Способ радиоиммунологического определения сексстероидсвязывающего глобулина в сыворотке крови человека Советский патент 1990 года по МПК G01N33/534 

Изобретение относится к медицинскому микроанализу, а именно к способам радиоиммунологического определения ССГ в сыворотке крови человека, и может быть использовано в биохимии, медицине и физиологии человека для оценки эндокринного статуса организма.

Цель изобретения - ускорение и упрощение способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Анализируемые образцы сыворотки крови и калибровочные пробы инкубируют с 1-ССГ, антисывороткой к ССГ и вторыми антителами в буферном растворе полиэти- ленгликоля при комнатной температуре в течение 1 ч, центрифугируют и проводят радиометрию осадков.

Инкубационная среда для радиоиммунологического определения ССГ содержит 1-ССГ, антитела к ССГ, вторые антитела и полиэтиленгликрль в буферном растворе при следующем соотношении компонентов, мас.%:

1-ССГ(10-20 мКи/ммоль) (1-2)-10

Антитела к ССГ .(2-3)-10

Вторые антитела0,09-0,18

Трис0,9-1,2

.на.0,07-0,08

Полиэтиленгликоль4,5-5

. Дистиллированная водаОстальное

Расчет концентрации антител в системе проводят по известному методу (R.Mulleret. al.J.lmmunol.Meth., 1980, v. 34, p.. 345-352).

О

о

СА) СО

О VI

При м е р 1.

t.1. .Готовят ЮО мл раствора, содержащего 4,5 г полиэтиленгликоля, 1,2 г Трио, 0,2 мл HCr(d24 .fl6)-100 мкл антител к иммуноглобулинам кролика и антитела к ССГ в конечной концентрации 1:5000 рН8,®.

1.2. Обозначают по две пробирки для подсчета общей активности 1-ССГ (Т), для калибровочных проб ССГ и для анализируемых образцов сыворотки крови.

,1.3. В аналитические пробирки вносят по 0,05 мл калибровочных проб, содержй- щих О,- 10; 20; 40; 80; 160; 320; 640 нмоль/л ССГ, и анализируемых образцов сыворотки крови согласно маркировке,.

1,4. Во все пробирки вносят по 100 мкл раствора V I-CCrC 40000 расп./мин).

- 1,5. Во все пробирки, кроме Т, вносят по 1 мл раствора полиэтиленгликоля, приготовленного по п. 1.1. Содержимое пробирок тщательно перемешивают.

1.6.Инкубируют все пробирки при комнатной-температуре в.течение 1 ч.

1.7.Все пробирки, кроме Т, центрифугируют при ускорении 1500-2000 g в течение 20 мин,

1.8.Супернатант удаляют, измеряют скорость счета в каждой пробирке.

Расчеты. Находят среднее арифметическое значение скоростей счета для каждой пары пробирок. Рассчитывают величину В/Во для каждой пары пробирок калибровочного графика и неизвестных проб, где Во - средняя скорость счета в пробирках, содержащих калибровочную пробу О нмоль/л ; В - средняя скорость счета в пробирках, содержащих калибровочные или неизвестные пробы.

В полулогарифмических или logit-log координатах строят для калибровочных проб график зависимости В/Во от концентрации ССГ в этих пробах. Для неизвестных проб сыворотки крови на основании соот- ветствующих значейий В/Во по калибровочному графику определяют концентрацию ССГ. Для образца анализируемой сыворотки крови значение В/Во составляет 40%, что соответствует концентрации ССГ 117 нмоль/л.

Л р и м е р 2. При использовании данно- .го способа и инкубационной среды следующего состава, мае. %:

1-10 2-10 0,09

,-7

г5

10

5

0

5

0

5 0

5 0

Трис0,9

HCI0,07

Полиэтиленгликоль4,5

Дистиллированная водаостальное ,

концентрация ССГ в анализируемом

образце сыворотки кровисоставляет

130 нмоль/л.

.

П р и м е р 3. При использовании данного способа и инкубационной среды следующего состава, мас.%:

1-ССГ2-10-7

Антитела к ССГ3-10

Вторые антитела0,18

Трис1,2

HCI0,08

Полиэтиленгликоль5

Дистиллированная вода остальное, концентрация ССГ в анализируемом образце сыворотки крови составляет 120 нмоль/л. Таким образом, предлагаемый способ и инкубационная среда позволяют проводить радиоиммунохимический анализ ССГ в сыворотке крови человека в течение 1,5- 2 ч по сравнению с 27 ч в прототипе. Диапазон определяемых концентраций способа (10-640 нмрль/л) охватывает все уровни ССГ в сыворотке крови человека при различных Физиологических состояниях организма, что упрощает способ определения.

. Формула изобретения

Способ радиоиммунологического определения сексстероидсвязывающего глобулина в сыворотке крови человека, в к лючающий инкубацию пробы с меченным 1-сексстероидсвязывающим глобулином и специфическими антителами в буферном водном растворе, разделение свободного и связанного с антителами антигена с помощью вторых антител и полиэтиленгликоля и радиометрию осадка, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, перед инкубацией вносят вторые антитела и Полиэтиленгликоль вместе со специфическими антителами, при этом в качестве буферного раствора используют трис-НС1 буфер при следующем соотношении компонентов, мас.%: .

lOR

1-Сексстероидсвязывающий ИН (ССГ),

глобу10-20 мКи/ммоль

Антитела к ССГ

Вторые антитела

Трис

HCI

Полиэтиленгликоль.

Дистиллированная вода

-7

(1-2)-10 (2-3)-10 0,09-0,18 0,9-1,2 0,07-0,08 4,5-5 Остальное

Изобретение относится к области медицинского микроанализа и может быть использовано в биохимии, медицине и физиологии человека для оценки эндокринного статуса организма. Цель изобретения заключается в ускорении и упрощении способа. Сущность изобретения состоит в том, что при радиоиммунологическом способе определения сексстероидсвязывающего глобулина (ССГ) в сыворотке крови человека разделение свободного и связанного с антителами ССГ осуществляют с помощью вторых антител и полиэтиленгликоля, которые вносят в инкубационную среду вместе с антителами к ССГ перед началом инкубации анализируемой пробы. При этом инкубационная среда содержит следующие компоненты, мас.%: ¹²⁵I-ССГ (10-20 мКи/ммоль) (1-2)^.10^-7

антитела к ССГ (2-3)^.10^-5

вторые антитела 0,09-0,18

ТриС 0,9-1,2

HCL 0,07-0,08

полиэтиленгликоль 4,5-5

дистиллированная вода остальное.