ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ Советский патент 1994 года по МПК C12N1/20 

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к производству питательных сред.

Целью изобретения является повышение ростовых свойств среды.

П р и м е р 1. Способ приготовления ферментативного гидролизата плодов коровы.

Ферментативный гидролизат готовят из плодов коровы, являющихся технологическим отходом мясоперерабатывающих предприятий. Плоды здоровых коров преимущественно ранних сроков развития, выбракованных по технологическим причинам (травмы, неинфекционные заболевания и др.) представляют собой нежное, чистое, не требующее специальной обработки и очистки сырье.

Плоды взвешивают, опускают в кипящую воду из расчета 500 г на 1 л воды. Кипятят в течение 30 мин, отделяют от костей, измельчают на электрической мясорубке. Бульон остужают до 48±2^оС, добавляют безводный углекислый натрий из расчета 3 г на 1 л бульона, рН должен быть 7,9±0,1. Полученный фарш заливают бульоном, добавляют поджелудочную железу в количестве 100 г на 1 л бульона и хлороформ для консервации 15-20 мл на 1 л.

Ферментативный гидролиз проводят при 37^оС в течение 8±1 сут, ежедневно проверяя количество аминного азота, по прекращению нараcтания аминного азота судят об окончании ферментативного процесса. Прозрачный слой декантируют (отсасывают при помощи сифона), осадок фильтруют через полотно. Фильтрат смешивают с декантированным гидролизатом, добавляют хлороформ в количестве 15-20 мл на 1 л гидролизата и хранят герметически закрытым при 5 ±1^оС.

Полученный гидролизат имеет сухой остаток 84 г/л, содержит 11,4 г/л общего азота, 7,6 г/л аминного азота.

Химическая характеристика и аминокислотный состав гидролизатов по изобретению и прототипу представлены в табл. 1 и 2.

Из таблицы видно, что в ферментативном гидролизате плодов коровы присутствуют все аминокислоты в сравнении с лучшим образцом основного раствора Хоттингера (прототип).

П р и м е р 2. Использование среды.

Берут 110 г ферментативного гидролизата плодов коровы с содержанием аминного азота 7,6 г/л, добавляют 0,3 г/л хлористого натрия, дистиллированную воду до 1,0 л и кипятят в течение 20 мин. Устанавливают рН 7,2. Разливают в стерильные флаконы по 100,0 мл. Стерилизуют автоклавированием при 110^оС 30 мин. В полученной среде содержание аминного азота 0,8 г/л.

Приготовленную питательную среду во флаконах по 100,0 мл засевают 24-часовой суспензией вакцинного штамма чумного микроба Yersinia pestis EV в концентрации 1,0 ˙10⁹ м кл (1 мл 1˙ 10⁷ м. кл.), выращивают в течение 48 ч при 28^оС.

Данные ростовых и морфологических свойств вакцинного штамма чумного микроба Y.pestis EV при 28^оС приведены в табл.3 в сравнении с прототипом.

Из табл.3 видно, что выход биомассы на испытуемой жидкой среде - бульоне из гидролизата плодов коровы - превышает выход биомассы на бульоне Хоттингера (прототипе).

П р и м е р 3. Готовят среду в соответствии с примером 1, но компоненты берут в следующем соотношении, г/л:
Ферментативный
гидролизат плодов коровы 140,0 Хлористый натрий 0,35 Дистиллированная вода до 1,0 л
Устанавливают рН 7,6. Приготовленную питательную среду во флаконах по 100,0 мл засевают 24-часовой суспензией холерного вибриона Vibrio cholerae Р-1 в концентрации 1,0 ˙10⁹ м. кл. (в 1 мл 1 ˙10⁷ м. кл.), выращивают в течение 24 ч при 37^оС.

Данные ростовых и морфологических свойств холерного вибриона V.cholerae Р-1 при 37^оС приведены в табл.4.

