Устройство для определения ингибиторов и активаторов холинэстераз Советский патент 1990 года по МПК C12M1/40 

1

(21)4458197/31-13

(22)11.07.89

(46) 23.12.90. Бюл. № 47

(71)Казанский государственный университет им. В.И.Ульянова-Ленина

(72)Г.К.Будников, С.С.Бабкина и Э.П.Медянцева

(53)663.18 (088.8)

(56)Gray D.N. Immobilized Enzymes

in Analytical Chemistry. J.Analytical Chemistry. 1977, vol. 49, № 12, p. 1067A.

(54)УСТРОЙСТВО ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИН-/ ШБИТОРОВ И АКТИВАТОРОВ ХОЛИНЭСТЕРАЗ

(57)Изобретение относится к аналитическим методам исследования ферментных систем, к устройствам для определения ингибиторов и активаторов холинэстераз. Цель изобретения повышение чувствительности и точности измерений. Устройство содержит реакционную емкость 1 с патрубком 2 для подвода субстрата, воды или воздуха, патрубком 3 для подвода газа и патрубком 4 для отвода среды, размещенные внутри емкости 1 фермент,- ный электрод 5 и электрод сравнения 6. Ферментный электрод 5 содержит гофрированную ипенку 7 из нитрата целлюлозы с иммобилизованной холин- эстеразой, которая размещена в центре емкости 1 и прикре/шена к электроду 5 прижимными кольцами 8. Емкость 1 снабжена теплообменной рубашкой 9 с патрубками 10 и 11. Устройство обеспечивает определение низких концентраций ингибиторов и активаторов холинэстераз в окружающей среде. 1 ил.

tg

С

Изобретение относится к аналитическим методам исследования ферментных систем, к устройствам для определения ингибиторов и активаторов холинэстераз. Цель изобретения - повышение чувствительности и точности измерений. Устройство содержит реакционную емкость 1 с патрубком 2 для подвода субстрата, воды или воздуха, патрубком 3 для подвода газа и патрубком 4 для отвода среды, размещенные внутри емкости 1 ферментный электрод 5 и электрод сравнения 6. Ферментный электрод 5 содержит гофрированную пленку 7 из нитрата целлюлозы с иммобилизованной холинэстеразой, которая размещена в центре емкости 1 и прикреплена к электроду 5 прижимными кольцами 8. Емкость 1 снабжена теплообменной рубашкой 9 с патрубками 10 и 11. Устройство обеспечивает определение низких концентраций ингибиторов и активаторов холинэстераз в окружающей среде. 1 ил.

- -Судрпват

О5

ел

«

соИзобретение относится к аналитическим методам исследования ферментных систем, к устройствам для определения ингибиторов и активаторов холинэстераз, при анализе окружающей среды.

Целью изобретения является повышение чувствительности и точности измерений.

На чертеже изображено устройство, общий вид, в аксонометрии.

Устройство для определения ингибиторов холинэстераз содержит реакционную емкость 1 с патрубком 2 для подвода субстрата, служащим также для подвода воды или воздуха, патрубком 3 для подвода газа и патрубком 4 для отвода среды, размещенные внутри емкости 1 ферментный электрод 5 и электрод 6 сравнения. Ферментный электрод 5 содержит в своей нижней части гофрированную пленку 7 из нитрата целлюлозы с иммобилизованной холинэстеразой, размещенную вокруг корпуса электрода, при этом стенка реакционной емкости 1 выполнена в виде усеченного конуса, обращенного большим основанием вверх, а гофрированная пленка 7 размещена в центре емкости. Гофрированная пленка 7 прикреплена к ферментному электроду 5 прижимными кольцами 8, Реакционная емкость 1 снабжена теплообменной рубашкой 9 с патрубками для подвода 10 и отвода 1 1 хладагента.

Устройство работает следующим образом.

Перед началом работы устройства подготавливают к работе ферментный электрод 5. Поверхность электрохимической части ферментного электрода 5 шлифуют до зеркального блеска и опускают в ртуть на 2 мин,, затем его звлекают из нее и излишки ртути стряхивают. После этого прикрепляют к электроду 5 прижимными кольцами 8 гофрированную пленку 7 из нитрата целлкшозы и вводят электрод 5 в реакционную емкость 1. По патрубку 2 одают воду или воздух, в которых опеделяются ингибиторы и активаторы олинэстераз; скорость протока подерживается не более 2 л/мин, а заем поток выводится по патрубку 4. ериодически поток перекрывается, и емкость 1 через патрубок 2 вводят о 5 мл раствора субстрата холинэс- еразы - бутирилтиохолиниодида (концентрации до 6.) в обратном буферном растворе с pFi 9,05, при этом в емкость 1 вставляют электрод 6 сравнения (насыщенный каломельный электрод). Температуру реакции поддерживают в пределах 25°С, а через патрубок 3 продувают среду в емкости 1 водородом или аргоном для удале- Q ния растворенного кислорода в течение 1 5 МИН; до достижения равновесия реакции гидролиза. Затем снимают вольтамперограмму в интервале потенциалов (-0,1) - (0,8) В. На вольт- 5 амперограмме измеряют высоту пика при потенциале -0,55 В и по градуи- ровочному графику, выражающему зависимость величины тока в пике от концентрации ингибитора или актива- 0 тора, находят содержание ингибитора или активатора в потоке исследуемой воды или воздуха. . ..Использование ферментного электрода 5 с гофрированной пленкой 7 5 из нитрата целлюлозы с иммобилизованной холинэстераэой в сочетании с реакционной емкостью 1, имеющей конусообразную стенку, и размещение пленки 7 в центре емкости 1 позво- Q ляют осуществить равномерное обтекание электрода 5 исследуемой средой без изменения условий диффузии субстрата к холинэстеразе.

Стабильность этого режима позволяет снизить влияние различных возмущений на величину электрохимического сигнала, то есть на результат анализа, определять более низкие концентрации ингибиторов холинэстераз и таким образом повысить чувствительность и точность анализов.

Формула изобретения Устройство для определения ингибиторов и активаторов холинэстераз, содержащее реакционную емкость с патрубками для подвода субстрата, газа, воды или воздуха и патрубком для их отвода, размещенные в емкости Q ферментный электрод и электрод сравнения, отлича ющееся тем, что, с целью повьшгения чувствитель- .ности и точности определения, ферментный электрод содержит в нижней части гофрированную пленку из нитрата целлюлозы с иммобилизованной холинэстеразой, размещенную вокруг корпуса электрода и прикрепленную к нему прижимными кольцами, при этом

5

0

5

16151736

стенка реакционной емкости выполне- а гофрированная пленка из нитрата на в виде усеченного конуса, обра- целлкшозы размещена в центральной щенного большим основанием вверх, части емкости.