Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для оценки состояния иммунной системы организма.
Цель изобретения - повышение экономичности способа при диагностических обследованиях.
Способ осуществляют следующим образом.
Катрэкс (вытяжку из печени черноморской акулы катрон), используют в реакции бластной трансформации лимфоцитов радиоиммунологическим методом в микромодификации Назарова П.Г. Гепаринизированную венозную кровь больных по 0,1 мл вносят в стерильные пеницил- линовые флаконы с 3 мл питательной смеси (среда 199 с 10% сыворотки крупного рогатого скота и 200 единицами пенициллина со стрептомицином). В опытные пробы (по 2 флакона на каждую пробу) добавляют по 0,1 мл катрэкса. Пробы инкубируют в термостате при 37°С 72ч. За 20ч до окончания инкубации во все пробы в стерильных условиях вносят по 0,2 мл раствора тимидина, меченного тритием, содержащего 2 мк Ки. После
внесения радиоактивной метки пробы хранят при 37°С.
После завершения периода культивирования производят специальную обработку культур с целью отмывания клеток от невключившейся метки и подготовки их для радиометрии в сцинтилляционном счетчике.
На первом этапе осуществляют лизис эритроцитов и отмывку лимфоцитов 3%-ной уксусной кислотой центрифугированием в течение 10 мин при 1,5 тыс. оборотах в минуту (двухкратно). На следующем этапе осаждают нуклеиновые кислоты и белок, охлажденной 5%-ной трихлоруксусной кислотой (ТХУК) путем тщательного перемешивания содержимого проб, а затем - отсутствие при + 4°С в течение 30 мин и последующего центрифугирования при 1,5 тыс. об/мин 10 мин.
Гидролиз ДНК проводят добавлением 0,5 мл горячей 5%-ной ТХУК и инкубацией проб в водяной бане при 90°С в течение 30 мин. После окончания гидролиза пробы центрифугируют в том же режиме. Центрифугат переносят в счетные флаконы, разбавляют его 10 мл сцинтилляционной жидкости
Ё
О
СО
ел
(ЖС-8) и помещают в счетчик Бета-1 вместе с флаконами с чистой ЖС (фон).
Счет каждой пробы осуществляют в течение 2 мин. После подсчета результаты опытных проб, контрольных (без митогена) и фоновых соответственно усредняют и выражают в числе импульсов в минуту или рассчитывают индекс стимуляции бластной трансформации (ИС) после вычитания фона по формуле
..j. Значение среднего счета опытной пробы Значение счета контрольной пробы
Пример. Кровь обследуемого М. вносили в 7 флаконов с 3 мл питательной смеси по 0,1 мл. Во флаконы 2 и 3 добавляли по 0,1 мл ФГА, разведенного в 120 раз (Бмкг/мл); во флаконы 4и,5и6и7-поО,1 мл катрэкса в разведении соответственно 1:10 и 1:20; флакон 1 оставили без митогена (контроль). Все пробы инкубировали 72ч. За 20 ч до окончания инкубации в пробы внесли по 0,2 мл ЗН-тимидина (все этапы осуществляли в стерильных условиях), а после окончания процесса культивирования - спе- циально обработаны и подготовлены к счету. Получены такие результаты (в имп/мин и ИС): фон - 248,260 - средняя 254; контроль - 1674; опыт с ФГА - 7029, 7872 - средняя
7450; ИСФГА
7450 - 254
5,1 ; Опыт с
1674 -254
катрэксом (К) - средняя 27322 в разведении 1:10(К1:10)и 1:20(средняя 21129):
..27322 - 254
ИС к 1 : 10
ИС К 1 : 20
1674 -254 21129 -254
19,2
14,8 .
1674 -254
Следовательно, активность катрэкса в 10-кратном разведении примерно в 3,8 раза выше таковой фитогемагглютинина, разведенного 120 раз (при сопоставлении как индексов стимуляции, так и числа импульсов в минуту).
Таким образом, катрэкс имеет выраженный митогенный эффект на лимфоциты и в разведении 1:10 соответствует активности ФГА-Р (Dlfco) в концентрации 15 мкг/мл при стоимости 1 дозы катрэкса - 10 коп.
Формула изобретения Способ оценки функционального состояния лимфоцитов путем проведения реакции бласттрансформации с митогеном и последующей оценкой индекса стимуляции лимфоцитов, отличающийся тем. что, с целью повышения экономичности способа при диагностических обследованиях в качестве митогена используют катрэкс.
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ЛИМФОЦИТОВ | 2000 |
|
RU2182597C1 |
СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ЛЕЧЕНИЯ СИФИЛИСА | 1991 |
|
RU2009492C1 |
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ | 1996 |
|
RU2128838C1 |
Способ определения областной трансформации лимфоцитов | 1990 |
|
SU1777085A1 |
СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ ПРОЛИФЕРАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ ЛИМФОЦИТОВ | 2000 |
|
RU2167196C1 |
СПОСОБ КОНТРОЛЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ОБЛУЧЕНИЯ ДОНОРСКОЙ КРОВИ С ПОМОЩЬЮ РЕАКЦИИ АКТИВАЦИИ ЛИМФОЦИТОВ ФИТОГЕМАГГЛЮТИНИНОМ | 2015 |
|
RU2589281C1 |
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНДЕКСА СТИМУЛЯЦИИ ЛИМФОЦИТОВ ДЛЯ ОЦЕНКИ ИММУННОГО СТАТУСА НОРОК | 2003 |
|
RU2263317C2 |
СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО ПАНКРЕАТИТА | 1991 |
|
RU2008685C1 |
Способ прогнозирования рецидивов увеита | 1989 |
|
SU1727074A1 |
СПОСОБ ОЦЕНКИ РЕАКЦИИ БЛАСТТРАНСФОРМАЦИИ ЛИМФОЦИТОВ МЕТОДОМ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОФЛУОРИМЕТРИИ ПРИ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ АКТИВАЦИИ АНТИГЕНОМ | 2015 |
|
RU2582395C1 |
Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии. Целью изобретения является повышение экономичности способа при диагностических обследованиях. Катрэкс (вытяжку из печени черноморской акулы - катрана) используют для постановки реакции бласттрансформации лимфоцитов радиоиммунологическим методом в микромодификации Назарова П.Г. Митогенное действие катрэкса в разведении 1:10 не уступает таковой ФРА-Р (Dlfco) в концентрации 15 мкг/мл.
Иммунологические методы/ Под ред | |||
Г | |||
Фримеля, М.: Медицина, 1987, с | |||
ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ТЕРМИОННАЯ ЛАМПА | 1920 |
|
SU294A1 |
Авторы
Даты
1991-03-15—Публикация
1988-02-11—Подача