3-Аминопропилгликозиды дисахаридов в качестве лигандов иммуносорбентов для связывания группоспецифических антител анти-А и анти-В Советский патент 1990 года по МПК C07H15/04 

Изобретение относится к химии ди- сахаридов, обладающих биологической активностью, проявляющих свойства группоспецифических антигенных детерминант групп крови А и В, а именно к З-аминопрошшгликозидам дисахаридов общей формулы ,

ШхОН ШгОН

НО/-0 НОШ(СН2)Ш2 (п Ш

о/-о

J-f/

Rон

где R - NHCOCH ; ОН, в качестве лигандов р гмугЮсорбентов для связывания группоспещфических антител анти-А и анти-В, и которые

быть использованы в медицине.

Цель изобретения - новые производные дисахаридов, проявляющие свойства группоспецифических антигенных детерминант групп крови А и В, которые, не уступая по свойствам известным, аналогам - трисахаридам, являются более доступными и удобными для иммобилизации олигосахаридного лиганда- для по лучения иммуносорбента для связьша- ния и анти-В антител.

Поставленная цель достигается пред лагаемы И 3-аминопропилгликозидамн дисахаридов общей формулы I.

Пример 1. Поя чешие (3-ами- нопропил)-3-0-(2-ацетамидо-2-дезокси- Й-В-галактопиранозил) -/З-В-галактопи- ранозида (la) .

К смеси 3 г (5,6 ммоль) 1,2-ди-О- : ацетил-3,4,6 три-0-бензш:(-В-галакто- пиранозы (II), 1,5 МП (10 ммоль) 3- трифторадетамидопропанола и 30 мл при прибагшяют за 10 мин 3 мл (24 ммоль) зфирата трехфтористо- го бора. Вьдерживают смесь 1 ч при , 2 ч при , затем разбавляют шороформом, промывают, вьщеляют колоночной хроматографией (КХ, здесь и далее на силикагеле) Паглучают 2,8 г (78%) (3-трифторацетамвдопропил)-2-0

ацетил-3,4, б-три-0-бензих(-й-В-галак- :топиранозида (III), сироп.

ПМР (CDClj): 1,80 м (2Н, CCH2.C)j 2,02 t (ЗН, Ас); 4,43 д (1Н, 3,г8Гц, Н-1); 7,22 (1Н, NH); 7,3 - 7,4 м (5E 3Ph).

1,8 г (6 ммсоть) соединения I .растворяют в 100 МП метанола и проводят гидрогенолиз над 0,8 г 10% Pd/C при 20°С в течение 24 ч. Ката.лизатор отделяют, раствор упаривают, остаток растворяют в 40 мл ацетонитрила, прибавляют 10 мг 4-толус)Лсульфокислоты и 1,1 мл (7 ммоль) диметилацеталя бензальдегида. Через 1 ч прибавляют 1 МП пиридина, упаривают, после КХ и перекристаллизации из смеси хлоро- форм-гексан получают 0,88 г (68%) (3-трифторацетамидопропнг)-2-0-аце- тил-4,6-0-бензилиден-| 0--галактопира- нозида (IV), т.пл. Г76-Г/8°С.

ПНР (CDClg): 1,80 м (2Н, CCHjC); 2,08 с (ЗН, Ас); 4,41 д (1Н, Л,,г

.

Q 5

0

5 о

5

8 Гц, Н-1); 5,50 с (1Н, PhCH); 7,10 (Ш, NH); 7,3-7,4 м (5Н, PhT.

Найдено, %: С 51,70, Н 5,68, N 2,99.

C2oH,,NF,Oa.

Вычислено, %: С 51.,-84; Н 5,22; N 3,02.

230 мг (0,5 ммоль) соединения (IV) растворяют в 40 мл , прибавляют 5 г молекулярных сит 4А,, 2,5 г карбоната серебра и 70 мг перхлората серебра, затем 350 мг (1 ммоль) 2-ази- до-3,4,6-три-0-ацетил-2-дезокси-/3-0- галактопиранозилхлорида в 20 мл Через 1 ч смесь разбавляют хлороформом, фильтруют, промьшают. После КХ выдаляют 300 мг (77%) дисахарида (V), т.пл. 101-102°С (этилацетат-эфир-гек- сан) .

ПНР (CDClj): 1,65 м (2Н, ); 1,96 с, 1,98 с, 2,01 с, 2,06 с (12Н, 4Ас); 4,42 д (1Н, J,2 8 Гц, Н-1);- 5,1 д (1Н, J.,2. 4 Гц, Н-1 ); 5,52 с (1Н, PhCH); 7,06 (Ш, NR); 7, (5Н, Ph)7

Найдено, %: С 49,20; Н 5,24.

