Способ определения индивидуальной терапевтической дозы Циклоспорина А при аллотрансплантации органов Советский патент 1990 года по МПК G01N33/49 

Изобретение относится к области медицины, в частности к трансплантации органов и тканей.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

У больного дважды в неделю в первые три месяца после операции и в дальнейшем не реже одного раза в месяц, берут 3 мл крови из вены до приема очередной дозы препарата. Кровь

помещают в пробирку с гепарином, немедленно центрифугируют при 1000 g, эритроциты отделяют от плазмы и дважды отмывают физиологическим раствором, центрифугируя суспензии при 3000 g. Часть отмытых эритроцитов гемолизиру- ют в деионизированной воде (в соотношении 1:10) и через 10 мин инкубации при 37 С в гемолизированных эритроцитах проводят измерение концентрации кальция и калия при помощи ионоселек- тивного анализатора электролитов. По.«ученные значения сравнивают с иэмере-, ниями по деионизированной воде, после чего рассчитывают внутриэритроцитар- Ное содержание этих ионов ,

В другой части концентрированных отмытых эритроцитов определяют индексы подвижности ионов калия и кальция. Для определения индексов подвижности используют скорость нарастания потен- Q циала на ионоселективном -электроде данного типа иона, которая при отсутствии этого иона в отмывающей среде Карактеризует скорость его выведения Из эритроцита. Измеряют потенциомет- f5 рически нарастание потенциала на электроде, помещенном в суспензию отмытых в физрастворе (при отсутствии калия и кальция) концентрированных эритроцитов, через каждые 2 с в 20 течении 1 мин. По кривой нарастания потенциала определяют среднюю ско- i рость и считают ее индексом подвижности данного иона в суспензиях (в усл.ед.).25

Таким образом, в качестве критериев направленного эффекта препарата используют показатели внутриклеточной концентрации кальция и индекса его подвижности в концентрированных 3 эритроцитах, так как циклоспорин А (Цс А) вызывает замедление выведения кальция из клеток, В качестве критериев токсического эффекта препарата используют показатели внутриэритроци- 3 тарной концентрации калия и индекса его подвижности в концентрированных суспензиях эритроцитов, так как они характеризуют появление патологической калиевой утечки.4

На основании полученных данных по указанным измерениям определяют адекватность дозы Цс А. Дозу считают достаточной, если концентрация кальция более Ммоль/л, концентрация калия 4 от 80 до 100 Ммоль/л, индекс подвижности кальция от 0 до 0,8 усл.ед., ин-. деке подвижности калия от 0 до 0,2 усл.ед. В случае, если индекс по- движности кальция превышает 0,8 усл.ед. и концентрация кальция имеет значение менее 10 Ммоль/л действие дозы Цс А считают недостаточным, а если индекс подвижности калия превышает 0,2 усл.ед. и концентрация калия снижается менее 80 Ммоль/л, говорят о токсичности дозы Цс А.

Пример 1. Больной X., 28 лет, произведена аллотрэксплантация сердца.

Назначен Цс А в дозе 600 мг в сутки. На четвертые сутки после операции состояние больной средней тяжести, признаки криза отторжения трансплантата отсутствуют. По предлагаемому способу доза Цс А достаточна: концентрация кальция 10 2Ммоль/л, индекс подвижности кальция 0,2 усл.ед., концентрация, калия 100 Ммоль/л, индекс подвижности калия 0 усл.ед. По известному способу концентрация Цс А в крови, измеренная методом PIA, составляет 535 нг/мл, т.е. так же соответствует достаточной дозе, через 5 сут при определении предлагаемым способом доза препарата достаточна: концентрация кальция 10 2Ммоль/л, индекс подвижности кальция 0 усл.ед., концентрация калия 95 Ммоль/л, индекс подвижности калия 0,2 усл.ед.

По известному способу концентрация препарата в крови в удовлетворительных пределах 480 нг/мл. Состояние больной без осложнений, признаков криза отторжения трансплантата или токсичности Цс А нет.

Еще через 3 сут предлагаемым способом определены следующие значения показателей: концентрация кальция 1СГ Ммоль/л, индекс подвижности кальция 0,8 усл.ед., концентрация калия 80 Ммоль/л, индекс подвижности Калия 0,1 усл.ед. При этом концентрация Цс А в крови 200 нг/мл. Состояние больной удовлетворительное, признаков токсического действия трансплантата нет, иммунологические исследования и данные биопсии трансплантата показывают отсутствие криза отторжения трансплантата, функция его удовлетворительна. По данным всех исследований доза препарата достаточна.

Вывод: на протяжении всего периода обследования предлагаемым способом определяли достаточность дозы Цс А, что соответствовало данным о клиническом состоянии больной и результатам измерения концентрации препарата в крови. I

П р и м е р 2. .Больному М., 50 лет произведена аллотрансплантация почки. Назначен Цс А в дозе 700 мг в сутки. Состояние больного после операции и функция трансплантата удовлетворительные.

