ПРИМЕНЕНИЕ ГИДРОХЛОРИДА (3-ГИДРОКСИ-1-АДАМАНТИЛ)-1-ЭТИЛАМИНА В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРА ВИРУСА ГЕРПЕСА ПРОСТОГО ТИПА 1 Российский патент 2006 года по МПК A61K31/133 A61P31/22 C07C215/42 

Изобретение относится к новому применению производного адамантана-гидрохлорида (3-гидрокси-1-адамантил)-1-этиламина, формулы

в качестве ингибитора репродукции вируса простого герпеса типа 1, что может быть использовано в медицине.

Лечебная ценность базовых противогерпетических препаратов (ацикловира, ганцикловира, бромвинилдезоксиуредина) может быть условна, т.к. в процессе их применения возможно появление лекарственно устойчивых вирусных штаммов. В литературе описаны некоторые производные адамантана, активные в отношении вируса герпеса. В частности, для лечения заболеваний герпетической природы используют препараты: тромантадин (гидрохлорид 1-(1-адамантил)-2-[(2-диметиламино)этокси]-ацетамида) и этмантин (1-(3-этиладамантил)-1-этилкарбамат). Однако существуют данные о возможности аллергических дерматитов, вызываемых тромантадином (А.с. СССР №1721048, 1992, бюл. №11). Это обуславливает необходимость поиска новых противогерпетических средств ряда адамантана, в том числе высокоэффективных в отношении лекарственно устойчивых вирусных штаммов.

Известно, что производное адамантана, а именно гидрохлорид (3-гидрокси-1-адамантил)-1-этиламина обладает противогриппозной активностью [Л.Н.Лаврова и др. Химико-фармацевтический журнал, 1990, №1, с.29-31].

Сущность изобретения заключается в обнаружении новой биологической активности у гидрохлорида (3-гидрокси-1-адамантил)-1-этиламина, в частности противогерпетического действия. Причем он высокоэффективно ингибирует как чувствительные, так и резистентные к действию базовых лекарственных препаратов, например - ацикловиру, варианты вируса герпеса простого типа 1. Его активность выше действия препарата тромантадин в 10 раз и этмантина в 5 раз.

Синтез гидрохлорида (3-гидрокси-1-адамантил)-1-этиламина можно осуществить или из гидрохлорида (1-адамантил)-1-этиламина (препарат ремантадин) [Химико-фармацевтический журнал, 1990, №1, с.29-31], или из (3-гидрокси-1-адамантил)метилкетона, а также его оксима [Журнал органической химии, 2001, Т.37, №9, с.1296-1299].

Биологическая активность гидрохлорида (3-гидрокси-1-адамантил)-1-этиламина (соединение I) подтверждается примерами 1-2.

Испытывалась токсичность соединения I для клеточных культур и антигерпетической активности на модели вируса герпеса простого типа 1 (штамм Л₂).

Пример 1. Изучение цитотоксического действия.

В таблице 1 представлены результаты изучения токсического действия соединения I на культуру первично-трипсинизированных ФЭК и культуры перевиваемых клеток МДСК и Vero. Ремантадин использовался в качестве референс-препарата. Как видно из таблицы, исследуемое соединение I оказалось менее токсичным, чем ремантадин для исследованных культур.

Таблица 1
Изучение цитотоксичности соединения I.ПрепаратМПК [МКГ/мл]Культура клеток ЦД₅₀ [мкг/мл]ФЭКМДСКVeroI500,0611,00±4,68627,34±2,67635,00±1,47ремантадин62,542,54±0,7748,24±0,4251,25±0,34

Примечание: продолжительность инкубации - 72 ч. За максимально переносимую (МПК) принимали концентрацию препарата, при которой не наблюдалось видимых под микроскопом изменений клеточного монослоя. ЦД₅₀ - концентрация соединения, в присутствии которой выживает 50% клеток. ЦД₅₀ определялась методом окрашивания клеток трипановым голубым. Количество окрашенных (мертвых) клеток в контроле ФЭК - 15,43%, МДСК - 5,78%, Vero - 4,18%. МПК во всех трех экспериментальных системах были одинаковы. Приводятся результаты трех независимых опытов.

