Изобретение относится к биохимии, в частности к методам определения концентрации белка в исследуемых жидкостях.
Цель изобретения - повышение точности способа.
Поставленная цель достигается тем, что в реакции используют бромфеноло- вый синий в концентрации 5-8х10 М и цитратный буфер с рН 3,0-3,2.
На чертеже изображена зависимость величины оптической плотности от концентрации белка.
Пример 1. К 2,7 мл реактива (5 мг БФС + 11 мл этанола + 89 мл 0,05 М цитрат-буфера, рН 3,0) добавляют 0,3 мл раствора сывороточного альбумина человека. Интенсивно перемешивают и через 1-2 мин измеряют поглощение при Л 610 нм. D х 0,475
против контрольной пробы (2,7 мл реактива + 0,3 мл ). Затем измеряют поглощение стандартной пробы, к которой было добавлено 0,3 мл сывороточного альбумина человека с концентрацией 0,5 мг/мл - стандарт (С cr). DCT 0,264. Определяют концентрацию белка в исследуемом растворе по уравнению Сх DKCCT/DCT 0,475-0,5/0,264 0,90 мг/мл.
Пример 2. Процесс ведут аналогично примеру 1, за исключением того, что используют следующие концентрации сывороточного альбумина человека (САЧ): 10,20,40,60,80,100 мкг/мл.
При увеличении концентрации САЧ от 10 до 100 мкг/мл оптическая плотность Dt1e линейно возрастает от 0,053 до 0,528.
ел
СП
Со со
Таким образом, линейная зависимос оптического поглощения от концентрации белка сохраняется в диапазоне 10МОО мкг/мл.В то же время в спосо- беКпрототипе линейная зависимость D и Cf|A(t аблюдаетс я только для узкого диапазона концентраций бецка (10-20 мкг/мл) и при СввАК„ 40 мкг/мл отклонение D от линейной зависимости составляет уже 12%.
Формула изобретения
Способ определения -концентрации белка путем добавления к пробе с белком бромфенолового синего, растворенного в 10- 13,5%-ном подкисленном этаноле с последующим спектрофотометри- рованием при длине волны 610 нм, о т- личающийся тем, что, с целью увеличения точности способа, реакцию проводят в цитратном буфере с рН 3,0-3,2, а бромфенолоный синий добавляют в концентрации 5-8x1О 5М.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Тушитель белковой флуоресценции | 1980 |
|
SU894496A1 |
| ГИБРИДНАЯ КОНСТРУКЦИЯ, ВКЛЮЧАЮЩАЯ АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЙ ФРАГМЕНТ, СПЕЦИФИЧНЫЙ К СЫВОРОТОЧНОМУ АЛЬБУМИНУ, И ЭФФЕКТОРНЫЙ КОМПОНЕНТ, И СПОСОБЫ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ | 2014 |
|
RU2661087C2 |
| Способ определения белка в моче | 1982 |
|
SU1175439A1 |
| Способ определения АТФазной активности в тромбоцитах | 1989 |
|
SU1730591A1 |
| СПОСОБ ОЦЕНКИ СОДЕРЖАНИЯ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ДЕСИАЛИРОВАННЫХ ЛИПОПРОТЕИДОВ НИЗКОЙ ПЛОТНОСТИ | 2015 |
|
RU2623879C2 |
| Метод непрямого конкурентного иммуноферментного анализа для определения содержания тетродотоксина и его аналогов в экстрактах морских организмов | 2020 |
|
RU2744705C1 |
| Фотосенсибилизатор на основе карбоцианинового красителя для фотодинамической терапии опухолей | 2016 |
|
RU2638131C1 |
| Способ определения теофиллина в сыворотке крови | 1987 |
|
SU1573427A1 |
| Способ препаративного гель-электрофоретического разделения гипофизарных белков | 1988 |
|
SU1624327A1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ИНТЕРЛЕЙКИНА-2 ЧЕЛОВЕКА | 1989 |
|
RU2031125C1 |
Изобретение относится к биохимии, в частности к способам определения концентрации белка в исследуемых жидкостях. Цель изобретения - повышение точности способа. Для определения концентрации белка готовят водный раствор бромфенольного синего, содержащий 10 - 13,5 об.% этанола, и к нему добавляют 1/5 - 1/20 объемную часть раствора белка. Реакцию проводят в цитратном буфере при PH 3,0 - 3,2 и концентрации красителя 5 - 8.10-5М. Содержание белка определяют путем измерения оптического поглощения комплексов белка с красителем при λ 610 нм. Величина поглощения линейно зависит от концентрации белка в диапазоне 10 - 100 мкг/мл (по сывороточному альбумину человека).
80 ЮОмкд/ы
CfwKQ,
| Analyt | |||
| Biochem, 1978, v;88, p | |||
| СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ РУДНО-УГОЛЬНЫХ БРИКЕТОВ | 1922 |
|
SU605A1 |