На шестые сутки после трансплантации у больного были отмечены признаки

токсического действия Цс А. По предлагаемому способу были определены следующие значения параметров: концентрация кальция 10 Ммопь/л, индекс подвижности кальция 0,2 усл.ед.} концентрация калия 75 Ммоль/л, индекс подвижности калия 0,8 усл.ед. Это соответствовало проявлениям токсического действия препарата в клиническом состоянии больного: гипертоническому книзу, резкому подъему калия крови. Однако по известному способу концентрация Цс А в крови у больного имела значение 410 нг/мл и не могла быть от несена к токсическим (более 700 нг/мл значениям.

На одиннадцатые сутки после операции предлагаемым способом были определены следующие значения параметров: концентрация кальция 10 Ммоль/л, индекс подвижности кальция 1,0 усл.ед., концентрация калия 85 Ммоль/л, индекс подвижности калия 0,15 усл.ед.

Таким образом, по предлагаемому способу зарегистрировали недостаточность действия Цс А. В клиническом состоянии больного также отметили тенденцию к недостаточности иммуно- супрессивного действия Цс А: по анализу крови был определен лимфо- и лейкоцитоз. Однако по известному способу недостаточность действия данной дозы препарата не выявляли, так как концентрация его в крови была 470 нг/мл.

Через 3 сут по предлагаемому способу определили следующие значения параметров: концентрация кальция 10 гМмоль/л, индекс подвижности кальция 0,2 усл.ед., концентрация калия 80 Ммоль/л, индекс подвижности калия 0,1 Ммоль/л} что соответствовало достаточности дозы Цс А. В клиническом

Q 5

0

5

0

5

0

цип и функция трансплантата удовлетворительные .

Через две недели после операции у больной предлагаемым способом определили следующие показатели: концентрация кальция 10 Ммоль/л, индекс подвижности кальция 0,3 усл.ед., концентрация калия 65 Ммоль/л, индекс подвижности калия 0,25 усл.ед.

По данным значениям определили, что доза Цс А токсична. В клиническом состоянии больной также отмечали признаки токсичности: постоянное повышение артериального давления, не поддающееся коррекции лекарственной терапией. Однако по значению концентрации Цс А в крови 400 нг/мл (известный способ) токсичность данной дозы препарата не отметили.

Еще через 6 сут по предлагаемому способу токсичность дозы препарата была подтверждена: концентрация кальция 1ГГ2 Ммоль/л, индекс подвижности кальция 0,3 усл.ед., концентрация калия 50 Ммоль/л, индекс подвижности калия 0,25 усл.ед. Одновременно отметили ухудшение в клиническом состоянии больной: развился гипертонический криз (АД-210/110 мм рт.ст.) и появились боли в области сердца. Концентрация Цс А в крови повысилась до 620 нг/мл, но не имела значения,соответствующего по известному способу токсической дозе препарата. Дозу Цс А с этого момента больной стали снижать.

Вывод. при определении токсичности выбранной дозы препарата предлагаемый способ позволил своевременно решить вопрос о снижении дозы Цс А, несмотря на то, что концентрация его в крови не соответствовала характерным для токсической дозы значениям.

П р и м е р 4. Больной Ч., 33 лет,

Изобретение относится к медицине, в частности к трансплантации органов и тканей. Целью изобретения является повышение точности способа. Для достижения цели исследуют концентрации ионов кальция и калия и индексы подвижности данных ионов в эритроцитах крови. Достаточную дозу Цс А констатируют при концентрациях кальция более 10^-3 Ммоль/л, концентрации калия от 80 до 100 Ммоль/л, индексе подвижности кальция от 0 до 0,8 усл.ед., индексе подвижности калия от 0 до 0,2 усл.ед. Недостаточность дозы определяют при индексе подвижности кальция более 0,8 усл.ед. и концентрации его менее 10^-3 Ммоль/л. Токсичность использованной дозы определяют при индексе подвижности калия более 0,2 усл.ед. и его концентрации менее 80 Ммоль/л. Данный способ позволяет оперативно фиксировать изменения в характере действия препарата на организм и вовремя проводить коррекцию дозы. Способ может быть использован при сочетании лекарственной терапии. Использование данного способа позволяет улучшить результаты трансплантаций. Способ экономичен и пригоден для экспресс-анализа.

состоянии больного признаков токсичес-д§ был обследован после повторной аллокого действия Цс А или криза отторжения трансплантата не наблюдали.

Вывод: в примере показано, что предлагаемым способом можно зарегистрировать изменения в индивидуальной чувствительности больного к действию данной дозы Цс А, т.е. имеется повышение точности, по сравнению с известным способом (измерением концентрации Цс А в крови).

