Способ культивирования @ @ -продуцентов @ -амилазы Советский патент 1984 года по МПК C12N9/32 C12N1/20 

Изобретение откосится к 6иоскнте зу ферментов, а именно к способу культивирования продуцентов ашадазы например Bacillus subtilia, на питательной среде с биостимуляторами и может быть использовано цдя полу- чёния высокоактивных ipenaPSTOB для животноводстваJ а также дая пищевой легкой и других отраслей прог-аштенности. Известны способы с использовашлем стимуляторов для биосинтеза амилаз у бактериапьнь х продуцентов S например, с использованием в качестве сти муляторов полиалкилдиаминов извлек e№iix из культуральной жидкости после выращивания этих же бактерий til а также -полиоксипропилекового эфира добавляемого в больших количествах . и порционно L21. Однако указанные cти fyлятopы или добавляются в среду в больших количестваХр или имеют сложну о технологию получения и нестандартны. Наиболее близким к предпагаемому по технической . сущности и достигаемому положительному эффекту является способ культивирования продуцеято ci-амилазы в условиях аэрации на пита тельной среде, содержащей источники углерода, азота, минеральжш соли,, стимуляторы роста и водУэ согласно которому микроорганизмы выращивают

Таблица i 7 на богатых крахмалом средах с- примё нением стимуляторов роста - кукурузного экстракта и гидролизата дрожжей 133. Однако интенсивность биосинтеза амилазы при известном способе культивирования недостаточно высока, особенно если учесть высокое содержание крахмала в питательной среде (24%). Цель изобретения - повышение амилолитической активности. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу культивирования Bacillus subtills продуцентов о -амилазы в условиях аэрации на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли, стимуля торы роста и воду, в качестве стимуляторов роста используют соли высокомолекулярных сланцевых кислот, содержащие ионы Со- , На и Mcj , Ыа и Mi , которые добавляют в среду в концентрации 0,0005-0,00 мас.%. Используеьые стимуляторы - соли высокомолекулярнь х сланцевых кислот (.ВМК1 представляют собой смесь полифункциональных соединений с моле- кулярг ой массой от тыс, до 100 тыс. и элементным составом, приведенным в табл. 1.

СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ BACILLUS SUBTILIS - ПРОДУЦЕНТОВ с/ АМИЛАЗЫ в условиях аэрации на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли, стимуляторы роста и воду, отличающийся тем, что, с целью повышения амилолитической активности, в качестве стимуляторов роста используют соли высокомолекулярных сланцевых кислот,, содержащие ионы Со , Ма- и Mcj , Na и N-l , которые добавляют в среду в концентрации 0,0005-0,00 мас.% О)

Способ осуществляют следующим образом,

Для культивирова шя продуцентов, например Bacillus subtiiis, готовят питательную среду следующего соста9,0

