Способ диагностики лептоспироза Советский патент 1991 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике инфекционных заболеваний специфическими реакциями нейтрофилов.

Целью изобретения является повышение точности диагноза лептоспироза.

Способ осуществляют следующим образом.

В 2 пробирки вносят по 0,02 мл 5%-ного раствора цитрата натрия, в каждую из них добавляют по 0,05 мл капиллярной крови, взятой из пальца, а затем в опытную пробирку добавляют 0,01 мл неразведенной убитой поливалентной лептоспирозной вакцины, в контрольную-0,01 мл физиологического раствора. Пробирки со смесями инкубируют в термостате при 37° С в течение 90 мин. Из содержимого каждой пробирки готовят мазки крови, высушивают их на воздухе, фиксируют в смеси Никифорова в течение 1 мин и окрашивают по Романовскому 5 мин. Показатель повреждения нейтрофилов (ППН) подсчитывают по формуле

ппн.

где Hi и Н2 - число поврежденных клеток в опыте и контроле соответственно на 100 подсчитанных клеток.

Нейтрофильные лейкоциты по степени повреждения их под влиянием специфического диагностикума (поливалентной убитой лептоспирозной вакцины) делят на 2 группы: 1-я - неизменные нейтрофилы или нейтрофилы с начальными формами клазмао

о

|ь ы ю

тоза, 2-я - нейтрофилы с резко выраженным клазматозом.

Для изучения теста повреждения нейтрофилов (ППН) проведены обследования 9 здоровых лиц, 13 больных вирусным гепатитом и 24 больных лептоспнрозом. Дипгноз вирусного гепатита был поставлен клинически и эпидемиологически и подтвержден серологически в поздние сроки заболевания реакцией агглютинации-лизиса лептоспмр. Проведенные исследования позволили установить специфичность данного способа диагностики, поскольку у здоровых лиц и у больных вирусным гепатитом этот показатель был одинаков (Р 0,05), а у больных лептоспирозом был значительно выше (Р 0,001). Изучение активности щелочной фосфатазы нейтрофильных лейкоцитов М.Г.Шубмчем, Н.Б.Прммаченко, В.В.Лебедевым позволило устлног/пъ повышение ее активности у больны;: .мептоспи- разом по сравнению с больными вирусным -епатитом (Р 0,001).

Реакция агглютинации-лизиса лептос- пир была изучена у 23 больных лептоспирозом, положительные результаты получены в 15 случаях (65,2%) преимущественно в 2-3 недели заболевания.

Результаты исследования свмдетельст вуют о развитии специфической сенеибили- зации нейтрофильных лейкоцитов у больных лептоспирозом уже на 1-й неделе заболевания, что можно использовать для повышения достоверности диагноза леп- тоспироза и дифференциальной диагностики лептоспироза от вирусного гепатита.

П р и мер 1. Больной Д, 29 лет, направ лен в стационар на 4-й день болезни с диагнозом: ОРЗ с менингеальными явлениями, При поступлении жаловался на слабость, головную боль, тошноту, рвоту, озноб, повышение температуры тела. Заболевание началось с головной боли, тошноты, однократной рвоты, на следующий день повысилась температура тела до 39° С, усилилась головная боль, появились боли в мышцах всего тела, пояснице, все последующие дни температура тела держалась на высоких цифрах. За 2 недели до заболевания купался в реке. Состояние больного при поступлении тяжелое. Кожа обычной окраски, имеется инъекция сосудов склер. Зев гиперемирован, на задней стенке гнойные увеличенные фолликулы, кровоизлияния. В легких выслушиваются единичные сухие хрипы. Тоны сердца глухие, пульс 55-56 ударов в минуту, АД - 80/40 мм рт.ст. Печень ниже реберной дуги на 2 см. Отмечается выраженная ригидность мышц затылка. Анализ крови: эритроциты - 4,65 х 10 г/л,