Из табл.4 видно, что выход биомассы на испытуемой жидкой среде - бульоне из гидролизата плодов коровы - превышает выход биомассы на бульоне Хоттингера.

П р и м е р 4. Готовят среду в соответствии с примером 1, но компоненты берут в следующем соотношении, г/л:
Ферментативный
гидролизат плодов коровы 170,0 Хлористый натрий 0,5
Дистиллированная вода до 1,0 л
Устанавливают рН 7,4. В полученной среде содержание аминного азота 1,2 г/л.

Приготовленную питательную среду во флаконах по 100,0 мл засевают 24-часовой суспензией кишечной палочки 3 штаммов - E.coli C 600, E.coli W 3110, E.coli AB 1157 - в концентрации 1˙ 10⁹ м кл (в 1 мл 1˙10⁷ м кл). Выращивают в течение 24 ч при 37^оС.

Данные ростовых и морфологических свойств штаммов кишечной палочки - E. coli C 600, E.coli W 3110, E.coli АВ 1157 - приведены в табл.5 в сравнении с прототипом.

Из табл.5 видно, что выход биомассы на испытуемой жидкой среде - бульоне из гидролизата плодов коровы - превышает выход биомассы на бульоне Хоттингера.

П р и м е р 5. Предложенную среду можно использовать для поверхностного выращивания микроорганизмов, т.е. в виде плотной среды.

В жидкую среду, имеющую состав по примеру 2, дополнительно вводят, г/л: Агар-агар 15-20
Молибденово- кислый аммоний 0,5-1,0
Натрий фосфор-
нокислый двузаме- щенный 1,0-2,0
Устанавливают рН 7,2. Разливают во флаконы, стерилизуют автоклавированием при 110^оС 30 мин. Разливают в чашки Петри, засевают 24-часовой суспензией вакцинного штамма чумного микроба V.pestis EV в концентрации 1 ˙10² на чашку для определения показателя прорастания. Для определения выхода биомассы засевают 24-часовой суспензией Y.pestis EV в концентрации 1,0 ˙10⁹ м.кл. во флаконы со скошенным агаром в количестве 50,0 мл.

Показатели прорастания, выход биомассы и дифференцирующие свойства чумного микроба на испытуемой и контрольной (по прототипу) средах представлены в табл.6.

Из табл. 6 видно, что на плотной среде, приготовленной из гидролизата плодов коровы, вырастает 84,5±6,8 типичных колоний чумного микроба, выход биомассы 5,1 ±0,1 млрд микробных тел с 1 мл среды, а на контрольной среде (агаре Хоттингера) 59,2 ±4,8 колоний, выход биомассы 4,0± 0,3 млрд микробных тел с 1 мл.

Таким образом, показатель прорастания и выход биомассы на плотной среде из гидролизата плодов коровы превышает результаты, полученные на лучшем образце контрольной среды - агаре Хоттингера.

Питательная среда отличается простотой приготовления, низкой стоимостью, высокопитательными свойствами.

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к производству питательных сред. Цель изобретения - повышение ростовых свойств среды. Для приготовления питательной среды используют хлористый натрий 0,3 - 0,5 г, ферментативный гидролизат плодов крупного рогатого скота 110 - 170 г, дистиллированную воду до 1 л. Гидролизат готовят из плодов коровы с помощью ферментов поджелудочной железы. Полученный гидролизат содержит 11,4 г/л общего азота, 7,6 г/л аминного азота, он содержит все аминокислоты. Питательную среду можно использовать для поверхностного выращивания микроорганизмов при добавлении в вышеописанный состав агар - агара в количестве 15 - 20 г/л воды. 6 табл.

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ, содержащая белковую основу, хлористый натрий и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения ростовых свойств среды, в качестве белковой основы она содержит ферментативный гидролизат плодов крупного рогатого скота при следующем соотношении компонентов, г/л:
Ферментативный гидролизат плодов 110 - 170
Хлористый натрий 0,3 - 0,5
Дистиллированная вода До 1 л