Питательная среда для глубинного культивирования BacILLUS SUвтILIS ВКПМ В-2595 - продуцента L-амилазы Советский патент 1991 года по МПК C12N1/20 C12N9/28 C12N1/20 C12R1/125 

1

(ТТ) 4494601/13

(22) 19.09,88

(46) 30,04.91„ Бюл„ № 16

(71)Всесоюзный научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии Госагропрома СССР

(72)БоАо Устннников, Н0В0 Цурикова, Н.Н„ Воронцова, Е„А„ Двадцатова,

Л.И. Волосова и И.Ф. Полякова (53) 663.15(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР К 840099, кл„ С 12 С 7/04, 1981. Авторское свидетельство СССР N 1094297, KJU С 12 N 1/20, 1982„

(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ BACILLUS SUBTILIS ВИН В-2595 - ПРОДУЦЕНТА Об -АМИЛАЗЫ (57) Изобретение относится к биотехнологии, а именно касается состава питательной среды для культивирования продуцента об-амилазы Вас. subti- lis В-2595, используемой для гидролиза крахмалсодержацего сырья,, Цель изобретения - увеличение активности продукта и снижение его себестоимости., Изобретение заключается в том, что в среду вводят в качестве дополнительного источника азота и серы сернокислый аммоний, сухие кормовые дрожжи и тиамин при следующем соотношении компонентов, мас„%: кукурузная мука 12-20; (NH4)ZSOU 0,6-1,3; сухие кормовые дрожжи 0,3-0,6; тиамин 0,0033-0,0045; мел 0,2-0,5; мочевина 0,4-0,5; вода до 100„ Среда обеспечивает активность 04-амилазы до 240 ед/мп. 4 табл.

г

(Л

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к питательным средам для культивирования микроорганизмов, и может быть использовано при промышленном получении амшюлитичес- ких ферментных препаратов путем глубинного культивирования штамма Bacillus subtil is ВКПМ В-2595 для гидролиза крахмалсодержащих веществ„

Цель изобретения - повышение активности продуцента и снижение себестоимости амилолитических ферментов

Изобретение осуществляют следующим образом

Продуцент Bacillus subtilis ВКПМ В-2595 (82) культивируют на среде, содержащей в качестве источника углерода кукурузную муку, в качестве источника азота - мочевину и дополнительно сухие кормовые дрожжи и сернокислый аммоний, являющийся одновременно источником серы, а также тиамин, мел и воду при следующем соотнеиении компонентов, мае„ %

Кукурузная мука 12-20 Сернокислый аммоний0,6-1,3

05

4Ь СД

ьэ

со

Сухие кормовые дрожжи с содержанием сырого протеина 40% и СВ 92%0,3-0,06 5

Тиамин 0,0033-0,0045 Мочевина 0,4-0,5 Нел0,2-0,5

ВодаДо 100 ,0

При введении комплекса компонентов (сухих кормовых дрожжей, тиамина и сернокислого аммония) сера, входящая в состав сернокислого аммония, включается в белок, вводимый с jr кормовыми дрожжами, и стимулирует биосинтез оЈ, -амилазы с одновременным разрушением оболочки клетки и выделением об-амилазы в среду, а тиамин обогащает среду биологически 20 активными компонентами, в том числе и серой.

При раздельном введении компонентов активность Об-амилазы снижается, что видно из табло 1 „25

Присутствие кормовых дрожжей резко подщелачивает питательную среду, что, в свою очередь, положительно влияет на разрушение (лизис) бактериальных клеток, приводящее к допол- ,Q нительному выделению эндогенной 06 - амилазы, а следовательно, и повышению активности,,

Используют тестированные сухие кормовые дрожжи, содержащие сухих веществ 90-92%, протеина - не менее 40%0

35

Активность об-амилазы определяют стандартным методом.

В табл. 2 приведены сравнительные данные активности сЈ-амилазы, синтезируемой Bacillus .subtilis-82 и известными штаммамис

Изобретение иллюстрируется примерами.

