15-120 мин диагностируют бактериальную этиологию менингита, а при отсутствии лизиса в течение

Редактор В.Петраш

Составитель Г.Чуич Техред М.Дидык

Заказ 39

Тираж 503

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35; Раушская наб., д. 4/5

Корректор С.Юекмар

Подписное