П р и м е р 3. Больной Н., 24 лет, была произведена аллотрансплантация почки. Назначен Цс А в дозе 600 мг в сутки. Состояние больной после опера0

5

трансплантации почки. Первая аллотрансплантация ему была произведена 14 лет назад. После второй трансплантации состояние больного и функция трансплантата были удовлетворительны. Доза Цс А составила 600 мг/сутки. Через семь дней после операции предлагаемым способом у больного определили следующие показатели: концентрация кальция 1 О 1 Ммоль/л, индекс подвижности кальция 1,4 усл.ед., концентрация калия 90 Ммоль/л, индекс подвижности калия 0,1 усл.ед., что соответствовало недостаточности дозы

Цс А. Клинически у больного отметили увеличение числа лейкоцитов крови. Однако по известному способу при концентрации Цс А в крови 910 нг/мл от- ,. мечали токсичность данной дозы препарата.

Через 3 сут исследования по предлагаемому способу подтвердили недостаточность дозы Цс А для больного: кон- IQ центрация кальция 10 4Ммопь/л5 индекс подвижности кальция 1,9 усл.ед., концентрация калия 100 Ммоль/п, индекс Подвижности калия 0 усл.ед. Клинически у больного сохранялся лейкоцитоз,, 15 отметили уменьшение диуреза. Однако концентрация Цс А в крови (известный Способ) по прежнему не соответствовала недостаточности дозы препарата.

В следующие 2 сут у больного были , отмечены клинические признаки криза отторжения трансплантата, нарастание уремической интоксикации, дальнейшее снижение диуреза, гиперкалийемия, увеличение и уплотнение трансплантата . Больной был переведен на лечение гемодиализом. По предлагаемому способу на этот момент имели следующие значения исследуемых параметров: кон20

25

определили токсичность дозы Цс А: концентрация кальция НГ 1Ыоль/л, индекс подвижности кальция 0,9 угл.ед., концентрация калия 55 Нмоль/л, индекс подвижности калия 1,0 усл.ед.

В связи с эрозивным гастритом для уменьшения протеолиза больной назнячи ли тиреокальцийтонин, который она получала в течение 4 сут. На спедувдщий день после начала приема тиреокаль- цийтонина (ТКТ) предлагаемым способом определили параметры: концентрация кальция 10 Ммоль/л, индекс подвижнос ти кальция 0,85 усл.ед,, концентрация калия 60 Ммоль/л, индекс подвижности калия 0,45 усл.ед.

Через 2 сут после начала приема ТКТ: концентрация кальция 10 Ммоль/л индекс подвижности кальция 1,7 усл.ед концентрация калия 80 Ммоль/ч, индекс подвижности калия 0,2 усл.ед. По данным значениям видно, что к этому моменту их токсического действия Цс А стало недостаточно. Концентрация Цс А в крови имела значение 51 5 кг/мл, доза препарата не изменялась.

На следующий день поед-iai аемым способом определили слецусмцис ,Но«ецентрация кальция Ммоль/л, индекс JQ ния показателей: концентрации кальция

-t,

-t,

подвижности кальция 2,0 усл.ед., кон- Ю Ммоль/л, индекс подвижности кчль- центрация калия 110 Ммоль/л, индекс подвижности калий 0,1 усл.ед., ч го подтверждать недостаточность действия препарата в данной дозе.зе

Вывод: предлагаемым способом недостаточность дозы Цс А, которая привела к необратимому кризу отторжения трансплантата у больного,, была определена ранее клинических признаков JQ этого криза, в то время как по известному способу действие данной дозы Цс А оценивали, как токсическое. Таким образом может быть достигнуто повышение точности в определении дозы 45 препарата.

100 Ммоль/л, индекс подвижности калия 0Э1 усл.ед., что подтверждало недоста точность дозы Цс А в данных условиях. Поэтому было рекомендовано прекратить прием тиреокапьцийтонина.

Через 4 сут после отмены ТКТ и сни жения дозы Цс А до 500 мг в сутки определили адекватность дозы препарата: концентрация кальция 10 Ммоль/л, индекс подвижности кальция 0,8 усл.ед., концентрация калия 100 Ммоль/л4 индекс подвижности калия 0,2 усл.ед.

Вывод: предлагаемый способ позволяет определять модулирование действия Цс А другими лекарственными агентами при неизменной дозе его, которое проявляется как изменение индивидуаль ной чувствительности к нему в данной клинической ситуации, чем отличается от всех других известных способов.

5

П р и м е р 5. Больной Ш.,26 лет, была произведена операция аллотранс- плантации сердца. Функция трансплантата и состояние больной после операции удовлетворительное.

