Способ определения токсического повреждения лейкоцитов Советский патент 1990 года по МПК G01N33/49 G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а более конкретно к иммунологии и физиологии.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа.

При осуществлении способа пробы крови после инкубации с исследуем м токсическим веществом дополнительно отмзшают двукратным, центрифугированием, добавляют люминол в концентрации и, измеряя интенсивность хемилюминесценции (ХЛ) по сравнению с контролем, судят о токсическом повреждении лейкоцитов..

Пример, В полистироловые кюветы вносили по 25 мкл крови и различные концентрации нуклеината натрия или физраствора (контроль), инкубировали в течение 1ч при , затем половину проб отмыли от нуклеината натрия путем центрифугирования 2 раза

I

по 7 мин при 1000 об/мин, а другую половину проб не oт ывaли. В контроле пробы инкубировали и отьывали с физраствором. Затем добавляли Ш мкл люминола. Последний готовили следующим образом. Навеску люминола фирмл Serva .(10 мг) суспендировали в 1 мл физраствора (рН 7,2), перемешивали, оставляли при на 1-2 ч для осаждения нераствори ых частиц, надосадоч- ную жидкость отфильтровывали через фильтры диаметром пор 0,2-0,45 мкм и использовали в реакции ХЛ, Концентрация люминола в профильтрованном растворе соответствовала примерно -10 и концентрации люминала, растворенного в ДМСО по известному способу. ХЛ измеряли на хемилюминометре 1КВ- -1250 Wallac OY (Финляндия) и выражали в у-словшлх световых единицах через 15 и 30 мин инкубации при 37°С, ИнСП

00

4 4 Р1

тенсивность ХЛ определяли как.свето- сумму трех измерений. Результаты учитывали по степени угнетения ХП в кюветах с аллергенами;по сравнению с таковой в кюветах без них. О наличии сенсибилизации к исследуемому аллергену судили по величине коэффициент а (К) изменения светосум№.ХЛ. За положительный результат (наличие аллергической альтерации лейкоцитов и, в связи с этим, снижение ХЛ в пробах с АГ) принимали К, равное 0,80 и ниже, 0т- рицательный результат расценивали при К, равном 0,81-1,19.

Результаты изучения действия нукле- ината натрия на клетки крови привбде- ны в таблице, .

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и физиологии. Целью изобретения является повышение чувствительности способа определения токсических повреждений лейкоцитов. Способ позволяет выявлять сенсибилизацию организма к различным аллергенам и химическим веществам. Существенные признаки изобретения: кровь инкубируют без индуктора хемилюминесценции /ХЛ/ в присутствии исследуемого фактора

пробы крови после инкубации их с исследуемым веществом отмывают дважды центрифугированием, добавляют люминол в концентрации 10 -4 - 10 -3 М и измеряют интенсивность хемилюминесценции по сравнению с контролем.

0,38+0,121,08+0,09

,18

0,69+0.121,31+0,121,06+0,11

Из таблицы видно, что ХЛ проб крови, не отмз1тых от нуклеината натрия, в дозе 10 мг/мл наблюдается гасящее ХЛ действие нуклеината натрия за счет вероятной химической реакции с люми- нолом. После отмошки от препарата выявлено стимулирующее действие нуклеината натрия в дозе I,0 мг/мл на лей- коциты крови, что проявилось в повышении К более 1,51. Таким образом, предлагаемый способ позволяет оценить действие различных веществ на функцио-.. напьную активность лейкоцитов крови.

Способ предполагает использование микрообъемов крови, поэтому может быть использован в педиатрии или у мелких животных. Способ позволяет также выявить сенсибилизацию организма

к различным аллергенам и химическим

веществам, поскольку исключен этап

,18

предварительной инкубазции крови с ин- дуктом ХЛ, способный изменить реактивность гранулоцитов к исследуемому веществу.

Формула изобретения

Способ определения токсического повреждения лейкоцитов, включающий инкубацию цельной крови с токсическим веществом, добавление люминола и измерение уровня хемилюминесценции пробы по сравнению с контролем, о т л и- чающийся тем, что с целью по- вьпиенкя чувствительности способа, пробы крови после инкубации с исследуе- ым веществом дополнительно отм 1вают двукратным: центрифугированием, а лю- используют в концентрации 10 ,