Способ диагностики инфаркта миокарда Советский патент 1990 года по МПК G01N33/535 

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике инфаркта миокарда .

Целью изобретения является повышение специфичности диагностики инфаркта миокарда.

Способ осуществляют следующим образом.

Полученные с помощью гнбридомной технологии моноклональные антитела против митрхондриальной креатинфосфо- киназы (КФКмит) сорбируют на полистироловом планшете и инкубируют с сывороткой крови пациентов. Содержание КФКмит определяют по калибровочной кривой с помощью стандартных приемов иммуноферментного анализа (ИФА). На основании количественного показателя содержания КФКмит в сыворотке крови ставят диагноз о наличии инфаркта миокарда (ИМ).

Способ иллюстрируется примерами Пример 1. В 96-луночные план

.шеты из полистирола вносят поО,Змкг моноклональных антител в 200 мл фос- фатно-буферного физиологического раствора (ФБФР) в лунку и выдерживают 18 ч при 4°С, затем раствор слиi вают и планшет промывают 4 раза ФБФР, содержащим 0,05% Твин-20 (ФБФРТ), заливают на 30 мин ФБФРТ, содержащим 0,1% человеческого сывороточного альбумина, после чего планшеты готовы

к непосредственному тестированию. Пробы сывороток крови или очищенный препарат КФКмит, используемый для построения калибровочной кривой, вносят по 200 мкл в лунку и инкубируют 3 ч при 37°С, после инкубации реакционную смесь сливают и 4 раза промывают ФБФРТ, после чего в лунки вносят конъюгат (КФКмит, конъюгиро з

L

«сл

Х

N9

JO

ванная методом периодатного окисления с пероксидазой хрена) и инкубируют 1 ч при 37°С, добавляют индикаторный раствор, в состав которого входит перекись водорода и хромоген ортофенилендиамин, н определяют интенсивность окраски при длине волны 492 нм. Количество КФКмит в тестируемой пробе обратно пропорционально интенсивности окраски. Чувствительность метода составляет не менее 10 нг/мл.

Для построения калибровочной кривой в лунки вносят сыворотку, полу- ченную от группы здоровых доноров. На этом фоне титруется КФКмит таким образом, чтобы охватить диапазон от 1000 до 0 нг/мл.

Для каждой калибровочной или не- известноп пробы рассчитывают В/В0, гд В - средняя интенсивность окраски в пробах, содержащих калибровочные или неизвестные образцы,- Б0 - средняя интенсивность окраски в пробах, соде жащих 0 нг/мл КФКмит.

Для определения содержания КФКмит в тестируемых пробах строят график зависимости В/В0 от концентрации КФКмит в координатах logit-log (ось

В/В0

ординат logit В/В0 In (

1 - В/В,

-),

ось абсцисс - логарифмическая. Концентрацию КФКмит в неизвестных пробах оп- 5 ределяют на основании значений logit В/В0 на калибровочном графике.

При определении содержания КФКмит в сыворотке крови здоровых доноров и пациентов,перенесших ИМ,были получены результаты, представленные в таблице.

В пробах № 1-5 сыворотки крови здоровых допоров logit 2,768 + 0,239, в пробах № 6-11 сыворотки крови пациентов, перенесших ИМ за 24-48 ч до определения, logit 1,270+0,160, концентрация КФК равняется 7 и 130 нг/м соответственно, если брать среднее значение, определенное по калибровочному графику. В качестве граничных значений содержания КФКмит у здоровых доноров и пациентов, перенесших ИМ, установлены показатели до 50 и свыше 100 нг/мл соответственно. При значениях, близких к граничным, необходи- мо повторение опыта и привлечение результатов других методов диагностики.

Примечание. четырем параллельным тическая плотность, ская ошибка средней В/В0

logit In

1 - В/В„

Пример 2. Способ определения содержания КФКмит в сыворотке крови осуществляют аналогично примеру 1. Тестируют сыворотку пациентов с ножевым ранением, желудочным кровотечением, нарушением сердечного ритма, артериальной гипертонией, бронхиальной астмой и при инфаркте миокарда через 72 ч после развития некроза. Во всех случаях содержание КФКмит не отличалось от ее содержания в сыворотках крови контрольной группы, составленной из здоровых доноров.

Таким образом, повышение специфичности способа диагностики инфаркта миокарда достигается за счет количественного определения именно КФКмит в сыворотке крови человека, тогда как изменения активности других форм кре- атинфосфокиназы, регистрируемые при диагностике инфаркта миокарда известным способом, могут быть обусловлены заболеваниями, не связанными с сердечно-сосудистой патологией.

Формула изобретения

Способ диагностики инфаркта миокарда, включающий определение содержания креатинфосфокиназы в сыворотке крови человека, отличающийся

тем, что, с целью повышения специфичности диагностики, в сыворотке крови определяют содержание мнтохондриаль- ной креатинфосфокиназы с помощью

158213

иммуноферментного анализа с примене-и при концентрации фермента свьпие

ннем моноклональных антител против100 нг/кп диагностируют инфаркт миомитоховдриальной креатиифосфокиназыкарда.

Изобретение относится к медицине, а именно к области диагностики инфаркта миокарда. Цель изобретения заключается в повышении специфичности диагностики инфаркта миокарда. Сущность изобретения состоит в том, что с помощью иммуноферментного анализа с использованием моноклональных антител против митохондриальной креатинфосфокиназы, определяют ее содержание в сыворотке крови и при величине концентрации фермента свыше 100 нг/мл диагностируют инфаркт миокарда, что позволяет повысить специфичность диагностики инфаркта миокарда, за счет исключения заболеваний, не связанных с сердечно-сосудистой патологией.