Инкубационная среда для радиоиммунологического определения пролактина в сыворотке крови человека Советский патент 1992 года по МПК G01N33/534 

(1 зоПрстенне относится к медицинскому рациоиммучологичеокому микроанализу, .I именно к способам определения гфсшактина в биологических жидкостях, и может быть использовано в био,л пш и медицине с целью измерения концентрации пролактина при беременное гп, г иноь ичсских заболеваниях и нарушениях функционирования гипофиза.

Цель изобретения - упрощение состава инкубационной среды и повышение воспроизводимости результатов определения.

Цель достигается инкубационной средой, содержащей: антитела к пролак- тину, 2 1-пролактин, сыворотку крови лошади, вторые антитела, полиэтн- ленгликоль и буферные соли при следующем соотношении компонентов,.%:

fo,)n10 0,0073-0,0035

1,0-1,7 0,115-0,230

5,4r6,9 0,056-0,167 0,165-0,495

Остальное

(151-иролактии

Антитела к пролактнну

Сыворотка крови лошади

Вторые антитела

ПолиэтПленгликоль

Ра%Р04

Дистиллированная

вода

Таким образом, инкубационная среда для определения гфонгктина в сыворотке крови человека заявляемого состава отличается от прототипа менъшпм количеством ингредиентов (вместо эмбриональной сыворотки крови телпт, сыворотки крови кроликов, бычьего сывороточного альбумина и гамма-гло- 6}чинов кропика в состав инкубацнон- но среды в качестве белка-наполнителя вводится один компонент - сыворотка крови лошади). Это позволяет су- тественно упростить технологию приготовления инкубационной среды в производственных условиях и повысить воспроизводимость определения с ее помощью пролактнпа в сыворотке крови человека „

1 звестно применение сыворотки крови лошади в качестве кортизолсвя- зычающей системы в радиоиммунологи- ческом определении кортизола. Однако в литературе нет сведении о применении лошадиной сыворотки в качестве ингредиента инкубационной среп,ы для радиоиммунологического определения белковых гормонов. Заранее невозможно было предсказать отсутствие перекрестной реакции компонентов лошадиной сыворотки и пролактина человека с антителами. По-видимому, возможность замены нескольких общеуиотреб- ляемых ингредиентов лошадиной сывороткой при хорошей воспроизводимости и точности является особенностью заявляемой инкубnunoHHoi i срелы дли радиоимму нол отческого определения пролактпна.

Пример 1. Радиоиммунологи- мсское опредеткм ме пролактина и сыворотке крови при оптимальных значения содержания ипгрецисптоп инкубационной среды.

Инкубационную г-.теду получают смешиванием ролпчпо | г. имп. ющях концентрациях, мг.г . :

-Л |

35738

-м

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

251-пролактин 1, Антитела к пролг к- тину0,0029

Сыворотка кропи лошади1 35

Вторые антитела 0,172 Полиэтнленгликоль 6,15 NalUPO.0,112

NaeHP04 -0,330

Дистиллированная водаОстальное

Радноиммунологический анализ включает следующие стадии;

1. Внесение в пробирку с сывороткой крови человека или калибровочной пробой (0,1 ь. О. последовательно I- пролактина (0,1 мл) и антнсыворотки к пролактину (0,1 мл), содержащих буферные соли и сыворотку крови лошади.

2„ Преинкубация содержимого пробирок в течение 1В ч при 200С„

3. Внесение в пробирки 1 мл смеси, содержащей полиэтилечгликоль, вторые антитела и сыворотку крови лошади,

4„ Инкубация содержимого пробирок 1 ч при 20°С (во время инкубации устанавливается динамическое равновесие между комплексом пролактин - антитела к пролактину - вторые антитела и свободными пролактином, антителами к пролактину и вторичными антителами.

5„ Центрифугирование, удаление жидкой фазы, измерение скорости счета г51 в твердой фазе.

Строят калибровочный график зависимости скорости счета от концентрации пролактина в калибровочных пробах и по этому графику определяют содержание пролактина в неизвестных пробах сыворотки крови человека.

Пример.. Радиоиммунопоги- ческое определение пролактина в сыворотке крови человека при нижних граничных значениях содержания ингредиентов инкубационной среды,.

