Способ определения чувствительности гонококков к антибиотику Советский патент 1990 года по МПК C12Q1/04 C12Q1/04 C12R1/36 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при лечении гонореи.

Цель изобретения - ускорение способа .

Способ осуществляют следующим образом.

Исследуемый материал высевают на мясопептонный или кровяной агар. Полученную чистую культуру суспензируют в физиологическом растворе до концентрации 10 ед. по оптическому стандарту мутности.

Тонким капилляром пастеровской пипетки засевают суспензию аутокуль- туры (0.15 0,25 мм) на квадратные блоки плотной питательной среды,

размещенные на стерильном предметном стекле. Блоки готовят из пластагара. ,После посева микроорганизмов блоки покрывают покровным стеклом.

Параллельно у больных отбирают пробы крови через 60 мин после внутримышечного или перорального введения одного вида антибиотика.

В подготовленные описанным способом несколько камер пастеровской пипеткой с тонким капилляром вводят методом серийных разведений сыворотку крови больного, содержащую антибиотик и плазмол. Разведение сыворотки крови в первой камере ряда составляет 1:2 (0,5 мл плазмола + 0,5 мл сыворотки больного). Число разведесл

оэ

СП

00

со го

ним в ряду определяется фармакокине- тическими особенностями антибиотика: ,8,16,32 и так далее (для аминогли- козидов максимальное разведение сыворотки составляет 1:128). Контрольные камеры содержат питательную среду, в состав которой входят человеческая сыворотка и биогенный стимулятор плазмол в равных объемных соотношениях. Камеры в чашках Петри помещают в термостат и культивируют при 37°С. Через 5 - 6 ч камеры вынимают из термостата и благодаря их прозрачности определяют рост гонококков в фазовоконтрастном микроскопе. В контрольной камере за это время вырастают микроколонии гонококков В опытных камерах роста возбудите- лей не будет в том случае, если в соответствующих разведениях сыворотки крови больного содержится достаточное для ингибации роста количество антибактериального препарата. Наибольшее разведение сыворотки больного, вызывающее задержку роста, является антибактериальным тестом сыворотки (АТС)„

При определении антибактериальной активности сыворотки (ААС) у больных установлено, что значения титра колеблются от 1:2 до 1:128. В результате определения чувствительности к назначаемым антибиотикам оказалось что наиболее высокие значения титра сыворотки (1:32 - 1:512) соответствуют чувствительным штаммам. При выделении штаммов возбудителей, сред нечувствительных к вводимому антибиотику, величина титра составляет 1:lf - 1:16. В случае выделения устойчивых штаммов ААС низкая (1:2) или не выявляется совсем.

Проведенные исследования показывают совпадение показателей ААС с клинической эффективностью проводимой антибиотикотерапии. При ААС, оцениваемой величиной титра 1:2, положительная динамика течения инфекции при начатом лечении пенициллином не выявлена ни у одного из 16 больных различными клиническими формами гонорейной инфекции (свежий острый, свежий подострый, свежий торпидный и хронический гонорейный уретрит). Не продолжая дальнейшего лечения пенициллином, так как оно было бы неэффективным, этим больным проведена замена пенициллина на другие анти

0

5

0

5

0

5

0

биотики - аминогликозиды широкого антибактериального спектра действия (канамицин, мономицин, гентамицин), к которым отмечена высокая чувствительность выделенных аутоштаммов гонококков.

Пример 1. Больной Т., 32 года, поступил в кожно-венерологичес- кое отделение больницы с диагнозом: свежий торпидиый гонорейный уретрит. При поступлении в стационар больного проведен посев отделяемого из уретры на общепринятые питательные среды - мясопептонный агар и кровяной агар - с целью выделения колоний аутоштамма гонококка. Через 1 сут после клинического и топического обследований пациенту назначено лечение согласно общепринятой схемы лечения. В качестве антибиотика назначен пенициллин, Через 1 ч после первой инъекции пенициллина (ударная доза 600 тыс.ЕД) у больного берут кровь из локтевой вены и центрифугируют. Сыворотку крови, содержащую антибиотик, и заранее приготовленный плазмол пастеровской пипеткой вводят в камеры из пласт- агара, покрытые предметными стеклами, в которые предварительно засеян суспензированный в физиологическом растворе до концентрации 10 ЕД по оптическому стандарту мутности ауто- штамм суточной культуры гонококка больного. Разведение сыворотки крови в первой камере ряда составляет 1:2 (0,5 мл сыворотки больного и 0,5 мл плазмола). Число разведений сыворотки а ряду от 1:2 до 1:128. Контрольные камеры содержат ауто- штамм4 гонококка и питательную среду из человеческой сыворотки (без антибиотиков) и биостимулятор плазмол в равных объемных соотношениях (1:1). Все микрокамеры в чашках Петри помещают в термостат и культивируют при 37°С. Через 6 ч камеры вынимают из термостата и исследуют под микроскопом наличие роста микроколоний гонококков во всех разведениях ряда и контроле. При бактериоскопии выявлен рост микроколоний аутоштамма гонококка з контроле, а также во всех разведениях исследуемой сыворотки с антибиотиком пенициллином от 1:128 до 1:2 включительно. Полученные результаты служат основанием для прекращения дальнейшего лечения данного больного пенициллином. Вольному назначен антибиотик канамицин, чувствительность к которому гонококков очень высокая (в максимальном разведении 1:6k). Результат - полное клиническое и этиологическое излечение больного.

