Способ количественного определения содержания алкалоидов в семенах и вегетативной массе люпина Советский патент 1990 года по МПК G01N33/50 C07G5/00 

Изобретение относится к биохимии растений и может быть использовано в селекции и семеноводстве люпина, а также при определении качества содержащих люпин кормов.

Целью изобретения является сокращение времени анализа и снижение его трудоемкости при условии сохранения точности определения.

Достижение поставленной цели обеспечивается введением принципиально нового метода экстракции алкалоид дов с использованием 10%-ного раствора ТХУ с последующим определением алкалоидов в экстракте путем окрашивания их йодат-йодистым реагентом в кислой среде, Замена многоэтапной экстракции с помощью комплекса органиЧРСКИХ и минеральных реактивов одно- этапной процедурой с использованием ТХУ и применение в цветной реакции йодат-йодистого реактива, обеспечива- ющего быстрое развитие окраски, позволяют сократить время анализа до 1 ч по сравнению с 9-10 ч в известном способе. При этом по данным статистического анализа получаемые предла- гаемым методом данные практически полностью совпадают (имеют высокий показатель сходимости) с результатами параллельных анализов, выполненных по стандартной методике ( и 31.

В табл01 представлены сравнительные операции проведения анализа на содержание алкалоидов известным и предлагаемым способами,

В табл.2 представлена оценка метрологических характеристик предлагаемого способа (А) и весового метода (в) при определении содержания алкалоидов в семенах и вегетативной массе люпина (t Q $$ 2,09).

В табл.3 представлена оценка показателя сходимости.

Пример. Навеску 0,-5-10,001 г (для алкалоидных видов люпина) или 2,5-5tO,001 г (для малоалкалоидных видов) воздушно-сухой пробы растительного материала, размолотой на мельнице, помещают в коническую колбу (на 250 мл), приливают 50 мл 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Содержимое хорошо размешивают покачиванием и выдерживают 45 мин для укрупнения осадка белков и перехода алкалоидов в раствор. За время настаива- ния смесь размешивают два-три раза с интервалами 10-15 мин, после отстаивания снова энергично встряхивают и переносят содержимое на бумажный фильтр средней плотности. На опреде- ление берут 1-2 мл фильтрата для алкалоидных и 5-10 мл фильтрата для малоалкалоидных видов. Отобранный объем фильтрата помещают в мерную колбу на 100 мл, добавляют 10 мл 0,2 н. НгЯО+ и дистиллированную воду до 80 мл,затем размешивают.

Вносят 5 мл йодат-йодистого реагента, допивают водой до 100 мл и перемешивают 3-кратным перевертывани- ем колбы. Черея 5 мин регистрируют оптическую плотность по отношению к контрольной пробе, которая содержит все КОМПОНРНТЫ, кроме фильтрата. Измерения проводят в проточной кювете с длиной оптического пути 10 мм при длине волны 500 нм.

Содержание алкалоидов (%) рассчитывают по формуле

--а

-Ъ:

1 000

И) О

н

100

vz lOO-b)

Юа . V,

где а - содержание алкалоидов в

100 мл раствора, определенное по калибровочной кривой мг;

V., - общий объем вытяжки, мл; V - объем фильтрата, взятый на

определение, мл;

И - навеска растительного материала, г;

Ъ - влажность пробы, %. В табл.4 приведено содержание (%) в семенах и вегетативной массе различных видов люпина, определенное предлагаемым (А) и известным (Б) способами .

Приведенные данные свидетельствуют о том, что предлагаемый способ может быть использован для определения содержания алкалоидов как в семенах, так и в вегетативной массе высокоалкалоидных и безалкалоидных видов люпина. При этом результаты анализа практически полностью совпадают с данными весового метода (по Маху и Ледерлею,), хотя предлагаемый способ позволяет получать их в 10 ра быстрее

Применение изобретения обеспечивает значительную экономию времени, трудозатрат и реактивов в работах по селекции люпина и получению кормов на его основе.

Формула изобретения

Способ количественного определени содержания алкалоидов в семенах и вегетативной массе люпина,включающий их экстракцию из растительного матерала, проведение цветной реакции, ко- лориметрирование окрашенного раствора и сопоставление интенсивности окраски опытных и стандартных образцов отличающийся тем, что, с целью сокращения времени анализа и снижения его трудоемкости, алкалоиды экстрагируют 10%-ным раствором ТХУ,

в качестве цветореагента используют йодат-йодистый реактив, а обработку им проводят в присутствии серной кислоты,

Т а б л и ц а 1

Продолжение табл.1

Операции и их длительность по способу

Изобретение относится к биохимии растений и может быть использовано в селекции и семеноводстве люпина, а также в животноводстве при определении качества содержащих люпин кормов. Целью изобретения является сокращение времени анализа и снижение его трудоемкости при сохранении высокой точности определения. Основу предложенного способа составляет введение нового метода экстракции алкалоидов из растительного материала, предусматривающего использование 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ). Замена многоэтапной экстракции с применением комплекса минеральных и органических веществ одноступенчатой процедурой обработки пробы раствором ТХУ в совокупности с быстрым окрашиванием экстракта йодат-йодистым реактивом позволила сократить время анализа (по сравнению с известным способом) примерно в 10 раз. Новый способ пригоден для определения содержания алкалоидов как в семенах, так и в вегетативной массе, он может быть использован для анализа высокоалкалоидных и безалкалоидных видов люпина. При этом результаты определения полностью совпадают с данными наиболее точного весового метода. Применение изобретения в практике обеспечит значительную экономию времени, трудозатрат и реактивов в работах по селекции и семеноводству люпина, по получению кормов на его основе. 3 табл.

Операции и их длительность по способу

10

Известному

Предлагаемому

Взятие навески 1 мин

Настаивание с 10%-ным раствором NaOH 30 мин

Экстрагирование хлороформом в аппарате Соксле- та 2 ч 30 мин Промывка экстракт ционной колбы этиловым эфиром 2 мин

15

Упаривание кислотного экстракта и измерение объема I ч Выделение алкалоидов в окрашенный осадок прибавлением 10%-ной фос- форно-молибденовой кислоты 4 ч Фильтрование осадка через стеклянный фильтр 30 мин Промывка водой и восстановление осадка щелочным раствором хлористого олова 30 мин Перенос окрашенного комплекса в мерную

„ „ лколбу на 100 мл,

том и 0,2 н. чо

г ч ju доведение водой

Взятие навески 1 мин

Настаивание с I0%-ной трихлорук- сусной кислотой 45 мин

Фильтрование через бумажный фильтр 5 мин

20

Перенос части фильтрата в мерную 25 колбу на 10 мл, прибавление воды, окрашивание йодат- йодистым реагенВстряхиваниеэкстракта с порциями по 10 мл 0,02 н, %$СЦ , 5 раз 30 мин

1 мин Добавление воды до метки и отстаивание 5 мин

до метки и отстаивание 15 мин. Колориметрирова- ние 1 мин 35 Общее время 9 ч 53 мин

Известному

Предлагаемому

Колориметрирова- ние 1 мин

Общее время 58 мин

15

20

до метки и отстаивание 15 мин. Колориметрирова- ние 1 мин Общее время 9 ч 53 мин

Таблица2

Таблиц а 3

Т а б л и ц а А