Инкубационная среда для иммунорадиометрического определения пролактина в сыворотке крови Советский патент 1990 года по МПК G01N33/534 

Изобретение относится к медицинскому микроанализу и может быть использовано в медицине для диагностики и контроля за лечением эндокринных заболеваний.

Целью изобретения является упрощение и увеличение чувствительности определения пролактина.

Цель достигается применением инкубационной среды, содержащей антисыворотку к пролактину,, меченному йодом- 125 антитела к пролактину, сыворотку крови лощади полиэтиленгликоль, буферные соли и воду при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Антисыворотка к пролактину И51-Антитела к пролактину (3- 5 мКи/мг)

Сыворотка крови

лошади

Полиэ тиленгликоль

NaH2P04

NaCl

Дистиллированная

вода

(1,5-600) 10

-з

(1,5-12) -1Q

3,2-10

5,0-7,5 (8,0-50) -10 (4,0 24) -10 (4,0-90)40

Остальное

-7

-2. -Ъ -2

СП

Kj

00 Од

ел

со

Антисыворотку к пролактину получа ют иммунизацией кроликов чистым про- лактином человека. Для получения антител, меченных г31, иодирую т мышиные моноклональные антитела, выделенные из асцитной жидкости аффинной хроматографией на иммобилизованном пролактнне. Антисьшоротка и 251-ан

титела не дают перекрестной реакции с гормоном роста, тиреотропным лютеи- низирующим и фолликулостимулирующим гормонами, а также с пролактином лошади.

Пример I. ИммунорадиометТэи- ческое определение пролактина в. сыво- ротке крови человека при оптимальных значениях содержания ингредиентов инкубационной среды.

В эксперименте получают инкубационную среду путем смешивания реаген- тов и проводят иммунорадиометрическое определение пролактина в различных пробах сыворотки крови человека. Чувствительность анализа оценивают как наименьшую определяемую концентрацию гормона, достоверно (,01) отличающуюся от нулевой,,

Инкубационную среду с оптимальными значениями содержания ингредиентов готовят следующим образом. К 100мл сыворотки крови лошади приливают 1 мл антисыворотки к-пролактину, перемешивают и прибавляют 5 г , 0,24 г КаНгР04 и 6 г NaCl. После растворения солей общий объем раствора доводят до 500 мл и при постоянном перемешивании приливают 500 мл 30%-ного раствора полиэтиленгликоля (мол.масса 4000-6000). В аналитическую пробирку

10

f5 JQ25

8659

и проводят инкубацию в течение 3 ч при комнатной температуре. Затем жидкую фазу удаляют центрифугированием и измеряют скорость счета 4У1в твердой фазе. Строят калибровочный график зависимости скорости счета ws I от концентрации пролактина в калибровочных пробах и по этому графику определяют содержание пролактина в неизвестных пробах сыворотки.

Результаты эксперимента приведены в таблице.

Пример 2. Иммунорадиометрическое определение пролактина в сыворотке крови человека при нижних граничных значениях содержания ингредиентов инкубационной среды.

Для проведения анализа используют инкубационную среду с нижними граничными значениями содержания ингредиентов , мае.%:

Антисыворотка к

пролактину

1251-Лнтитела к

пролактину

Сыворотка крови

лошади

Полиэтиленгликоль

Na2HP04

NaHtP04

NaCl

Дистиллированная

в од аОс тально е

Получение инкубационной среды и иммунорадиометрическое определение пролактина проводят, как описано в примере 1, за исключением того, что количества добавляемых ингредиентов

Изобретение относится к медицинскому микроанализу и может быть использовано в медицине для диагностики и контроля за лечением эндокринных заболеваний. Цель изобретения заключается в упрощении и увеличении чувствительности определения пролактина. Сущность изобретения состоит в том, что при иммунорадиометрическом определении пролактина в сыворотке крови инкубационная среда содержит антитела к пролактину в виде антисыворотки, в качестве белка-наполнителя - сыворотку крови лошади и дополнительно содержит полиэтиленгликоль при следующем соотношении компонентов, мас.% : антисыворотка к пролактину - (1,5 - 600) .10 -3

