СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЛЕЙКОЗА С АУТОИММУННЫМИ ПРОЯВЛЕНИЯМИ, ИНДУЦИРОВАННОГО В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 1997 года по МПК A61K39/44 

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологическим методам лечения аутоиммунных заболеваний и лейкозов с аутоиммунными проявлениями.

Для лечения аутоиммунных заболеваний иммунологическими методами используется только пассивная иммунизация введение антилимфоцитарных иммуноглобулинов.

Наряду с очевидными успехами терапии аутоиммунных заболеваний, можно отметить у иммунологических методов следующие недостатки: отсутствие или недостаточность избирательности воздействий, что является причиной серьезных осложнений, например иммунодефицитов, цитопений, инфекций и др. недостаточная эффективность при ряде заболеваний; необходимость применения гетерологичного донорского материала может привести к возникновению таких инфекций, передающихся с кровью, как гепатит, ВИЧ и др. а также к дополнительной иммунизации больного донорскими белками.

Для лечения гемобластозов с аутоиммунными проявлениями (острых и хронических лейкозов, лимфосарком) было апробировано несколько способов иммунологического воздействия: пассивная иммунизация сыворотками или лимфоцитами больных, находящихся в стадии ремиссии, а также препаратами антител против "лейкозных" антигенов; пассивная терапия антиидиотипическими антителами (моноклональными) против иммуноглобулинов, продуцируемых опухолевыми клетками B-лимфоцитами. В. М. Бергольцем и соавторами был предложен метод "регуляции специфического иммунитета" при лейкозах. Метод состоит в повторном введении больших количеств иммуноглобулинов, выделенных из собственной сыворотки крови больных.

Однако перечисленные выше способы иммунотерапии оказались малоэффективными и в настоящее время не используются. Все перечисленные способы предусматривают использование препаратов, которые не обладают достаточной иммуногенностью при введении больным.

Предлагаемый способ позволяет преодолеть этот недостаток. Присоединение собственных иммуноглобулинов к нерастворимому носителю резко повышает иммуногенность препарата и позволяет получать у больных антиидиотипический иммунный ответ с образованием антиидиотипических антител у больного.

Преимущества предлагаемого способа состоят также в следующем:
1. Иммунизация аутоантителами приводит к узкоспецифическому подавлению изолированных клонов аутоиммунных лимфоцитов вместо тотальной иммунодепрессии, индуцируемой цитостатиками и антилимфоцитарными иммуноглобулинами. Поэтому способ лечения является специфичным, а также щадящим и безопасным для больного. 2. Использование в качестве лечебных препаратов материалов от самого больного (по принципу: каждый сам себе донор), исключает: 1) возможность заражения вирусами гепатита, ВИЧ и др. 2) возможность возникновения осложнений при введении материалов от животных (антилимфоцитарные глобулины) и любых экзогенных донорских материалов. Универсальность предложенного способа лечения предлагается возможность терапии иммунодефицитов и болезней, связанных с трансплантационным иммунитетом. Способ лечения, предложенный нами, позволяет повысить эффективность и безопасность лечения больных аутоиммунными заболеваниями и лейкозами с аутоиммунными проявлениями. Больных подвергают активной иммунизации выделенными от них самих аутоантителами и рецепторами аутоиммунных лимфоцитов, что приводит к синтезу в организме больных антиидиотипических аутоиммунные антител, избирательно подавляющих аутоиммунных реакции.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. Лечению больных предшествует приготовление антител-сорбентов, предназначенных для выделения и накопления аутоиммунных факторов (антител, рецепторов иммунных лимфоцитов) из материалов, взятых от больных. Такие иммуносорбенты несут определенный набор антигенов, которые являются мишенями аутоиммунных реакций данного больного, направленных против лимфоцитов клеток крови и костного мозга. Для приготовления антиген-сорбентов используют лимфоциты больных хроническими лимфолейкозами, опухолевые клетки больных острыми лимфобластными лейкозами, тромбоциты доноров (при тромбоцитопении), эритрокариоциты печени эмбрионов человека (при парциальной красноклеточной аплазии). Путем обработки клеток детергентами получают солюбилизированные мембранные антигены клеток и коньюгируют их с сефарозой или окисленной целлюлозой. У больных получают следующие материалы: сыворотка крови, лимфоциты оперативно удаленной селезенки и/или лимфоциты из дренированного грудного протока (лимфатического). Из сыворотки крови выделяют циркулирующие иммунные комплексы и иммуноглобулины при помощи осаждения полиэтиленгликолем (мол. мас. 6000), а из лимфоцитов готовят препарат солюбилизированных мембранных антигенов клеток (СМАК). Следующим этапом является выделение аутоантител и рецепторов лимфоцитов путем сорбции-элюции подготовленных материалов на колонках с антиген-сорбентами. Выделенные антитела (элюаты) стерилизуют путем ультрафильтрации и коньюгируют с инертным носителем стерильной мелкодисперсной суспензией окисленной целлюлозы (СОЦ-сорбент), который резко увеличивает иммуногенность материалов. После проверки на стерильность полученные коньюгаты (аутоиммуносорбенты) вводят больному подкожно с интервалами в 7 дн в дозах от 100 до 150 мг белка на 1 кг массы. Спустя 4 недели вводят тот же материал в растворимой форме (без сорбента) в дозе 200 мкг на 1 кг. Этот цикл повторяют спустя 3-4 мес при наличии соответствующих показаний (признаков возникновения рецидива и/или появления антител). Наблюдение и оценку клинической и иммунологической эффективности курса иммунотерапии проводят первоначально в стационаре, а затем в амбулаторных условиях в течение двух лет. Предлагаемый способ был экспериментально опробован в многочисленных сериях опытов более чем на 900 мышах с ретровирусным лейкозом Раушера, а также на мышах и кроликах с аутоиммунной парциальной красноклеточной аплазией костного мозга.