Через месяц после операции состояние больной ухудшилось: отмечали резкую анемию, развитие язвенного гастрита с последующим желудочно-кишечным кровотечением. Доза Цс А составляла 600 мг/сут. Концентрация Цс А в крови 480 нг/мл. По предлагаемому способу

0

5

определили токсичность дозы Цс А: концентрация кальция НГ 1Ыоль/л, индекс подвижности кальция 0,9 угл.ед., концентрация калия 55 Нмоль/л, индекс подвижности калия 1,0 усл.ед.

В связи с эрозивным гастритом для уменьшения протеолиза больной назнячи- ли тиреокальцийтонин, который она получала в течение 4 сут. На спедувдщий день после начала приема тиреокаль- цийтонина (ТКТ) предлагаемым способом определили параметры: концентрация кальция 10 Ммоль/л, индекс подвижности кальция 0,85 усл.ед,, концентрация калия 60 Ммоль/л, индекс подвижности калия 0,45 усл.ед.

Через 2 сут после начала приема ТКТ: концентрация кальция 10 Ммоль/л5 индекс подвижности кальция 1,7 усл.ед., концентрация калия 80 Ммоль/ч, индекс подвижности калия 0,2 усл.ед. По данным значениям видно, что к этому моменту их токсического действия Цс А стало недостаточно. Концентрация Цс А в крови имела значение 51 5 кг/мл, доза препарата не изменялась.

На следующий день поед-iai аемым способом определили слецусмцис ,Но«ея п

-t,

М

Ю Ммоль/л, индекс подвижности кчль-

5

0

100 Ммоль/л, индекс подвижности калия 0Э1 усл.ед., что подтверждало недостаточность дозы Цс А в данных условиях. Поэтому было рекомендовано прекратить прием тиреокапьцийтонина.

Через 4 сут после отмены ТКТ и снижения дозы Цс А до 500 мг в сутки определили адекватность дозы препарата: концентрация кальция 10 Ммоль/л, индекс подвижности кальция 0,8 усл.ед., концентрация калия 100 Ммоль/л4 индекс подвижности калия 0,2 усл.ед.

Вывод: предлагаемый способ позволяет определять модулирование действия Цс А другими лекарственными агентами при неизменной дозе его, которое проявляется как изменение индивидуальной чувствительности к нему в данной клинической ситуации, чем отличается от всех других известных способов.

Использование предлагаемого способа позволяет проводить динамический контроль за действием Цс А в клинике при трансплантации органов. При этом разработаны критерии для определения характера действия Цс А (недостаточное, токсическое, удовлетворительное), которые позволяют по результатам исследования у конкретного больного провести подбор индивидуальной дозы препарата. Способ позволяет прогнозировать появление побочных эффектов от действия препарата при его передозировке (токсическое действие) и кризов отторжения трансплантата при ин- jg дивидуальной нечувствительности к дан- ,ной дозе (недостаточное действие), учитывает модулирование действия Цс А другими лекарственными средствами и

мость повторной трансплантации. Использование предлагаемого способа сн жает необходимость применения больны дорогостоящих методов лечения (искусственные органы), обследования (определение концентрации препарата, биопсийные исследования, ангиография и т.д.), а также сократить расходы на лекарственные препараты.

Формула изобретения Способ определения индивидуальной

(может быть использован при сочетании j терапевтической дозы циклоспорина А

с лекарственной терапией. Для получения информации о действии препарата не требуется использование длительных, сложных и дорогостоящих методов, что позволяет использовать его для экс- 20 пресс-диагностики.

В целом способ позволяет улучшить качество проведения иммуносупрессивной терапии и продлить функцию трансплантированного органа. Это в свою оче- 25 редь сокращает время нахождения больных в клинике в послеоперационный период, а также предотвращает необходипри аллотрансплантации органов путем динамического контроля за дозой препарата в крови больного, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, контроль осуществляют по определению концентрации и подвижности ионов калия и кальция в эритроцитах крови и при зн чениях концентрации соответственно 80-100 и более Ммоль/л, а индексов подвижности 0-0,2 и 0-0,8 усл ед. определяют дозу препарата терапевтической.

мость повторной трансплантации. Использование предлагаемого способа снижает необходимость применения больным дорогостоящих методов лечения (искусственные органы), обследования (определение концентрации препарата, биопсийные исследования, ангиография и т.д.), а также сократить расходы на лекарственные препараты.

Формула изобретения Способ определения индивидуальной

при аллотрансплантации органов путем динамического контроля за дозой препарата в крови больного, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, контроль осуществляют по определению концентрации и подвижности ионов калия и кальция в эритроцитах крови и при значениях концентрации соответственно 80-100 и более Ммоль/л, а индексов подвижности 0-0,2 и 0-0,8 усл. ед. определяют дозу препарата терапевтической.