Пример 2. Больной В., 2k года, поступил в кожно-венерологичес кое отделение больницы с диагнозом: хронический гонорейный уретрит. Из анамнеза установлено, что длительность заболевания составляет 5 нес. Ранее больной проходил курс лечения антибиотиком. После курса лечения в контрольном бакпосеве обнаружены гонококки. Таким образом, предшествующее лечение было неэффективным, что явилось причиной рецидива инфекции. При поступлении больного в стационар проведен бактериологической посев из уретры на питательную среду и через 2k ч в посеве выявлены колонии ауто- штамма возбудителя. Пациенту назначено лечение согласно общепринятой схеме. Через 1 ч после первой инъекции пенициллина у больного берут кровь из вены и центрифугируют. К сыворотке крови с антибиотиком добавляют плазмол, после чего смесь пастеровской пипеткой вводят в камеры из пластагара, покрытые предметными стеклами. 8 камеры предварительно засевают суспензированный в физиологическом растворе до концентрации 10 ЕД по оптическому стандарту мутности аутоштамм суточной культуры гонококка, выделенный от больного. Число разведений сыворотки в ряду от 1:2 до 1:128. Опытные и контрольные микрокамеры в чашках Петри пои культивируют при

из

термостата и проводят бактериоскопи- ческое исследование на наличие роста микроколоний гонококков. Результаты исследований показывают наличие роста микроколоний гонококков в контроле и в разведении ряда, начиная с и выше. Результаты исследова- ний явились основанием для отмены антибактериальной терапии пенициллимещают в термостат

370С. Через 5 ч камеры вынимают

ном данному больному и замены его антибиотиком - гентамицином, чувствительность к которому этого ауто- штамма гонококка была довольно высокой. Проведенное лечение канамицином позволило добиться полного клинического и этиологического излечения больного.

Q Способ может быть использован для определения чувствительности к антибиотикам различных микроорганизмов как в процессе лечения, так v для определения минимальной подавляющей 5 концентрации антибиотика методом двукратных разведений в соответствующей питательной среде.

Использование способа позволяет ускорить отбор эффективного антибио- 0 тика с учетом индивидуальных особенностей больного. Кроме того, способ обладает большой информативностью, так как позволяет наблюдать культуру возбудителя инфекции в микроскопе. 5 Определение чувствительности микропопуляций возбудителей гонореи к антибиотикам позволяет оценивать их гетерогенность по данному свойству, определять количество толерантных к ан- о тибиотику особей, характеризовать изменение морфологических и некоторых других свойств изучаемых микроорганизмов.

Формула изобретения

Способ определения чувствительности гонококков к антибиотику в процессе антибиотикотерапии больного гонорейной инфекцией путем выделения аутокультуры гонококков, инкубирования последней на плотной питательной среде в присутствии антибиотика и определения чувствительности гонококков к антибиотику по наличию или отсутствию роста, отличающий- с я тем, что, с целью ускорения способа, инкубирование проводят в течение 5 6 ч в присутствии сыворотки крови больного, содержащей антибиотик, использованный для лечения, разведенной плазмолом.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при лечении гонореи. Цель изобретения - ускорение способа. От больного гонореей выделяют культуру гонококков и высеивают на плотную среду. Параллельно отбирают пробы крови через 1 ч после введения антибиотика, отделяют сыворотку и готовят ряд разведений с помощью плазмола. Приготовленные разведения сыворотки добавляют к посевам гонококка и инкубируют в течение 5 - 6 ч. После инкубации посевы микроскопируют и при отсутствии роста культуры с определенным разведением сыворотки, содержащей соответствующее количество антибиотика, определяют минимальную подавляющую концентрацию антибиотика и соответственно - бактерицидную активность сыворотки крови. Из получаемых результатов делают вывод об эффективности использованного для лечения антибиотика.