125I-антитела к пролактину (3 - 5 мКи/мг) - (1,5 - 12) .10 -7

сыворотка крови лошади 3,2 - 10

полиэтиленгликоль 5,0 - 7,5

NA 2HPO 4 - (8,0 - 50) .10 -2

NAH 2PO 4 - (4,0 - 24) .10 -3

NACL (4,0 - 90) .10 -2

дистиллированная вода остальное.

45

вносят 0,2 мл полученной смеси и 0,2 мл до инкубационной среды изменяют в соотраствора 51-антител к пролактину

(200-нг).

В результате получается инкубационная среда со следующими значениями содержания ингредиентов, мас.%:

Антисьшоротка к пролактину50-101251-актитела к

пролак тину5,010

Сыворотка крови

лошади5,0

Полиэ тйленглик оль 6,25

Na2HP0425 10

NaH2P0412«10

NaCl30.10

Дис тиллиров зная

водаОстальное

В пробирку вносят Q,J мл анализируемой сыворотки крови, встряхивают

-э

-7

г« -з

-г

50

ветствии с заданными значениями нижних граничных концентраций. .

Результаты эксперимента приведены в таблице.

Пример 3. Иммунорадиометрическое определение пролактина в сыворотке крови человека при верхних граничных значениях содержания ингредиентов инкубационной среды.

Для проведения анализа используют инкубационную среду с верхними гранич ными значениями содержания ингредиентов , мае.%:

55

Антисьюоротка к пролактину60010

1251-Антитела к пролактину12-10

Сыворотка крови лошади10

-з

-7

5

0

ветствии с заданными значениями нижних граничных концентраций. . .

Результаты эксперимента приведены в таблице.

Пример 3. Иммунорадиометрическое определение пролактина в сыворотке крови человека при верхних граничных значениях содержания ингредиентов инкубационной среды.

Для проведения анализа используют инкубационную среду с верхними гранич- ными значениями содержания ингредиентов , мае.%:

Антисьюоротка к пролактину60010

1251-Антитела к пролактину12-10

Сыворотка крови лошади10

-з

-7

Полиэтиленгликол

Na2HP04

NaH ZP04

NaCl

Дистиллированная

вода

Получение инкубационной среды и иммунора диометрическое определение пролактина проводят, как описано в примере 1, за исключением того, что количества добавляемых ингредиентов инкубационной среды изменяют в соответствии с заданными значениями верхних граничных концентраций.

Результаты эксперимента приведены в таблице.

При использовании предлагаемой инкубационной среды достигается более высокая чувствительность определения (0,3-0,4 мг/мл), чем в методе с использованием инкубационной среды - прототипа (1 мг/мл). Кроме того, достигается существенное упрощение процесса получения инкубационной среды, который включает одну простую стадию смешения ингредиентов в необходимых пропорциях, не требует специальной очистки антител и исключает их потери.

Аналитические параметры иммуно определения пролактина

20

578659

Формула изобретения Инкубационная среда для иммунора- диометрического определения пролакти- е на в сыворотке крови, включающая антитела к пролактину, меченные йодом - 125 антитела к пролактину, белок - наполнитель, водный буферный раствор, отличающаяся тем, что, с

Ю целью упрощения и повышения чувствительности при использовании ее для определения, она содержит антитела к пролактину в виде антисыворотки, в качестве белка наполнителя - сыворот15 ку крови лошади, буферного раствора - натрийфосфатный буфер и дополнительно содержит полиэтиленгликоль при следующем соотношении компонентов, мае.%:

к к и

ая

(1,5-600) 10

-3

(1,5-1,2ЫО 3,2-10

-7

5,0-7,5 (8,0-50)40 (4,0-24)-10 (4,9-90) -10

Остальное

-2

I

Г3

-2