C,,0,s.

Вьиислено, %; С 49,49; Н 5,06.

80 мг (0,1 ммоль) дисахарида V растворяют в 20 мл 70%-ной уксусной кислоты и вьщерживают при 70 С 2 ч. Упаривают, остаток растворяют в 10 мл метанола, прибавляют 0,4 мл уксусного ангидрида и 80 мг 5% Pd/C, проводят гидрогенолиз при 20 С в течение 18 ч. Фильтруют, упариваютJ остаток растворяют в 20 МП метанола, прибавляют 0,03 Ш1 0,1 М метилата натрия Б метаноле, через 12ч упаривают, после КХ вьщеляют 20 мг (34%) дисахарида с защищенной аминопропильной группой.

ПНР (DMCO-d): 1,65 м (2Н, CCHj.C)-; 1,80с, 1,99с (6Н, 2Ас); 4,33д (1Н, J.2 8 Гц, Н-1); 4,67 д (1Н, ,2 4 Гц, Н-Г); 7,49 д (1Н, J 9 Гц, NHAc); 9,33(1Н, ННСОСРз).

Полученный дисахарид растворяют в смеси 2 МП этанола и 2 мл воды, прибавляют 40 мг анионита в ОН-форме и перемешивают 16 ч, полз чают свободный дисахарид (la), выход 14,5 i-ir (100%). Rf.0,3 (тех, этанол - трет-бутанол - вода - пиридин - уксусная кислота, 5:1:1:1:0,3).

1оС + (С 0,5, 80%,этанол).

ПМР (DgO) : 1,8 м (2Н, ), 1,95 с (ЗН, NHAc), 4,3 д (1Н, .т -

8 Гц, Н г ),, 4,72 д (1Н, J 4 Гц, Н1).

Пример 2. Получение (3-ами- нопропил)-З-О-(об-В-галактопиранозил)- Й-В-галактопиранозида (16).

300 мг (0,65 ммоль) соединения (IV растворяют в 30 МП бензола, прибавляют 3 г молекулярных сит 4А и 1,8 г (7 ммоль) цианида ртути, затем при перемешивании за 20 мин раствор 620 мг (1 ммоль) 2,3,4,6-тетра-О- бензил-об-В-галактопиранозилбромида в 5 мл бензола. Через 72 ч разбавляют 200 мл хлороформа, фильтруют, промывают, после КХ вьщеляют 420 мг (60%) дисахарида (VI), т.пл. 92-93 с (ацетон - эфир - гексан).

ПМР (CDCl,): 1,85 м (2Н, ССН.С); 2,00 с (ЗН, Ас); 4,40 д (1Н, J, 8 Гц, Н-1), 5,11 д (1Н, JV7 3,5 Гц, Н-1 ), 5,28 с (1Н, Ph СН); 7,2-7,4 м

16

(25Н, 5Ph).

Найдено, %: N 1,53.

С 65,50; Н 5,90,

,.

Вычислено, %: С 65,72 Н 5,93V S 1,42.

200 мг (0,2 ммоль) дисахарида (VI) растворяют в 10 мл метанола и добавляют Oj1 мл 1 М раствора метилата натрия в метаноле. После снятия ацетильных групп (контроль по тех) нейтрализуют смолой 1R-120 (), фильтруют и упаривают. Остаток растворяют в 5 мл 60%-ной уксусной кислоты и выдерживают при 70-75°С в-течение 5 ч, упаривают досуха, вьделяют КХ тетра- 0-бензильное производное, которое растворяют в 20 мл метанола и прибавляют 80 мг 10% Pd/C; гидрогенолиз проводят 24 ч при .

Катализатор отфильтровывают, раствор упаривают и лиофилизуют из воды, получают 60 мг (60%) аморфного дисахарида с защищенной аминопропильной группой (VII),

ПМР (DaO): 1,90 м (2Н, ) { 4,45 д (1Н, J,,2 8 Гц, H-D; 5,22 д (1Н, J, 2 Гц, Н-Г).

Полученный дисахарид (20 г) растворяют в 6 мл смеси этанол - вода 1:1, прибавляют смолу в и перемешивают в течение 24 ч. Раствор фильтруют, упаривают, лиофилизуют из воды, выход свободного дисахарида 15 15,4 мг (100%).