Пример 2. Изучение биологической активности против вируса герпеса простого типа 1.

Антивирусное действие соединения I оценивали на основе общепринятого метода De Clercq E. et al. [J.Infect. Dis., 1980; 141; 563-573]. По способности препарата ингибировать развитие вирусиндуцированного цитопатического эффекта (ЦПЭ) на 50% (ИД₅₀) и практически полностью (ИД₅₀); при 95-100% ЦПЭ в контроле после 48 ч инкубации с множественностью инфицирования (МИ) 0,1 БОЕ/кл, где БОЕ - бляшкообразующие единицы.

При изучении антигерпетического эффекта в культуре клеток Vero (таблица 2) установлено, что соединение I является высокоселективным ингибитором репродукции ВПГ-1 с ХТИ 40,7. Близкие результаты были получены при использовании штамма ВПГ-1 с дефектным геномом, обладающего резистентностью к базовому лекарственному противогерпетическому препарату ацикловир.

Полученные результаты были подтверждены при изучении влияния соединения I на инфекционный титр ВПГ-1. Максимальные концентрации, использованные в этой серии экспериментов, не превышали 1/2 ЦД₅₀. Эффективность соединения I несомненна: в концентрации 31,2 мкг/мл оно снижало инфекционный титр вируса по сравнению с контролем на 1,40 lg БОЕ/мл, а при увеличении концентрации до 62,5 мкг/мл снижение титра составило 2,25 lg БОЕ/мл и носило избирательный характер.

Таблица 2.
Изучение антивирусного эффекта соединения I в культуре клеток Vero на модели ВПГ-1.ПрепаратВПГ/S / ВПГ/RИД₅₀ИД₉₅ХТИI15,6/15,662,5/62,540,70/40,70ремантадин31,2/31,262,5/62,51,64/1,64ацикловир0,45/1200,9/>120 

Примечание: МИ 0,1 БОЕ/клетка; продолжительность инкубации 48 ч. ИД₅₀ и ИД₉₅ - концентрация соединения, предотвращающая развитие вирусиндуцированного ЦПЭ соответственно на 50% и 95-100% при 95-100% ЦПЭ в контроле. Химиотерапевтический индекс соединений (ХТИ) вычисляли как отношение ЦД₅₀ к ИД₅₀ «*/*» для эталонного чувствительного к ацикловиру ВПГ-1/S и резистентного к ацикловиру ВПГ-1/R штаммам.

Таким образом, производное адамантана: гидрохлорид (3-гидрокси-1-адамантил)-1-этиламина, обладающий противогриппозной активностью, может быть применен по новому назначению в качестве высокоэффективного антигерпетического препарата, который действует в том числе на штаммы вируса герпеса простого, резистентные к базовым лекарственным противогерпетическим препаратам, например к ацикловиру.

Это производное представляет собой перспективное действующее начало лекарственного препарата, что позволит расширить ряд адамантановых противогерпетических средств.

Изобретение относится к новому применению производного адамантана-гидрохлорида (3-гидрокси-1-адамантил)-1-этиламина, формулы

в качестве ингибитора репродукции вируса герпеса простого типа 1, действие которого распостраняется как на чувствительные, так и на резистентные к базовым противогерпетическим лекарственным препаратам, например - ацикловиру, штаммы вируса. Его активность выше действия препарата тромантадина в 10 раз и этмантина в 5 раз. 2 табл.

Применение гидрохлорида (3-гидрокси-1-адамантил)1-этиламина, формулы

в качестве ингибитора репродукции вируса герпеса простого типа 1, действие которого распостраняется как на чувствительные, так и на резистентные к базовым противогерпетическим лекарственным препаратам штаммы вируса.