Аммонийная соль 9-(4-гидрофосфорил-2-оксабутил)гуанина, обладающая избирательной активностью против вируса простого герпеса Советский патент 1991 года по МПК C07F9/141 A61K31/675 

Изобретеиие относится к органичес ;кой химии, медицинской химии и вирусологии, -а именно к новому соединению - аммонийной соли-9-(4-гидрофос- форил-2 оксабутил)гуанина формулы

® NH4

(1)

водных гуанина, обладающих улучшенным спектром противогерпетических свойств.

Изобретение иллюстрируется следу- кадими примерами.

rt V и м е р 1. Синтез 9-(4-гидро- фосфорил -2-оксабутил) гуанина и его выделение.

trt

:о

4 Х СП

оэ

Изобретение относится к химии элементоорганических соединений,в частности к аммонийной соли 9-(4- гидрофосфорнл-2-оксабутил)гуанина , обладающей избирательной активностью против вируса простого герпеса, которая может найти применение в медицине.. Цель - выявление более актив- ных соединений. Получение ведут вьщер- зкиванием раствора 9-(4-гидрокси-2-. оксабутил)гуанина, фосфористой: кислоты и К,Н-дициклогексилкарбодиимида. в смеси пиридин-диметилформамида. Выход 56%. 1 табл. Ш СП

обладающей избирательной активностью ftpoTHB вируса простого герпеса, которая может найти приьенение в медицине.

Целью изобретения является разра-| вртка новых фосфорорганических произРаствор 225 мг ( ммоль) 9-(4-гидр окси-2-оксабутил)гуанина, 100 мг (1,22 ммоль) фосфористой кислоты и 250 мг (1,22 ммоль) Ы,Ы-дициклогек1 силкарбодиимида в 20 мл смеси пири- . дин:диметилформамид 1:1 перемеши- вают 48 ч при , Добавляют 20 мл

HjO и, выдержав 20 мин, отфильтро- вывают. Фильтрат, разбавленный HjO до 500 мл, наносят на колонку (ЗЗ З см) с ЛЕАЕ-тойоперлом (Тойо- сода, Япония) и элюирутот со скоростью 600 мл/ч раствором бирарбона- та аммония (линейный градиент концентрации О - О, М, общ объем элюента 4 л). Фракции, выходившие в интервале концентраций 0,055-0,075 М, обьединйют, упаривают до удаления бикарбоната аммония, а остаток лиофили- зуют. Выход аммониевой соли 9-(4-гид- рофосфорйл-2-оксабутнл)гуанина 170 мг (56%). Данные УФ-спектров: рН 7 «ы«Г 250 нм, 10100}), рН 13 ( 267 нм, g 9500), рН I (Лм«« 256 нм, 10200). Данные ПМР-сЛектра, DjO, м.д. : 7,86 у.с. (1Н,Н-8), 6,61 д (Н,Н-Р, J H.P

633 Гц), 5,08 с (2Н, O-CHj-Np, 3,93м

(Ш, P-O-CHj-CHj), 3,72 м (2Н, Р-0- -CHi-CHi).

мер 2. Определение цитоток- сичёского действия и противовирусной активности аммонийной соли 9-( 4- гидрсфосфорил-2-оксабутш1)гуанина.

Исследование противогерпетинес- кой активности .аммонийной соли 9-(4- гидрофосфорил-2-оксабутил)гуанина проводят на модели двух штаммов вируса простого герпеса первого типа штамм L 2 дикого типа и штамм ЦС ,/ТК ), полученный в присутствии высоких концентраций 1- -D-тимидинарабинозида путем селекции. В качестве референс- орепарата используют ацикловир (4-гкдрокси-2-оксабутил)-гуанин. Работу проводят на культуре клеток Verb, среда поддержки представляет собой смесь среды Игла и среды 199 в соотношении 1:1 с добавлением i/,- ной сьгооротки крори плодов коров. л ;

Токсическое действие соединений определяют при микроскопическом наблюдении за изменениями клеточного мовослоя в течение 96 ч, а также по подавлению включения (Зн)-тимиди- йа в клеточную ДНК. Антивирусную активность соединений оценивают по еле дукицему методу: 24-часовой монослой клеток Vero в течение 1 ч инкуби- с вирусосорержащим материалом,

множественность инфицирования составляет 0,01-0,001 ,/кл. Исследуемые соединения вводят в составе среды непосредственно после адсорбции вируса.

Антивирусную активность выражают ,-р(доза вещества, вызывающая 50%-ное ингибирование цитопатического. действия вируса); эта доза принимается в качестве минимально эффективной. Развитие вирусспецифичес- кого цитодеструктивного процесса фиксируют ежедневно и оценивают по четырехбальной системе. Учет ИД, при множеств енности инфицирования 0,01 ТЦИД -р/кл. (штамм L (ТК) проводят через А8 ч после заражения, когда в контрольных необработанных

культурах наблюдалась полная гибель монослоя. При множественности инфицирования 0,001 ТЦИД д/кЛо (штамм LjG,,(TK ) этот срок составляет .72 ч.

5

30

35

40

45

50

55

Микроскопические исследования токсического действия соединения 1 на морфологию клетки не показали видимых цитрпатических изменений монослоя клеток Vero через 96 ч после внесения соединения 1. в концентрации 1000 мкг/мл.

Данные, характеризую1 №1е токсичность соединения I, оцененную по подавлению в ключения меченого тимидина в ДНК, приведены в таблице, из которых . следует, что соединение I в концентрации 750 мкг/мл проявляет токсичность, соответствующую 50%-ной дозе, принимаемой за минимально переносимую. В этих же условиях ацикловир демонстрирует аналогичный показатель, равный 37,5 мкг/мл, т.е. проявляет в 20 раз большую.токсичность. Предлагаемое соединение обладает выраженным противовирусным действием в от- ношении штамма L этих же условиях ацикловир также проявляет высокую активность (см.таблицу). В отношении штамма ,, (ТК ) соединение I демонстрирует также высокую активность, как в случае со щтаммом Lj. Соединё- нце I обладает способностью защищать клетки от вирусной инфекции, задерживая развитие ЦПД (цитопатогенногО действия )на 100% в концентрации, не меньшей, чем 25 мкг/мп для штамма ТК и 12 мкг/мл для штамма ТК.

Преимущество соединения I перед ацикловиром заключается в том, что последний не подавляет репродукцию вируса герпеса простого типа I штамм V.JTK-)

Формула изобрете и.и я Аммонийная соль 9-(А-гидрофосфо- рйл-2-оксабутнп)гуанина формулы

Противогерпетическая активность аммонийной . соли 9-(4-гидрофосфорил-2-оксабутил)гуанина

750 37,5

4,1 0,375

Примечание. Опыт проводили в трех параллелях; Токсического действия соединения 1 на морфологию клеток не обнаружено при концентрации 1000 мкг/мл .

.0

- pf

н .

tO:

.

10

обладающая избирательной активностью против вируса простого герпеса.

5,5 4,5

137 6,2