Rf 0,2 (тех, этанолгтрет-бутаноя: 1Ша: пириди н: укс ус ная кисл ота, 5:1:

-

V)

616924

:1:1:0,3). Ujg

10

20

25

55

, 107,6 (С 0,5, 80% спирт),

ПМР () : 1,9 м (2Н, ), 4,4 (1Н, J 8 Гц, но; 5,2 д (1Н, J4rn, Hi ),

Синтезированные дисахариды 1а и 16 используются для получения иммуносор- бентов для сорбции соответствующих группоспецифических антител анти-А и анти-В из сьгооротки крови человека.

Пример 3, Получение иммуно- сорбента.

Соединения 1а или 16 растворяют в 15 2-3 мл Н,Н-диметилформамида, прибавляют 1 г макропористого стекла (ШС), активированного поли(п-нитрофенилак- рилатом), оставляют на 1 сут, периодически перемепмвай суспензию. Полноту привязки контролируют тех по исчезновению нингидрин-псложительного пятна лигавдов 1а или 16. Полученный сорбент промывают на фильтре N,N-ди- метилформамидом, эфиром, сушат. Сорбенты, содержащие 7,5 и-. 15 мкмоль лиганда на 1 г JfflC, получают аналогично.

Изучение сорбции, 50 мг сорбента промывают водой, 30 Фосфатно-солевьм буферным раствором, инкубируют при 4°е с 0,5 мл сыворотки крови доноров исследуемой группы крови (группы крови А - дл.т сорбента, содержащего лигавд 1а, В - для сор- бента, содержащего лиганд 16) н течение 3 ч. Титр антител определяют до и после сорбции методом солевой агглютинации ,

Результаты приведены в таблице. Таким образом, в качестве лигам- дов иммуносорбентов для связывания анти-А и анти-В антител предложены спейсерированные дисахариды 1а и 16, сорбционная способность полученных на их основе сорбентов не устзгаает . таковой сорбентов, включающих триса- харидный лиганд,

Синтез новых дисахаридных лиган- дов значительно проще и короче синтеза трисахар1адных лигандов.

Свободная аминогруппа в спейсерной части предлагаемых лигандов 1а и 16 позволяет просто и количественно иммобилизовать их на активированном псши(п-нитрофешслакрилатом) твердом носителе.

Формула изобретения

3-Аминопропилгликозиды дисахари- дов общей формулы

35

40

45

50

СН,ОН (ягОН

™Д °f

1616924

8

где R - NHCOCHj, ОН, в качестве лигавдов иммуносорбентов для связывания группоспецифических антител анти-А и анти-В,

Изобретение касается замещенных гликозидов дисахаридов, в частности (3-аминопропил)-3-0-(2-ацетамидо-2-дезокси-α-D-галактопиранозил)-β-D-галактопиранозида или (3-аминопропил)-3-0-(α-D-галактопиранозил)-β-D-галактопиранозида в качестве лигандов иммуносорбентов для связывания групп специфических антител анти-А и анти-В, и может быть использовано в биохимии. Цель - создание новых более доступных и удобных для иммобилизации олигосахаридных лигандов. Синтез ведут, например, реакцией 1,2-ди-о-ацетил-3,4,6-0-бензил-D-галактопиранозы с 3-трифторацетамидопропанолом в среде CH₂CL₂ в присутствии эфирата BF₃ при 0°С с последующим выделением промежуточного продукта, его гидргенозилом на 10%-ном PD/C при 20°С, упариванием отфильтрованного продукта, растворением в ацетонитриле и добавлением диметилацеталя бензальдегида, 4-толуолсульфокислоты и затем пиридина. Выделенный хроматографически продукт растворяют в CH₂CL₂, добавляют молекулярные сита, карбонат серебра и перхлорат серебра и затем 2-азидо-3,4,6-три-о-ацетил-2-дезокси-β-D-галактопиранозилхлорид в растворе CH₂CL₂. Выденный хроматографически дисахарид растворяют в уксусной кислоте, выдерживают 2 ч при 70°С, упаривают, добавляют уксусный ангидрид и проводят гидрогенолиз на 5%-ном PD/C в среде метанола. Выделяют целевой продукт также хроматографически. Сорбция на уровне известной. 1 табл.

R

ОН

3ynsorb А и Sjmsorb В - коммерческие образцы фирмы Chembiomed (Канада) Данных о количестве лиганда на 1 г МПС фирма не приводит. Из данных прототипа количество лиганда на I т. МПС 2-6 мкмол/г.

В - сорбент, содержащий в качестве лиганда дисахарид 116, А - дисаха- рид 1а,