гемоглобин - 153 г/л, ц.п. - 1, лейкоциты - 4,3 х 109 г/л. п-2 с-74, л-20, м-4, СОЭ-15 мм/ч. Общий билирубин-10,4 ммоль/л, прямой - 0, тимоловая проба - 5 ед, сулемовая проба - 2,0, АЛТ - 1,2 ммоль/л, ACT - 0,6 ммоль/л. Анализ мочи, уд. вес. 1021, зпит. кл. - единичные, лейкоциты - единичные. 8 стационаре у больного заподозрен пептоспироз. На 7-й день болезни взято по

О 0,05 мл крови из пальца в 2 пробирки с 0,02 мл 5%-ного раствора цитрата натрия, в опытную пробирку добавлено 0,01 мл убитой поливалентной лептоспирозной вакцины, в контрольную - 0,01 мл физиологического

5 раствора. Пробирки инкубировали при 37° С в течение 90 мин, затем из содержимого каждой пробирки готовили мазки крови, высушивали их на воздухе, фиксировали в смеси Никифорова в течение 1 мин, окрашивали

0 по Романовскому в течение 5 мин. Затем мазки крови микроскопировали, определяли показатель повреждения нейтрофилов. Число поврежденных нейтрофилов в опыте составило 50, в контроле - 36, ППН - 0,14,

5 На 8-й день болезни реакция агглютинации- лизиса лептоспир (РАЛ) положительна с лептоспирой иктерогеморрагия в разведении 1:100, Больному поставлен диагноз: лептоспироз.

0П р и м е р 2. Больной К. 17 лет, поступил

в стационар на 5-й день болезни с подозрением на лептоспироз. Заболел острое повышения температуры тела до 39°С, беспокоили головные боли, боли в икронож5 ных мышцах, на 4-й день болезни появились кровоизлияния в склеры, температура тела оставалась высокой. Из анамнеза выяснено, что больной купался в реке и пил из реки воду, При поступлении больной жаловался

0 на слабость, головные боли, носовые кровотечения, головокружение. Состояние больного при поступлении средней тяжести. ближе к тяжелому. Зев гиперемирован, зер- нист. миндалины увеличены. В легких - ве5 зикулярное дыхание, тоны сердца чистые, пульс 101 удар в минуту. АД 100/60 мм рт.ст. Печень пальпируется ниже реберной дуги на 1 см, селезенка не пальпируется. Имеется ригидность затылочных мышц, симптом

0 Кернига положительный с обеих сторон. Анализ крови: эритроциты 3s99 х 1012 г/л, гемоглобин - 133 г/л, цп - 1, лейкоциты - 6,6 х 109 г/л, э-12, с-40, л-34, м-14, СОЭ-43 мм/ч. Общий билирубин - 27,87 ммоль/л, прямой 5 10,43 ммоль/л, тимоловая проба 23 ед, сулемовая проба - 1,74. АЛТ -0,9 ммоль/л, АСТ- 0,4 ммоль/л. Анализ мочи: белок - 0,033 г/л, плоский эпителий - ед., лейкоциты - единичные. На 11-й день болезни взято по 0,05 мл крови из пальца в 2 пробирки с 0.02 мл

5%-ного раствора цитрата натрия, в опытную пробирку добавлено 0,01 мл убитой поливалентной лептоспирозной вакцины, в контрольную - 0,01 мл физиологического раствора. Затем смеси инкубировали в термостате при 37° С в течение 90 мин. Из содержимого каждой пробирки готовили мазки крови, высушивали их на воздухе, фиксировали 1 мин в смеси Никифорова, окрашивали по Романовскому в течение 5 мин. Мазки микроскопировали и определяли (ППН). Число поврежденных нейтрофи- лов в опыте составило 90, в контроле - 28, ППН 0,62. На 15-й день болезни реакция агглютинации-лизиса лептоспир положительна с лептоспирой иктерогеморрагия в разведении 1:400, Больному поставлен диагноз: лептоспироз.

