Способ оценки функционального состояния лимфоцитов Советский патент 1991 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для оценки состояния иммунной системы организма.

Цель изобретения - повышение экономичности способа при диагностических обследованиях.

Способ осуществляют следующим образом.

Катрэкс (вытяжку из печени черноморской акулы катрон), используют в реакции бластной трансформации лимфоцитов радиоиммунологическим методом в микромодификации Назарова П.Г. Гепаринизированную венозную кровь больных по 0,1 мл вносят в стерильные пеницил- линовые флаконы с 3 мл питательной смеси (среда 199 с 10% сыворотки крупного рогатого скота и 200 единицами пенициллина со стрептомицином). В опытные пробы (по 2 флакона на каждую пробу) добавляют по 0,1 мл катрэкса. Пробы инкубируют в термостате при 37°С 72ч. За 20ч до окончания инкубации во все пробы в стерильных условиях вносят по 0,2 мл раствора тимидина, меченного тритием, содержащего 2 мк Ки. После

внесения радиоактивной метки пробы хранят при 37°С.

После завершения периода культивирования производят специальную обработку культур с целью отмывания клеток от невключившейся метки и подготовки их для радиометрии в сцинтилляционном счетчике.

На первом этапе осуществляют лизис эритроцитов и отмывку лимфоцитов 3%-ной уксусной кислотой центрифугированием в течение 10 мин при 1,5 тыс. оборотах в минуту (двухкратно). На следующем этапе осаждают нуклеиновые кислоты и белок, охлажденной 5%-ной трихлоруксусной кислотой (ТХУК) путем тщательного перемешивания содержимого проб, а затем - отсутствие при + 4°С в течение 30 мин и последующего центрифугирования при 1,5 тыс. об/мин 10 мин.

Гидролиз ДНК проводят добавлением 0,5 мл горячей 5%-ной ТХУК и инкубацией проб в водяной бане при 90°С в течение 30 мин. После окончания гидролиза пробы центрифугируют в том же режиме. Центрифугат переносят в счетные флаконы, разбавляют его 10 мл сцинтилляционной жидкости

Ё

О

СО

ел

(ЖС-8) и помещают в счетчик Бета-1 вместе с флаконами с чистой ЖС (фон).

Счет каждой пробы осуществляют в течение 2 мин. После подсчета результаты опытных проб, контрольных (без митогена) и фоновых соответственно усредняют и выражают в числе импульсов в минуту или рассчитывают индекс стимуляции бластной трансформации (ИС) после вычитания фона по формуле

..j. Значение среднего счета опытной пробы Значение счета контрольной пробы

Пример. Кровь обследуемого М. вносили в 7 флаконов с 3 мл питательной смеси по 0,1 мл. Во флаконы 2 и 3 добавляли по 0,1 мл ФГА, разведенного в 120 раз (Бмкг/мл); во флаконы 4и,5и6и7-поО,1 мл катрэкса в разведении соответственно 1:10 и 1:20; флакон 1 оставили без митогена (контроль). Все пробы инкубировали 72ч. За 20 ч до окончания инкубации в пробы внесли по 0,2 мл ЗН-тимидина (все этапы осуществляли в стерильных условиях), а после окончания процесса культивирования - спе- циально обработаны и подготовлены к счету. Получены такие результаты (в имп/мин и ИС): фон - 248,260 - средняя 254; контроль - 1674; опыт с ФГА - 7029, 7872 - средняя

7450; ИСФГА

7450 - 254

5,1 ; Опыт с

1674 -254

катрэксом (К) - средняя 27322 в разведении 1:10(К1:10)и 1:20(средняя 21129):

..27322 - 254

ИС к 1 : 10

ИС К 1 : 20

1674 -254 21129 -254

19,2

14,8 .

1674 -254

Следовательно, активность катрэкса в 10-кратном разведении примерно в 3,8 раза выше таковой фитогемагглютинина, разведенного 120 раз (при сопоставлении как индексов стимуляции, так и числа импульсов в минуту).

Таким образом, катрэкс имеет выраженный митогенный эффект на лимфоциты и в разведении 1:10 соответствует активности ФГА-Р (Dlfco) в концентрации 15 мкг/мл при стоимости 1 дозы катрэкса - 10 коп.

Формула изобретения Способ оценки функционального состояния лимфоцитов путем проведения реакции бласттрансформации с митогеном и последующей оценкой индекса стимуляции лимфоцитов, отличающийся тем. что, с целью повышения экономичности способа при диагностических обследованиях в качестве митогена используют катрэкс.

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии. Целью изобретения является повышение экономичности способа при диагностических обследованиях. Катрэкс (вытяжку из печени черноморской акулы - катрана) используют для постановки реакции бласттрансформации лимфоцитов радиоиммунологическим методом в микромодификации Назарова П.Г. Митогенное действие катрэкса в разведении 1:10 не уступает таковой ФРА-Р (Dlfco) в концентрации 15 мкг/мл.