Способ отбора жизнеспособных спор фитопатогенных грибов Советский патент 1991 года по МПК A01N63/04 C12N1/02 

Изобретение относится к фитопатологии и может быть использовано для оценки биологической разнокачественности спор фитопатогенных грибов.

Цель изобретения - упрощение процесса и повышение выхода жизнеспособных спор.

Способ осуществляют следующим образом.

В центрифужную пробирку наливают раствор сахарозы с концентрацией 40 или 50%, сверху осторожно вносят небольшое количество суспензии спор в буферном растворе, например фосфатном или трис-фос- фатном. Пробирку помещают в угловой ротор центрифуги и центрифугируют при факторе разделения 850 g в течение 10-15 мин. Это обеспечивает разделение спор на фракции - легкую в верхней части и тяжелую на дне пробирки. Жизнеспособные споры, сосредоточенные в легкой (верхней) фракции отбирают пипеткой, наносят на фильтровальную бумагу и отмывают от сахарозы дистиллированной водой.

Пример1.Из трех образцов уредос- пор возбудителя желтой ржавчины пшеницы, имеющих исходное значение прорастаемости 73, 78 и 74%, отбирают по 50 мг и суспензируют каждую пробу в 1 мл 0,05 М фосфатного буфера рН 6,9. В центрифужную пробирку наливают 6 мл 40 или 50%-ного раствора сахарозы, сверху наслаивают суспензию уредоспор. Центрифугирование проводят при +5°С на центрифуге ОПН-8 с угловым ротором при 3000 об./мин (фактор разделения 850 g) в течение 15 мин. После центрифугирования отбирают образовавшиеся фракции, отмывают от сахарозы и проводят оценку прорастаемости на 1 % агар-агаре путем инкубации агаровых блоков с напыленными спорами в термостате при 10 + 2°С в течение 18ч.

В табл. 1 представлена прорастаемость фракций уредоспор возбудителя желтой ржавчины пшеницы после фракционирования известным и предлагаемым способами.

П р и м е р 2. Из трех образцов конидий возбудителя пирикуляриоза риса с исходсл

с

(

hO

о о

XJ СО

ными значениями прорастаемост-и 74, 34 и 29% отбирают по 50 мг и суспендируют в 1 мл 0,05 М трис-фосфатного буфера рН 6,0. Режим центрифугирования и определение прорастаемости аналогично указанным, за исключением температуры инкубации, которая составляет 25 + 2°С.

В табл. 2 приведены данные прорастаемости фракций конидий пирикуляции после фракционирования известным и предлагаемым способами.

Как видно из табл. 1 и 2, в первой фракции концентрируется биологически активный материал; во второй фракции - менее жизнеспособный и другие примеси.

П р и м е р 3. 50 мг уредоспор возбудителя бурой ржавчины пшеницы суспендируют в 1 мл 0,05 М фосфатного буфера рН 6,9. В центрифужную пробирку наливают 6 мл 40%-ного раствора сахарозы, сверху наслаивают суспензию уредоспор и центрифугируют по режиму, указанному в примере 1.

П р и м е р 4. 50 мг уредоспор возбудителя стеблевой ржавчины пшеницы суспендируют в 1 мл 0,05 М фосфатного буфера рН 6,9. В центрифужную пробирку наливают 6 мл 50%-ного раствора сахарозы, сверху наслаивают суспензию уредоспор и центрифугируют по режиму, указанному в примере 1.

0

5

0

5

0

В табл, 3 представлены данные прорастаемости уредоспор возбудителей бурой и стеблевой ржавчины пшеницы после фракционирования в растворе сахарозы.

Как видно из таблиц, в большинстве опытов прорастаемость спор I фракции по предлагаемому способу существенно различаются (при Р 0,95) как между контролем, так и II фракцией.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет значительно упростить и повысить выход жизнеспособных спор облигат- ных паразитов злаковых культур.

Формула изобретения

Способ отбора жизнеспособных спор фитопатогенных грибов, предусматривающий концентрирование суспензии спор в поле действия центробежных сил в центрифужных пробирках в растворе сахарозы с последующим разделением полученных фракций на легкую и тяжелую,о т л и ч a tout и и с я тем, что, с целью упрощения процесса и повышения выхода жизнеспособных спор, концентрированию подвергают суспензию спор облигатных паразитов злаковых культур в растворе сахарозы 40 или 50%-ной концентрации и факторе разделения не более 850 д, а жизнеспособные споры отбирают из легкой фракции.

Таблица 1

Изобретение относится к фитопатологии и может найти применение для оценки биологической разнокачественности спор фитопатогенных грибов. Цель - упрощение процесса и повышение выхода жизнеспособных спор. Способ предусматривает концентрацию суспензии спор облигатных паразитов злаковых культур, используя безградиентный раствор сахарозы концентрацией 40 или 50% , и фактор разделения не более 850 g при продолжительности центрифугирования в пределах 10-15 мин. 3 табл.

Таблица 2

Таблица 3