Способ определения реперфузионного повреждения миокарда после ишемии Советский патент 1990 года по МПК A61B5/00 A61B5/155 

Изобретение относится к экспериментальной биологии, преимущественно кардиологии, и может быть использовано для скрининга веществ, предупреждающих реперфузионные повреждения миокарда после ишемии.

i

Цель изобретения - повышение точности.

Способ осуществляется следующим образом.

В период реперфузии миокарда после 30-минутной тотальной ишемии измеряют активность эктоаденозинтрифосфатазы (экто-АТФазы) сердца спедую- щим образом: после 20 мин реперфузии, когда выход внутриклеточных АТФаз

прекращается, через сердце пропускают раствор, содержащий 150 мкМ АТФ, В оттекающем перфузате определяют концентрацию АТФ и рассчитывают скорость гидролиза АТФ в сердце.

П р и м е р 1, Спонтанно сокращающееся сердце белой крысы (масса сердца 1 г), извлеченное у наркотизированного эфиром животного, перфузируют через аорту раствором Рингера-Локка, насыщенным кислородом при рН 7,4 и температуре 37 С. Скорость перфузии устанавливают постоянной с помощью пе- ристальтическогонасоса (10мл /мин.г). После перфузии сердца в -чтих условиях в течение 20 мин - времени, необходимого для стабилизации параметров соксл j

о ч

ращения - в перфузат вводят АТФ до конечной концентрации в растворе 100-200 мкм/л,

Затем, в оттекающем от сердца растворе определяют содержание АТФ, которое по измерениям составляет 37мкм/л. Рассчитывают количество распавшейся АТФ (150 37 113 мкм/л) и скорость гидролиза экзогенной АТФ по формуле мкмоль/мин, г:

(А-Б)-П

где А - концентрация АТФ в перфузате до пропускания его через сердце, мкм/л; Б - концентрация АТФ в оттекаюше

от сердца перфузате мкм/л П коронарный проток мл/мин| М - масса сердца, j . Скорость гидролиза АТФ в данном примере составляет, мкмоль/мин г:

3Z1 12 юооТТ

1,13,

После 30 мин ишемии и 20 мин ре- перфузии содержание АТФ Б оттекающем перфузате составило 47 мкм/л. Отсюда, скорость гидролиза экзогенной АТФ равна 1,03 мкмоль/мин,г„ Различие достоверное, р 0,001, Измерение активности фермента и измерение сократительной активности сердца в период реперфузии позволило установить одновременное уменьшение этих параметQ

5

0

5

0

5

ров по сравнению с их значениями до ишемии.

Использование предлагаемого способа оценки реперфузионного повреждения: миокарда после ишемии дает возможность, не прибегая к разрушению ткани сердца, максимально точно оценить состояние мембранных ферментов клеток при ишемии и реперфузии, кроме того, наличие связи между биохимическим и физиологическим параметрами позволяет использовать данный метод как маркер состояния электромеханического сопряжения миокарда при патологии, а также изучать состояние мембранных ферментов сердца при длительных сроках проведения эксперимента.

Формула изобретения Способ определения реперфузионного повреждения миокарда после ишемии путем измерения активности ферментов в работающей сердце, отличающийся тем, что, с целыо повышения точности, измеряют -пвность 1К- тоаденозинтрифосфатазы путем пропускания через сердце раствора, содер- кащего 100-200 мкм/л аденозинтрифос- фориой кислоты, а в оттекающем перфузате определяют концентрацию оставшейся аденозинтрифосфорной кислоты и по разнице концентрации определяют активность мембранной эктоаденр- зинтрифосфатазы,,и при уменьшении ее активности в сравнении с нормой определяют реперфузионное повреждение миокарда «

Изобретение относится к экспериментальной биологии, преимущественно кардиологии, и может быть использовано для скрининга веществ, предупреждающих реперфузионные и ишемические нарушения в миокарде. Цель изобретения - повышение точности. Для достижения указанной цели в период реперфузии миокарда после 30-минутной тотальной ишемии измеряют активность эктоаденозинтрифосфатазы (экто-АТФазы) сердца следующим образом: после 20 мин реперфузии, когда выход внутриклеточных АТФазы прекращается, через сердце пропускают раствор, содержащий 150 мкМ АТФ. В оттекающем перфузате определяют концентрацию АТФ и рассчитывают скорость гидролиза АТФ в сердце. Точность повышается за счет исследования на целом сердце.