СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КРАТНОМЕЧЕННЫХ ТРИТИЕМ ПО ДВОЙНЫМ СВЯЗЯМ НЕНАСЫЩЕННЫХ ПРОСТЫХ ЛИПИДОВ Советский патент 1994 года по МПК C07B59/00 

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения кратномеченных тритием липидов, которые могут найти применение в биохимических исследованиях.

Цель изобретения - увеличение молярной радиоактивности, повышение выхода и расширение ассортимента кратномеченных тритием ненасыщенных липидов.

Сущность изобретения иллюстрируется приведенными ниже примерами. Подбор оптимальных условий проведения процесса на примере метил-[5,6,8,9,11,12,14,15-³Н₈] -арахидоната приведен в табл. 1-5.

Время реакции 30 мин, соотношение катализатор - вещество 1,5: 0,5 мг/кг, давление трития 400 гПа при 23^оС, растворитель 0,2 мл смеси гептан - диоксан 4: 1, анализ методом ГЖХ.

Соотношение палладий - свинец 1: 0,7, условия реакции см. табл. 1.

Добавка метанольного раствора боргидрида натрия 0,15 мл, условия реакции см. табл. 2.

Условия реакции см. табл. 3, растворитель гептан - диоксан 4: 1.

Условия реакции см. табл. 4.

П р и м е р 1. 5 мг 5,8,11,14-эйкозатетраиновой кислоты растворяют в 0,5 мл метанола и метилируют 1 мл раствора диазометана в диэтиловом эфире в течение 5 мин под аргоном. Раствор упаривают досуха в токе аргона. Полученный метиловый эфир растворяют в 0,5 мл смеси гептан - диоксан 4: 1, переносят в ампулу объемом 7,0 мл и помещают туда 15 мг катализатора и магнитную мешалку. Содержимое ампул замораживают жидким азотом и вакуумируют до давления 1 х 10^-3 гПа. Затем ампулу заполняют тритием до давления 400 рПа, нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение 30 мин. Ампулу вновь замораживают жидким азотом и удаляют избыточный тритий вакуумированием, катализатор отделяют фильтрованием реакционной смеси через 100 мг силикагеля Л (ЧССР) 100-160 мкм элюирование 2 мл бензола. Лабильный тритий удаляют трехкратным упариванием меченого метиларахидоната, растворенного в 2 мл-порциях метанола при пониженном давлении. Препатативную очистку осуществляют методом ВЭЖХ, хроматограф "Gilson" (Франция) колонка 4,6 х 250 мм, фаза Sezvachrom Octadecyl Si 100. Продукты реакции растворяют в 0,2 мл смеси метанол - вода 4: 1, заводят на колонку и элюируют 85% -ным водным метанолом, скорость потока 1 мл/мин, детекция по радиоактивности, время удерживания 12,7 мин. Анализ метилового эфира на всех стадиях получения и очистки меченого препарата проводили методом ГЖХ на хроматографе Chrom 5 (ЧССР), колонка 3 х 1200 мл, фаза Silor 10 C носитель Chromosorb W-AW, 100 - 120 меш, азот, 20 мл/мин, в программе: 200^оС (6 мин) в градиенте 10^оС/мин до 240^оС и при 240^оС 10 мин (время удерживания идентично времени удерживания стандартов).

Характеристики меченого метиларахидоната приведены в табл. 6 (опыт 2). Гидролиз метилового эфира до свободной кислоты осуществляют щелочным гидролизом в 5 мл смеси диоксан - метанол - водный 1 М КОН (1: 1: 1) в атмосфере аргона в течение 6 ч.

Приготовление катализатора с соотношением палладий - свинец (1: 0,7 мг/кг). 100 мг 5% Pb/BaSO₄ растирают в ступке, суспендируют в 2 мл метанола ультразвуковой обработкой взвеси в течение 5 мин. Охлаждают до 20^оС, добавляют 0,55 мл раствора диацетата свинца в метаноле (10 мг/мл) и обрабатывают ультразвуком в течение 1 мин. Охлаждают до 20^оС и добавляют 0,3 мл раствора боргидрада натрия в метаноле (20 мг/мл), во время этой процедуры и до полного прекращения выделения водорода взвесь подвергают ультразвуковой обработке. Катализатор декантируют, добавляют 2 мл метанола, вновь суспендируют ультразвуком в течение 30 с, центрифугируют при 5000 q в течение 5 мин. Осадок высушивают в токе аргона и помещают в бокс.

П р и м е р ы 2-4. Кратномеченные метиловые эфиры дигомо- γ -линоленовой (время удерживания при ВЭЖХ 17,6) мин и тимнодоновой кислоты (время удерживания при ВЭЖХ 9,3 мин) получают аналогично методике, приведенной в примере 1, из 8,11,14-эйкозатрииновой, 5,8,11,14,17-эйкозапентаиновой и 5,6-дигидроарахидоновой кислот. Их характеристики приведены в табл. 6 (опыты 1, 3, 4).

