Способ диагностики сифилиса Советский патент 1990 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к медицине, в частности к кожно-венерологическим болезням.

Целью изобретения является ранняя диагностика.

Способ осуществляется следующим образом.

Определение церулоплазмина проводят натощак по методике Г.А.Бабенко. Используют следующие реактивы: 0,5%- ный раствор солянокислого перасЬени- лендиамина, если нет его, то можно воспользоваться демител-пара-фенилен- диамином или диэтил-пара-йенилендиа- мином (если готовят 100-200 мл реактива, то сохранять его нужно в емкости с притертой пробкой в холодильнике); физиологический раствору 0,1 н.ацетатный буфер рН -- 6,0 + 0,05; 0,5%-ный раствор гидроксиламина соля ною елого; 0,5%-ный раствор хлористого натрия.

Хоц определения.

Для данного определения берут три центрифужных пробирки, которые со- , держат по 1 мл йизиологического раствора. В каждую пробирку помещают по 0,2 мл крови, взятой микропипеткой из пальца после прокола иглой Франка. Содержимое пробирок центрифугируют 10 мин. Затем из пробирки набирают по 0,8 мл надосадочной жидкости и переносят в другие три пробирки. После этого в каждую пробирку, которая содержит 0,8 мп надосадочной шц- кости, вносят по 1 мл пара-йенилендиа- мина и 2 мл ацетатного буйера. Две пробирки после встряхивания помещают в термостат при 37°С на один час, а в третью пробирку (контрольная проба)

сд

ОЭ

Ј

СО

31

сразу же после добавления ацетатного буфера вносят 1 мл раствора гицро- ксиламина и 10 мл раствора хлористог натрия. После инкубации в две пробирки также вносят аналогичные количества растворов гидроксиламина и хлористого натрия. Исследуемые пробы коло- риметрируют при помощи йютоэлектро- Колориметра против контрольной пробы при зеленом светофильтре (530 мм). I Поскольку при различных заболева- ц иях соотношение содержания плазмы и1 форменных элементов может существенно изменяться, а для определения фстивности церулоплазмина берут целъ Ную кровь,.то при расчете активности Церулоплазмина в плазме крови необ

родимо учесть показатели гематокрита, Для определения активности церулоплаз--.

мина и показателя его в условных фдиницах расчет производят по формуле

Л

10i§ (

0,01ба,

де А - активность фермента в условных единицах в плазме; Е - показатель барабана электроI фотокалориметра;

а - показатель гематокрита. Тематокрнтная величина (общий объем эритроцитов) дает представление о соотношении между объемом плазмы и объемом форменных элементов кро- ви. Определение производят в гема- токрите, представляющем собой стеклянную трубочку, разделенную на 100 равных частей. Перед взятием крови гематокрит промывают гепарином или растворбм, составленным из 1,2 г ок- салата аммония и 0,82 оксалата калия в 100 мл воды. Затем набирают в гематокрит до отметки 100 кровь из пальца пациента, закрывают конец пипетки резиновым колпачком, центрифугируют в течение 30 мин при 3000 об/мин и отмечают, какую часть в градуированной трубке гематокрита занимают эритроциты.

Iо

Из данных экскреции и гематокрита можно определять активность церулоплазмина в 0,1 мл плазмы крови в условных единицах.

Исследовалась активность церулоплазмина у 75 больных заразными Ьор- мами сиАилнса до начала специбическо го лечения и в конце курса терапии.

Параллельно проводилось исследование церулоплазмина у 21 здорового мужчины (контроль) (таблица).

У всех 75 больных (100%) до начала специфического лечения активность церулоплазмина в сыворотке крови в среднем была равной 15,20 + 1,20 усл. ед., что значительно ниже в сравнении

0

5

.

0

5

30

35 до 45

50

55

со здоровыми людьми (коэффициент различия равен 5,93). Активность церулоплазмина у всех больных (100%) в конце курса лечения возросла в среднем до 29,21 + 2,68 усл. ед.

В таблице приведены данные о результатах исследования активности церулоплазмина у 75 больных всеми заразными формами сифилиса, которые свидетельствуют о том, что при всех формах сифилитической инфекции определение этого Фермента является абсолютно необходимым и должно проводиться в комплексе с диагностическими серологическими реакциями.

Особо важное значение имеет определение активности церулоплазмина в динамике и после курса специфического лечения для выявления динамики его нормализации, что является свидетельством излеченности от инфекции, так как общепринятые серологические реакции могут быть положительными еце длительное время (в течение нескольких месяцев).

Наиболее важное значение имеет определение церулоплазмина с целью улучшения диагностики ранних Форм сифилиса. Так как при первичном сифилисе снижение активности церулоплазмина в сыворотке крови предшествует положительным реакциям иммунофлуорес- ценции, реакции Вассермана и микрореакции и поэтому является наиболее чувствительным и ранним диагностическим тестом наличия сифилитической инфекции в организме, что было выявлено у всех 20 больных (таблица) первичным серонегативным сифилисом, i

Пример 1. Больной К., 26

лет, поступил в КВД с диагнозом обследование на сифилис. Из анамнеза установлено, что 4 недели тому назад он имел случайную половую связь с неизвестной женщиной. Через три недели после этого полового контакта на крайней плоти полового члена у него появилась овальной формы язвочка диаметром 0,5-1 см, безболезненная при пальпации, еще через неделю