П р и м е р 3. Больной В., 27 лет, поступил в1 стационар на 4-й день болезни с диагнозом: вирусный гепатит. При поступлении жаловался на общую слабость, мышечные боли, головную боль. Заболевание началось с отсутствия аппетита, однократной рвоты, жидкого стула, тошноты, головной боли, повышения температуры тела до 39,6° С, болей в грудной клетке, пояснице, икроножных мышцах, наблюдалось снижение диуреза. Из анамнеза выяснено, что больной в течение последнего месяца купался в рисовых чеках. Состояние больного при поступлении неудовлетворительное. Склеры умеренно иктеричны, иньекцирова- ны. Тоны сердца ясные, ритм правильный, пульс - 80 ударов в минуту. АД-90/60 мм р.ст. В легких дыхание везикулярное, ослабленное. Язык подсушен, несколько обложен белым налетом. Живот мягкий, чувствительный при пальпации в правом подреберье, печень у реберного края. Анализ крови: эритроциты - 4,56x10 г/л, гемоглобин - 152 г/л, лейкоциты - 6,2x10 г/л, э-6, с-66, л-23, м-4, плазм. кл.-1, СОЭ-49 мм/ч. Общий билирубин - 10,43 ммоль/л, прямой - О, тимоловая проба - 5 ед. АЛТ - 0,2 ммоль/л, АСТ-0, сулемовая проба - 2,0. Анализ мочи: уд.вес 1013, реакции кислая, белок - 0,033 г/л, лейкоциты - единичные. Реакция агглютинации-лизиса лелтоспир на 6-й день отрицательна, на 25-й день - положительна с лептоспирой иктерогеморрагия 1:100. На 9-й день болезни взято по 0,05 мл крови из 5 пальца в 2 пробирки, содержащие по 0,02 мл 5%-ного раствора цитрата натрия, в опытную пробирку добавлено 0,01 мл убитой поливалентной лептоспирозной закцмны, в контрольную - 0,01 мл физиологического

0 раствора. Затем пробирки инкубировали в термостате при 37° С в течение 90 мин. Из содержимого каждой пробирки готовили мазки крови, высушивали их на воздухе, фиксировали 1 мин в смеси Никифорова,

5 окрашивали по Романовскому в течение 5 мин. Мазки гчикроскопировэлм ( определяли число поврежденных кейтрсфилов в опыте и контроле, которое составило соответственно 60 и 36, ППН 0,24, что

0 подтверждает диагноз лептоспироза. При повторном определении показателя повреждения нейтрофилов на 17-й день болезни число поврежденных нейтрофилов в опыте и контроле составило соответственно

5 66 и 28, ППН 0,33. Больному поставлен окончательный диагноз: лептоспироз.

Так-им образом прц использовании изобретения повышается точность диагноза лептоспирозз, что позволяет своевременно

0 назначать адекватную зтиотропную и патогенетическую терапию и улучшает прогноз заболевания. Способ специфичен, не требует дефицитных реактивов, специального оборудования, легко выполним s любой ла5 боратории лечебно-профилактических учреждений.., Точность способа составляет 100%, по прототипу - 28,5%.

Формула i зобретения 0Способ диагностики лептосгжроза путем добавления исследуемого материала к клеткам лептоспир, отличающийся тем. что, с целью повышения точности способа, исследуемую цитратную кровь до -ззляют к 5 убитой поливалентной лептсспилозной вакцине, определяют показатель повреждения нейтрофилов и при показателе его, равном -0,14 и выше, диагностируют лептоспироз.

Изобретение относится к медицине, в частности к инфекционной иммунологии для выявления лептоспироза. Цель изобретения - повышение точности способа. Инкубируют пробы цитратной капиллярной кроем обследуемых, в одну из которых добавляют убитую поливалентную лептоспирозную вакцину, в другую (в качестве контроля) - физиологический раствор, затем определяют количественную разницу числа поврежденных нейтрофилов в опытной и контрольных пробах, определяя показатель повреждения нейтрофилов (ППН). При этом при ППН, равном 0,14 и выше, диагностируют лептоспироз. Точность способа 100%, по прототипу-28-5%.