Способ выявления изоферментов пероксидаз Советский патент 1990 года по МПК C12N9/00 

Изобретение относится к биохимии, в частности к энзимологии, и может быть использовано при выявлении пероксидазы и ее изоферментов„

Целью изобретения является повышение специфичности способа выявления г. изоферментов пероксидаз.

Способ реализуется следующим образом.

После электрофоретического разделения изоферментов в полиакриламидном . геле зоны изоферментов выявляют путем обработки г-еля раствором, содержащим, мас.%: гваякол 0,1-0,3$ этанол 15-30 0,01-0,05 М ацетатный буфер рН 5,0 , остальное, и в момент контакта раствора с полиакриламидным гелем в среду добавляют сульфид натрия до конечной концентрации 0,005 - 0,030%, а затем добавляют 1,5-3,0%-ный раствор перекиси водорода.

Пример Анализируемые образцы наносят на поверхность полиакрил- .амидногэ геля по 35)нкл на трубку.

Обычным путем проводят диск-электрофорез в щелочной системе, при этом используют неоднородную (прерывистую) разделяющую систему для концентрирования разделяемых веществ в узкой стартовой зоне.

В процессе проведения электрофореза готовят раствор, содержащий, мас.%: гваякол 0,2; этанол 20 0,01 М ацетатный буфер рН 5,0 остальное. Отдельно готовят 3%-ный раствор перекиси водорода и 0,010%-ный раствор сульфида натрия. Все растворы должны быть холоднымио Предварительно готовят сухие пробирки, которые перед окончанием электрофореза заполняют раствором гваякола и этанола в ацетатном буфере, а затем добавляют раствор сульфида натрия до конечной его концентрации 0,01%0 Полиакриламидные гели вынимают из электрофоретических трубок, инкубируют в пробирках 30 мин, а затем добавляют 3%-ный раствор перекиси водорода 0

(Л

с

ел

о со

00

со со

Рисунки гелей после проявления их на пероксидазную активность в среде предлагаемого состава выявляют зоны илоферментов пероксидазы, совпадающие по локализации при анализе пероксидаз, а также в смеси их с белками и другими гелесодержащими ферментами (гемоглобин и каталаза)«

Предлагаемый способ позволяет спе- пифически вьювить изоферменТ|Ный состав пероксидаз.

Формула изобретения

Способ выявления кзоферментов пероксидаз, включающий электрофоре- тйческое разделение в полиакриламид- НФ4 геле и определение зон локализации фермента путем инкубации геля в

Q

s

0

растворе, содержащем гваякол и буфер, и последующее добавление перекиси водорода, отличающий- с я тем, что, с целью повышения специфичности способа, раствор дополнительно содержит этанол, в качестве буфера используют 0,01-0,05 М ацетатный буфер рН 5,0, компоненты берут в следующем соотношении,мае.%:

Гваякол 0,1-0,3

Этанол15-30

О,01-0,05М

ацетатный буфер

рН 5,0 Остальное перед инкубацией в раствор добавляют сульфид натрия до конечной концентрации 0,005-0,030%, а перекись водорода используют в 1,5-3,0%-ной концентрации.

Изобретение относится к области биохимии. Целью изобретения является повышение специфичности способа выявления изоферментов пероксидаз. Для этого после электрофоретического разделения изоферментов в полиакриламидном геле зоны изоферментов выявляют путем инкубирования геля в растворе, содержащем, мас.%: гваякол 0,1-0,3, этанол 15-30 и 0,01-0,05 М ацетатный буфер PH 5,0 остальное, с последующим добавлением 1,5-3,0%-ного раствора перекиси водорода.