Пример 1. Культуру B.subti- lis - 82 выращивают глубинным способом в течение 60 ч при 35°С на качалке (220 об/мин) на ферментационной среде следующего состава, мас.%: Кукурузная мука . 14,0 Сернокислый аммоний 0,6 Мочевина° 4

Кормовые дронжи0,3

Тиамин0,0033

Мел° 5

ВодаДо ЮО

5

0

r 0

5

Q

5

5

0

5

Контролем служит ферментационная среда следующего состава, мас.%: Кукурузная мука 6,0 (Ш4)гНР040,9

Мел0,2

Мочевина0,15

БардаОстальное

Полученные при этом активности Об амилазы составляют соответственно 150,0 и 60,0 ед/мло

Пример 2 Культивирование продуцента осуществляют глубинным способом в течение 72 ч при 35еС на качалке (220 об/мин) на среде следующего состава, мас„ %:

Кукурузная мука 20 (ННф)г8041,3

Мочевина0,5

Кормовые дрожжи 0,6 Мел0,5

Тиамин0,004

ВодаДо 100

Активность &-амилазы составляет 240 ед/мл.

П р и м е р 3. В. subtilis-82 выращивают глубинным способом в течение 72 ч при температуре 35°С на качалке на питательной среде следующего состава, мас„ %:

Кукурузная мука 14,0 (Ш4)25041,3

Тиамин0,0045

Мочевина0,45

Кормовые дрожжи 0,5 Мел0,35

ВодаДо 100

Активность фермента составляет 170 ед/мЛс.

Таким образом, реализация изобретения позволяет повысить активность uL -амилазы за счет использования новой питательной среды,

В табл, 3 и 4 приведен состав среды по изобретению и известной питательной среды и активность ф -а&илазы при выращивании, Bacillus subtilis-82 на этих средахо

Таким образом, питательная среда обеспечивает повыиение pi-амилазной активности, что ведет к увеличению выхода, снижению себестоимости фермента

Формула изобретения

Питательная среда для глубинного культивирования Bacillus aubtllis ВКПМ В-2595 - продуцента Об -амилазы, содержащая кукурузную муку, мел, мо16с я

5

чевинуи воду,о тличающая тем, что, с целью увеличения активности продуцента и снижения себестоимости продукта, среда дополнительно содержит сухие кормовые дрожжи, сернокислый аммоний и тиамин при следующем соотношении компонентов. мас„ Z:

i

Куку- Серно- Сухие Тиа- Мел Мо- Во- Ак- руз- кис- кор- мин че- да тив- ная лын мовые ви- ность мука аммо- дрож- на ний жилазы,

ед/мл

+++++++240,0

+-+++++120,0

++-+++125,0

+-+++++160,0

++-++++180,0

+++++165,0

Таблица 2

Название штамма Активность

Об-амилазы

по ме- по стан- тоду дартному Вера методу

Bacillus subtilis-82 3120,0240,0

Bacillus subtilis-65 553,542,6 Bacillus subtilis

ВНИИ генетика - 42 2625,0125,0

Примечание, Среда - предложенная„

Таблица 3

Компоненты пита-Содержание компонентов

тельной среды

Предлагаемый состав Известный

.TE.

Кукурузная мука

Сернокислый

аммоний

Сухие кормовые

дрожжи

Тиамин

Мел

Мочевина

12

0,6

20

14

14

25

12

1,3 , 0,9 0,5 1,5

0,3 0,6 0,40,10,7

0,0033 0,0045 0,00350,0010,006

0,2 0,5 0,40,10,6 0,2 0,5

0,4 0,5 0,450,30,6 0,15 0,2

Кукурузная мука12-20

Сернокислый аммоний0,6-1,3 Сухие кормовые дрожжи 0,3-0,6

Тиамин0,0033-0,0045

Нел0,2-0,5

Мочевина0,4-0,5

ВодаДо 100

Таблица 1

14

14

25

12

Питательная среда

-Предлагаемая

1234 5

Активность оЈ-амипаэы, ед/мл

150 240 170 130 130

16452918

Таблица 4

Известная

100