увеличился лимфатический узел в паховой области слепа, диаметром 1,5- 2 см, безболезненный, не спаянный с окружающей клетчаткой. Со слов больного было установлено, что он самостоятельно принимал антибиотики, проводил прижигание появившейся язвочки раствором перманганата калия. Больному было начато исследование из отделяемого язвы на наличие возбудитля сифилиса (бледной трепонемы). Полового партнера привлечь к обследованию на сифилис не удалось, так как больной не смог указать ее Фамилии и места жительства. Проводимое многократное бактериоскопическое исследование на бледную трепонему не позволило обнаружить возбудителя. Серо- - логические реакции крови и микрореакция были отрицательными. Больному проведено исследование активности церулоплазмина, показатели которого составляли 14,17 ± 2,19 усл. ед., что явилось основанием для постановки диагноза: сифилис первичный, сероне- гативный. Через два дня после этого в пунктате увеличенного регионарного пахового лимфатического узла путем бактериоскопического исследования в темном поле были обнаружены возбудители сифилиса (бледные трепонемы), что явилось подтверждением исследований активности церулоплазмина у данного больного, ему было назначено специфическое лечение по схеме лечения первичного сифилиса.

С целью ранней диагностики сифилиса было проведено исследование активности церулоплазмина у 6 пациентов, которые были в половом контакте с больными активными Формами сифилиса две недели тому назад. У всех больных было выявлено снижение его активности до 17,32t2,23 усл. ед.

Пример 2. Больной Ч., 26 лет, поступил в КВД для обследования, половой контакт с больной вторичным свежим сифилисом. Из анамнеза установлено, что половая связь с больной была п;ве недели тому назад. Клинических проявлений сифилиса у обследуемого еще не было, серологические реакции крови - отрицательные. Проведенное исследование активности церулоплазмина в сыворотке крови у обследуемого показало, что его показатели были значительно ниже нормальных и составляли 17,34+2,23. Больно0

5

0

5

0

5

0

му, HP дожидаясь клинических проявлений сифилиса, было проведено превентивное лечение сифилиса.

Таким образом, в данных конкретных случаях, падение активности церулоплазмина в сыворотке кропи было зафиксировано уже в конце инкубационного периода, предшествуя первым клиническим проявлениям сифилиса, т.е. твердому шанкру, который появляется в среднем через 3-6 недель от момента заражения. Так как в инкубационном пепиоце никаких клинических субъективных и объективных проявлений сифилиса еце нет, то данные активности церулоплазмина в сыворотке крови пациентов являются первым диагностическим критерием заражения (т.е. заболевания) сифилитической инфекцией.

Также были проведены исследования по определению активности церулоплазмина у всех леченых больных различными Лормами сифилиса (таблица) после проведения специфического лечения, с целью раннего прогнозирования эффективности лечения.

Необходимость этих исследований была обусловлена тем, что общепринятые серологические методы (реакция Вассермана и др.), применяемые с целью ссроконтроля излеченности, могут оставаться положительными еще в течение нескольких месяцев после проведения специфического лечения.

Результаты проведенных исследований (таблица) свидетельствуют о том, что после проведенного специфического лечения у всех леченых больных . (т.е. в 100% случаев) независимо от стадии заболевания наблюдалось увеличение активности церулоплазмина до нормальных его показателей (в среднем 29,21 +2,68 усл. ед.), что является свидетельством высокой эФФективности проведенного лечения.

Проведенные многолетние клинические и лабораторные исследования по определению активности церулоплазмина у больных различными заразными формами сифилиса и в инкубационный период инфекции свидетельствуют о том, что этот способ является высокочувствительным (в 100% случаев) и может быть включен в число необходимых исследований как для ранней диагностики сифилитической инфекции, так и для ускоренного прогнозирования эффективности проводимой специфической терапии сифилиса.

Формула изобретения

полнителыю определяют содержание церулоплазмина и при снижении его уровня относительно нормы и наличии предшествовавшего полового контакта

Способ диагностики сийилиса путем клшшко-анамнестического обследования больного и исследования сыворотки с больным, язв и эрозий, характер- крови, отличающийся тем,ных для этой инфекции, диагностируют что, с целью ранней диагностики, до-сифилис.

полнителыю определяют содержание церулоплазмина и при снижении его уровня относительно нормы и наличии предшествовавшего полового контакта

с больным, язв и эрозий, характер- ных для этой инфекции, диагностируют сифилис.

Изобретение относится к области медицины, в частности к кожно-венерологическим болезням. Целью изобретения является ранняя диагностика. Для этого проводят определение активности церулоплазмина в сыворотке крови натощак модифицированным методом Г.А.Бабенко и клинико-анамнестическое обследование больного, при снижении уровня активности церулоплазмина относительно нормы и наличия предшествовавшего контакта с больным, язв и эрозий, характерных для этой инфекции, диагностируют сифилис. Способ позволяет выявлять сифилис уже на стадии ранних его форм и диагностировать его с высокой степенью достоверности (100%). 1 табл.

14,175,0162,1915

14,295,842,3925

18,875,693,2213

15,234,822,1122

15,205,321,2075

24,94 8,02 5,56 23,24 5,81 2,48

Редактор М„Бандура

Составитель Л.Шилина Техред М.Дидык

Заказ 976

Тираж 508

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКН1 СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

25,91 9,45,03

21,62 11,824,23

30,87 12,465,21

Корректор С.Шевкун

Подписное