Способ определения сенсибилизации к аллергенам Советский патент 1990 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии, и может быть использовано для выявления сенсибилизации организма к аллергенам.

Целью изобретения является упрощение и повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Лимфоциты выделяют из 2 мл гепари- низированной крови (20 ед/мл) на градиенте плотности 1,077 г/см3 по методу Бойум (Воушп). Лимфоциты двукратно отмывают в растворе Хенкса без индикатора, центрифугируя 5 мин при 1500 об /мин, и под считывают число клеток в камере Горяева. Раствором Хенкса доводят концентрацию клеток до 1,0- 1,5 млн/мл и помещают в пластиковые кюветы по 1 мл суспензии клеток. Выдерживают 5 мин в биостате хемилюмино- метра (ХЛМ1Ц-01) при 37°С . Измеряют

уровень спонтанной хемилюминесценции (ХЛ) клеток за 500 с в импульсах в секунду, вносят в пробу 20 мкл раствора аллергена в конечной концентрации 0,01-0,05 мкг/мл, разведенного на растворе Хенкса или физрастворе, инкубируют 10-20 мин в биостате при 37 С и измеряют ХЛ в течение 500 с. При возрастании показателя ХЛ на 11% и более после инкубации с аллергеном диагностируют сенсибилизацию к данному аллергену.

Пример 1. Больной М, Посту- пил в клинику с жалобами на приступы затруднения дыхания до 3-4 раз в сутки, кашель с трудноотделяемой мокротой, слабость, недомогание. В результате клинико-лабораторного обследования установлен диагноз: бронхиальная астма I ст., течение средней тяжести, фаза обострения, хронический бронхит, дыхательная недостаточность Т ст. Хеел

О

со VI

ел

милюминометрия лимфоцитов по предлагаемому способу покачала сенсибилизацию больного к стафилококковому аллергену (} табл.1).

Как видно из данных таблицы, прирост уровня ХЛ на 11% наблюдался на стафилококковый аллерген, что подтверждается результатами кожных проб и ИИМЛ. Прирост уровня ХЛ на 7% не сопровождается изменением кожных проб И ИИМЛ, что свидетельствует об отсутствии сенсибилизации. После проведения курса специфической десенсибили- зирующей терапии этот больной выпивай из клиники в удовлетворительном состоянии.

Пример 2. Больной Г. Поступил в клинику с жалобами на сухой кашель без мокроты, носящий приступообразный характер, периодическую заложенность носа, недомогание. На основании клинико-лабораторного обследования больному поставлен диагноз: хро Нический обструктивный бронхит в фазе обострения, ЛСН I ст. Сенсибилизация к бытовым аллергенам. Хемилюминомет- лимфоцитов крови по предлагаемому способу выявила сенсибилизацию к ал- Бергену пыльцы тимофеевки и библиотечной пыли № 133, при этом использова- лись различные дозы каждого аллергена Q,01-0,05i 0,005; 0,1 мкг/мл (табл.2)

Специфическая десенсибилизирующая терапия привела к улучшению состояния больного и выписке его из клиники (положительный результат способа).

Пример 3, Больной П. Посту- лил в клинику с жалобами на слабость, потливость, периодические высыпания

на коже, боли в области сердца, ХЛ по предлагаемому способу с набором аллергенов показала повышение показателя на 6% на стафилококковый аллерген и на 7% на аллерген кишечной палочки (отрицательный результат). Кожные пробы также отрицательные. У больного обнаружены положительные ревмапробы. При дальнейшем клинико-лабораторном обследовании установлен диагноз: ревматизм, активная фаза, I ст. активности. Курс противоревматической терапии привел к улучшению состояния больного и выписке его из клиники. Всего обследовано 25 больных с сенсибилизацией к стафилококковому аллергену, аллергену библиотечной пыли и др. Изобретение позволяет увеличить точность выявления сенсибилизации на 78% - 100%, а также упростить способ за счет уменьшения числа реактивов, этапов исследования, отсутствия необходимости применения токсичных реактивов и уменьшения до 40 мин времени исследования.

Формула изобретения

Способ определения сенсибилизации к аллергенам путем инкубации лейкоцитов с аллергеном и без него с последующим физико-химическим исследованием образцов, отличающий - с я тем, что, с целью упрощения и повышения точности способа, выделяют фракцию лимфоцитов, измеряют их хе- милюминесценцию и при увеличении уровня хемилюминесценции после инкубации с аллергеном на 11% и более по сравнению с исходной определяют сенсибилизацию к аллергену0

Изобретение относится к медицине, в частности к аллергологии, и может быть использовано для выявления сенсибилизации организма к аллергенам. Целью является упрощение и повышение точности способа. Способ заключается в том, что из крови больного выделяют лимфоциты и определяют их спонтанную хемилюминесценцию и хемилюминесценцию после 10 - 20 мин инкубации с 20 мкл р-ра аллергена (0,01 - 0,05 мкг/мл) и при возрастании уровня хемилюминесценции на 11% и более после инкубации с аллергеном диагностируют сенсибилизацию к данному аллергену. Изобретение позволяет с точностью 100% в течение 40 мин. проводить выявление сенсибилизации к аллергену. 2 табл.

+ Отрица- Отрицательная тельная 0,97 1,05 0,91

Таблица 1

6319

0,97 1,05 .0,71

Отрица-Отрица-+++ тельная тельная

Таблица 2

4 0,94

22

0,57

Отрица- ++++ тельная