Способ моделирования паркинсонического синдрома Советский патент 1990 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии.

Цель изобретения - повышение точности способа за счет приближения модели к течению естественной патологии .

Способ осуществляют следующим образом.Конъюгат дофамин-белок синтезируют с использованием диазотированно- го белка. В качестве белкового носителя используют бычий сывороточный -альбумин. Синтезированный конъюгат выделяют гель-хроматографией на се-, фадексе. Количественное содержание дофамина в конъюгате определяют спектрофотометрически по приросту оптической плотности в конъюгате по сравнению с белком-носителем с учетом поглощения дофамина. Полученный конъюгат содержит 30 молекул дофамина на 1 молекулу белка. Для иммунизации используют кроликов-самцов из породы Шиншила массой 2,5-2,7 кг.

Уровень антител к дофамину и их специфичность определяют в твердофазном кммуноферментном анализе с использованием в качестве тест-антигена конъюгата, синтезированного по той же схеме, но на гетерологич- ном белковом носителе - гамма-глобулине лошади.

Гамма-глобулин из имунных сывороток выделяют методом переосаждения сульфатом аммония. Гамма-глобулин лиофилизируют и хранят при +4 С.

Для внутримозгового введения используют гамма-глобулины, очищенные от антител к белку-носителю методом аффинной хроматографии с использованием в качестве иммуносорбента сефарозы 4-В с иммобилизованным на ней бычьим сывороточным альбумиЈ

СП

&

ном, а также сывороточные гамма-глобулины неиммунизированных кроликов. За 7 сут. до введения гамма-глобулинов животному проводят стерео- таксическую операцию вживления электродов и канюль в правое и левое хвостатые ядра. Перед операцией крысе вводят гексанал из расчета 150 мг/кг массы тела.

В хвостатые ядра крыс линии Вис- тар массой 270-350 г по координатам стереотаксического атласа мозга при помощи микрошприца вводят по 200 мкг в 5 мкл гамма-глобулины, содержащие антитела к дофамину, полученные из сывороток кроликов, иммунизированных конъюгатом дофамин-белок. Используют гамма-глобулины, очищенные от антител к белку-носителю методом аффинной хроматографии. Регистрируют электрическую активность хвостатых ядер и актограмму. Оценивают основную триаду симптомов пар- кинсонического синдрома: олигокинези ригидность, тремор.

Пример, Подопытной крысе за 7 сут. до моделирования паркинсони- ческого синдрома проводили стерео- таксическую операцию вживления элект родов и канюль в правое и левое хвостатые ядра. Перед операцией крысе вводили гек сен ал из расчета 150 мг/кг массы тела. Вживление электродов и кнюль проводили в стереотаксическом аппарате по координатам атласа мозга крысы. Униполярные нихромовые электроды вживляли по следующим координатам: А -2, (Л 2,59 Н 4,5. Канюли вводились по координатам: А -2, о 2,5, Н 5.

Через 7 сут. после проведения стереотаксической операции проводили запись электрической активности хвостатых ядер и исследовали поведение крысы в открытом поле и в ка- мере-актографе. Эти показатели состния центральной нервной системы не обнаруживали каких-либо отклонений от нормы.

В этих условиях под легким эфирным наркозом в стереотаксическом аппарате через вживленные канюли вводили гамма-глобулины, содержащие антитела к дофамину, из расчета

10

15

20

,25

мкл в какдое

561084

200 мкг в объеме 5 хвостатое ядро.

После выхода из наркоза крысу помещали в камеру-актограф. Эпектро- каудатограмму и поведенческую активность регистрировали непрерывно в течение 8 ч. в первые сутки и в течение Зч. на вторые сутки.

Через 5 мин. после внутрикаудатно- го введения антител к дофамину на электрокаудатограмме возникали одиночные и групповые высокоамплитудные (до 700 мкВ) колебания. Начиная с 10-й минуты регистрировали периоды высокоамплитудной активности продолжительностью 27 - 66 мин. с преобладанием колебаний тетаподобного диапазона с амплитудой до 600-700 мкВ. Мощность разряда достигала 1440 мкВ/с. Начиная с 12-й минуты после введения антител к дофамину наблюдали

Q

5

0

5

0

олигокинезию с периодами з астыва- ния. Через 17 мин развивалась устойчивая акинезия, отдельные периоды которой достигали 2ч 40 мин. Через 21 мин после введения антител возникал среднеамплитудный тремор головы и развивалась ригидность. Периоды высокоамплитудной активности и приступообразный тремор головы регистрировали на протяжении 22 ч 30 мин.

Применение предлагаемого способа позволяет повысить точность модели- рования паркинсонического синдрома по сравнению с известным за счет приближения модели к течению естес- венной патологии за счет воздействия на дофаминергические структуры хвостатых ядер.

Формула изобретения

Способ моделирования паркинсонического синдрома путем создания у животного недостаточности дофаминер- гической системы хвостатых ядер, отличающийся тем, что с целью повышения точности способа за приближения модели к течению естественной патологии, в хвостатые ядра мозга вводят 200 мкг гамма-глобулина, содержащего антитела к дофамину.

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии. Цель изобретения - повышение точности способа за счет приближения модели к течению естественной патологии. С этой целью в хвостатые ядра мозга животного вводят 200 мкг гамма-глобулина, содержащего антитела к дофамину. Применение способа позволяет повысить точность моделирования паркинсонического синдрома по сравнению с прототипом за счет приближения модели к течению естественной патологии за счет воздействия на дофаминергические структуры хвостатых ядер.