П р и м е р 5. 1,4-Диацетатбутиндиода селективно гидрируют тритием по методике, приведенной в примере 1. Катализатор отделяют фильтрованием через 100 мг силикагеля Л, 100-160 мкл (ЧССР) элюирование 2 мл этилацетата. Препаративную очистку осуществляют колоночной хроматографией через 1 г силикагеля Силасорб 600 (30 мкн) элюирование смесью гексан - эфир 9: 1. Фракции анализируют методом ГЖХ, фаза 10% ОУ-275, колонка 3 х 1200 мм, Chromosorb W-AW, 80-100 меш, температура колонки 130^оС, время удерживания исходного соединения 7,8 мин, диацетатбутендиола 7,0 мин, диацетатбутандиола 6,4 мин, диаце Фракции, которые содержат 1,4 диацетатбутендиол, объединяют, упаривают, растворяют в метаноле. Характеристики меченого препарата приведены в табл. 6 (опыт 5).

Исходное количество 5 мг, условия реакции см. табл. 4.

Гидролиз метиловых эфиров до свободных кислот осуществляли в 5 мл смеси диоксан - метанол - водный 1 н. КОН (1: 1: 1) в атмосфере аргона в течение 6 ч. Выходы меченных свободных кислот составляли 95-98% , а молярные радиоактивности были тождественны приведенным в табл. 6.

Таким образом, реализация описываемого способа позволяет за счет восстановления кислот в виде сложных эфиров с использованием специальным образом приготовленного палладиевого катализатора повысить выход [5,6,8,9,11,12,14,15-³Н₈] -арахидоновой кислоты с 53% в известном способе до 95% (при этом повышается молярная радиоактивность с 6,5 ПБк/моль до 7,4 ПБК/моль) и расширить ассортимент кратномеченных тритием ненасыщенных липидов.

(56) В. П. Шевченко и др. Получение кратномеченных полиненасыщенных жирных кислот селективным восстановлением из ацетиленовых производных газообразным тритием. - Радиохимия, 1986, т. 26, N 1, с. 67-72.

Изобретение относится к меченым соединениям, в частности к получению кратномеченных тритием по двойным связям ненасыщенных простых липидов. Цель изобретения - увеличение молярной радиоактивности, повышение выхода и расширение ассортимента меченных тритием ненасыщенных липидов. Получение ведут селективным гидрированием соответствующих алифатических спиртов или метиловых эфиров жирных кислот газообразным тритием в органическом растворителе, предпочтительно в смеси гептан-диоксан 4: 1 в присутствии катализатора. В качестве последнего используют 5% Pd/BaSO₄, последовательно обработанный метанольными растворами диацетата свинца в соотношении свинец - палладий 1: 0,5 - 1 мг/кг к борогидрида натрия в соотношении NaBH₄ - катализатор 0,6: 50 мг/кг. Процесс ведут при массовом соотношении катализатор - исходное вещество 2 : 6: 1. После выделения в случае необходимости ненасыщенные липиды, содержащие сложноэфирную функцию гидролизуют до свободных кислот. Выход [5,6, 8,9, 11, 12, 14, 15- 15-³H₈ ] -арахидоновой кислоты до 95% , при повышении молярной радиоактивности до 7,4 ПБК/моль. 1 з. п. ф-лы, 6 табл.

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КРАТНОМЕЧЕННЫХ ТРИТИЕМ ПО ДВОЙНЫМ СВЯЗЯМ НЕНАСЫЩЕННЫХ ПРОСТЫХ ЛИПИДОВ селективным гидрированием ацетиленовых предшественников газообразным тритием в органическом растворителе в присутствии палладиевого катализатора, обработанного диацетатом свинца, отличающийся тем, что, с целью увеличения молярной радиоактивности, повышения выхода и расширения ассортимента меченных тритием ненасыщенных липидов, в качестве катализатора используют 5% -ный Pd/BaO₄, последовательно обработанный метанольными растворами диацетата свинца в соотношении свинец : палладий 1 : 0,5 - 1 мг/мг и борогидрида натрия в соотношении NaBH₄ : катализатор 0 - 6 : 50 мг/мг, процесс ведут при массовом соотношении катализатор : исходное вещество 2 - 6 : 1, используя в качестве предшественников соответствующие алифатические спирты или метиловые эфиры жирных кислот, после выделения в случае необходимости ненасыщенные липиды, содержащие сложноэфирную функцию, гидролизуют до свободных кислот. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют смесь гептан - диоксан 4 : 1.