проведения анализа используют инкубационную среду с нижними граничными значениями содержания ингредиентов, мас.,%:

1251-пролактин0,

Антитела к пролактину,0,0023 Сыворотка крови лошади1, о Вторые антитела 0,115 Полиэтиленгликоль г,(4 NaHeP04 О,OS6

-и

51

Иа НРОф0,165

Дистиллированная подаОстальное

Получение инкубационной среды л радиоиммуиологическое определение пролактина проводят, как описано в примере 1, за исключением того, что количестпа добавляемых ингредиентов инкубационной среды изменяют в гост- ветстпии с заданными значениями нижних концентраций.

П р и м е р 3. Радиоиммунологическое определение пролактина в сыворотке кропи при верхних граничных значе ниях содержания ингредиентов.

Для проведения анализа используют инкубационную среду с верхними граничными значениями содержания ингредиентов, мас.,%: Т-пролактин 2,1 «10 Антитела к пролак- тииу 0,0035 Сыворотка крови лошади 1 ,7 Вторые антитела 0,230 Полиэтилеигликоль 6,9 NaH2P04 0,167 О, А 95 Дистиллированная

водаОстальное

Получение инкубационной средь; в радиоиммунологическое определение пролактинп проводят, как описано в примере 1, за исключением того, что количества добавляемых ингредиентов инкубационной среды изменяют в соответствии с заданными значениями верхних концентраций,,

Результаты радиоиммунологического определения пролактина в сыворотке крови практически здоровых женщин, мужчин и беременных женщин с помощью набора HPKLK-PR, инкубационная среда которого была выбрана в качестве про- тотипа, и с помощью предлагаемой инкубационной среды приведены в таблице „ i

Результаты экспериментов сравннва- ются с данными, полученными на тех же образцах сыворотки крови с помощью набора реактивов дпл радноиммуно- логического анализа HPRTK-PR фирмы CIS - International (прототип) в точ

S

7

г)

5

0

Q

Q

0

5

18А

ном соотретстпнг с нмгтрукрнсй по применению,.

Анализ результатов экспериментов показывает, то предлагаемая инкубационная среда позволяет проводить радиоиммунологическое определение пролактина в сыворотке крови человека „ Значения концентраций пролактнна в образцах сыворотки крови человека, полученные с помощью заявляемой инкубационной среды, соответствуют физиологическому состоянию фрганизма и верифицированному диагнозу и не отличаются от значений, полученных с помощью инкубационной среды-прототипа; состав предлагаемой инкубационной среды значительно проще состава прототипа, что значительно облегчает технологию ее изготовления и повышает экономичность; предлагаемая инкубационная среда позволяет получать хорошо воспроизводимые реэульта ты, что повышает достоверность определения пролактина, особенно гри диагностике важных высоких концентраций гормона..

Формула изобретения

Инкубационная среда для радиоиммунологического определения пролактина в сыворотке кропи человека, включающая г I-пролактин, антитела к про- лактину, белок-напопнителъ, вторые антитела, полиэтиленгликоль, буферньк соли и дистиллированную воду, о т л I чающаяся тем, что, с целью упрощения состава среды и повышения воспроизводимости результатов при определении, в качестве белка-наполнителя используют сыворотку крови лошади при следующем соотношении компонентов, мас„%:

1гГ1-пролактин (0,7-2,ОНО

Антитела к пролактину0,0023-0,0035

Сыворотка крс.п

лошади1,0-1,7

Вторые антитела 0,115-0,230

Полиэтиленгликоль 5,4-6,9

NaH2P040,056-0,167

,165-0,495

Дистиллирован пая

водаОстальное

Изобретение относится к медицинскому радпопммунологическому микро- анагш-jv ч может быть использовано в биохиппи н медицине с целью нзмерения концентрации пролактина при беременности, гинекологических заболеваниях и нарушениях функционирования гипофиза. Цель изобретения - упрощение состава инкубационной среды, повышение воспроизводимости результатов определения. Инкубационная среда 4 Т включает 1-пролактин , антитела к пролактину, вторые антитела, белок- наполнитель (сыворотку крови лошади), полиэтиленгликоль, буферные соли и дистиллированную воду при следующем соотношении.компонентов, мас.%: 251-пролактин (0, 7-2, 1 ) антитела к пролактину 0,0023-0,0035; вторые антитела 0,115-0,230; сыворотка крови лошади 5,4-6,9; 0,056-0,167; 0,165-0,495; -дистиллированная вода остальное. В примерах показано радиоиммунологическое определение пролактина в сыворотке крови человека при оптимальных и граничных значениях содержания ингредиентов инкубационной среды. 1 табл„ S (Л с& оо СЛ -J СО 00