3,7 Ni;6,2

2,6 Mg;3,5

Со;2,4

ва, мас,%: крахмал 24,0; кукурузный экстракт (50% СВ) 1 ,20; сухие дроисжи 0,24; лактоза 0,30; магний сернокислый 0,015; калий фосфорнокислый 0,30; аммоний фосфорнокислый 3 двузамещенньш 0,84; натрий хлористый 0,03; медь сернокислая 0,00039 окись кальция 0,012; кальций углекислый 0,03; амилосубтилин ГЗХ О,1 рН среды 6,2-6,4. Для интенсификации процесса об зования ci,-амилазы перед посевом культуры бактерий в среду вводят стерильно стимулятор биосинтеза фе ментов, в качестве которрго исполь зуют сопи высокомолекулярных кисло продуктов водно-щелочного окисления керогена сланцев, содержащие и ны кобальта, натрия, а также никел или магния при концентрации стимулятора 0,0005-0,001%. Культивирование микроорганизмов проводят в колбах на качалке или в полупромьгашенных условиях на фер ментаторах емкостью 1,5 м период ческим методом. Эффект от применения стимуляторов биосинтеза амилазы определяют приросту ее активности по сравнени с активностью, полученной в услови без стимулятора, и выражают в еданицах активности и в процентах. Пример 1. При выращивании бактерий Bacillus subtilis SK-52 н питательной среде с крахмалом,состав которой приведен выше - прои водственной среде Вильнюсского ОПЗ ферментных препаратов - и при доба лении в качестве стимулятора биосинтеза dL- амилазы натриевых солей высокомолекуляр1ых сланцевых кислот а-ВМК) в количестве 0,001% в ферментаторах емкостью 1,5 м актив ность амилаз в опыте составляет 4395-5160 ед/мл по сравнению с 4028 ед/мл в контроле (т.е. 110,5128% в опыте по сравнению со 100% контроля). Пример 2. При выращивании производственной культуры бактерий Bacillus subtilis SK-52 в условиях примера 1, но при добавлении в качестве стимулятора кобальтовых солей высокомолекуляриых сланцевых кислот Со-ВМК) в концентрации 0,0005% биосинтез i амилаз составляет в среднем 3554 ед/мл по сравнению с 3025 ед/мл в контроле Д116 и 100% соответственно). Пример 3. При выравшвании культуры Bacillus subtilis 5140 в лабораторных условиях на производственной среде с крахмалом в качапочных колбах емкостью 750 мл 7 с объемом среды 50 мл при 32 С и при добавлении в качестве стимулятора 0,0075% натриевых солей высокомолекулярных кислот (Ыа-ВМК биосинтез амилаз составляет в среднем 706 ед/мл по сравнению с 668 ед/мл в контроле (105,7 и 100% соответственно V Пример 4. При выращивании Bacillus subtilis SK-52 в условиях примера 3, но при использовании в качестве стимулятора магниево-натриевой соли высокомолекулярных сланцевых кислот (M(j44a-BMK) в количестве 0,0005% биосинтез амилаз составляет в опыте в среднем 779 ед/мл по сравнению с 668 ед/мл в контроле ((113,8 и 100% соответственноУ. Пример 5. При выращивании культуры Bacillus subtilis 5140 в условиях примера 3, но при использовании в качестве стимулятора 6,0005% кобальтовых солей высокомолекулярных сланцевых кислот (Со-ВМК биосинтез амилаз в опыте составляет 735 ед/мл по сравнению с 668 ед/мл в контроле (ПО и 100% соответственно). Пример 6. При выращивании культуры Bacillus subtilis SK-52 в УСЛОВИЯХ примера 3,но при использовании в качестве стимулятора биосинтеза (-a вlлaзы никелево-натриевых солей высокомолекулярных сланцевых кислот (Ni -На-ВМК в количес ве 0,0005% биосинтез амилаз составляет в среднем в опыте 779 ед/мл, в контроле 6б8 ед/мл, т.е. 116,6 и 100% соответственно . 3 табл. 2 приведены результаты лабораторных испытаний стимуляторов биосинтеза (iji-амилазы у Bacillus subtilis . Таблица 2 Амилолитическая Варианты активность Контроль без стимулятора668,0100,0 c et-тк. 706,0105,7 735,0110,0 ССо-ВМК 760,0113,8 CMjj-Wa-BMK 779,0116,6 СМг-Ца-ВМК S В табл. 3 приведены результаты oпытнo-пpo ьшшaнныx испытаний применения стимуляторов биосинтеза «-амилазы у бактерий Bacillus subtills SK-52 в условиях глубинного культивирования на ферментаторах 1,5 м. Таблица 3 Амилолитическ Вариант активность ед/мл% Контроль без стимулятора С 0,001% На-ВМК Продолжение табл.3 Контроль без стимулятора С 0,0005% Со-ВМК 3025100,0 3554116,0 Таким образом, использование предлагаемого способа культивирования продуцентов (Х.-амилазы из рода Bacillus обеспечивает увеличение амилолитической активности на 5,7-16,6% в лабораторных условиях и на 16,0-19,2% в полупроизводственных условиях.