Мышей чувствительной линии заражали вирусом лейкозы Раушера, вызывающего 100% -ную летальность к 25-30 дн после инъекции вируса. Лечение проводили на стадии развернутой клинической картины заболевания по следующей схеме: проведение химиотерапии для индукции ремиссии (циклофосфан 200 мг/кг); иммунизация аутоантителами, коньюгированными с целлюлозным носителем (40 мкг/мышь), 3 раза, подкожно, с интервалом в 7 дн. В результате экспериментальной апробации получен следующий эффект: длительные (более 8 мес) ремиссии были достигнуты более чем у 60% подопытных животных. В контроле без лечения 100% животных погибали к концу месяца, химиотерапия продлевала жизнь животных не более, чем на 3 нед.

Пример 1. Испытание способа лечения аутоиммунных заболеваний проводилось на мышах линии BALB/c, искусственно инфицированных вирусом лейкоза Раушера. На 12-15 дней после заражения у мышей брали сыворотку крови. На заранее заготовленных антиген-сорбентах из сыворотки выделены аутоантитела: 1) к клеткам лейкоза Раушера; 2) к антигенам гистосовместимости -Н-2 комплекса (на сорбенте из солюбилизированных активированных Т-лимфоцитов BALB/c; 3) к антигенам нормальной дифференцировки лимфоцитов мышей BALB/c. На 20-23 день мышам вводили циклофосфан в дозе 100-150 мг/кг массы тела. На 28, 35 и 42 день мышам вводили антитела (аутоантитела) (1-3), коньюгированные с сорбентом суспензионной окисленной целлюлозой в дозе 15 мкг белка на мышь подкожно. IV группа получала смесь антител 1-3. Контрольные животные получали только циклофосфан, сорбент без аутоантител и только вирус. Количество животных в каждой было 12 (всего 7 групп, 84 мыши). Наблюдение за мышами проводили в течение 4 мес путем пальпаторного определения размеров селезенки (1-2 раза в неделю), гематологических и иммунологических исследований в динамике. Результаты опыта показали следующее: Все животные, инокулированные только вирусом, а также сорбентом без аутоантител, погибли к 35 дн после заражения. (28 ± 8,5 дн). Мыши, получавшие циклофосфан, погибли к 58 дн после заражения (51,3 ± 4,2). Мыши, обработанные иммуносорбентами, имели разную продолжительность жизни в зависимости от специфичности аутоантител. Минимальная продолжительность жизни (75,6 ± 8,4 дн) отмечена в группе, инокулированной антителами к антигенным клеткам лейкоза Раушера. Максимальная выживаемость отмечена в группе, иммунизированной смесью антител 1-3 (группа IV). 11 мышей из 12 к исходу 4 мес наблюдения находились в этой группе в состоянии полной ремиссии. 1 мышь погибла от лейкоза на 104 день. В сыворотке мышей с ремиссией обнаружены антиидиотипические антитела, нейтрализующие аутоантитела в реакции иммунофлуоресценции.

Пример 2. Материалы и условия испытания аналогичны примеру 1. Представлены результаты по иммунизации аутоантителами мышей BALB/c, инфицированных вирусом лейкоза Раушера (BP) в зависимости от сроков развития лейкоза и по влиянию представляющего иммунизации химиотерапевтического курса на выживаемости при поздних сроках лейкемогенеза. Иммунизация проводилась комплексом аутоантител 1-3 (пр.1) или антителами к H-2 антигенам главного комплекса гистосовместимости. Из результатов таблицы следует, что на ранних сроках (7 дн после инъекции вируса) иммунизация аутоантителами вызывала длительные ремиссии у 67% мышей. На поздних сроках подобный эффект достигался только после курса химиотерапии. Максимальный эффект отмечен для группы, иммунизированной комплексом аутоиммунных антител ОСКАР онкоспецифическим комплексом аутоиммунных реакций.

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологическим методам лечения аутоиммунных заболеваний и лейкозов с аутоиммунными проявлениями, в эксперименте. Предлагаемый способ основан на индукции синтеза антиидиотипических антиаутоиммунных антител в организме больного, что достигается с помощью иммунизации его соответствующими аутоантителами и рецепторами иммунных лимфоцитов, предварительно выделенными на иммуносорбентах, несущих антигены, служащие мишенями для аутоиммунных реакций данного больного организма, и присоединенными к инертному носителю. 1 табл.

Способ лечения лейкоза с аутоиммунными проявлениями, индуцированного в эксперименте, путем иммунотерапии, отличающийся тем, что вводят препарат аутоантител и аутоантительных "рецепторов" аутоиммунных лимфоцитов, полученных выделением из больного организма с помощью иммуносорбента, несущего набор антигенов "мишений" данного аутоиммунного процесса, и присоединенных к инертному носителю.