Изобретение относится к иммунологии, а именно к методам исследования специфического липопротеида в циркулирующих иммунных комплексах (ЦИК) в крови больных с острыми и хроническими заболеваниями печени.
Целью изобретения является повышение специфичности определения липопротеида, выделяемого при разрушении клеток печени.
Способ осуществляется следующим образом.
В связанных С1д ЦИК производят определение липопротеида по связыванию конъюгата щелочной фосфатазы с иммуноглобулином бараньей сыворотки
к специфическому липопротеиду печени и начиная с 0,3 ед. оптической плотности субстратного реактива диагностируют поражение клеточной мембраны печени.
Пример. Печень от донора гомогенизируют в 0,25 М растворе сахарозы с рН 8,0. С помощью центрифуги выделяют супернатант, помещают в хро- матографическую колонку с сефарозой 6В, растворенной в борном буфере (рН 8,5). Выделяют первый пик хрома- тограммы, при этом получают специфический липопротеид печени, которым иммунизируют баранов с полным адъю- вантом Фреунда и добавлением коклюшОЭ
ел ю
-U
ной вакцины. Из этой иммунной сывороки к специфическому липопротеиду печени выделяют гамма-глобулин и из него IgG с помощью ионообменной хро- матографии в ДЕАЕ-целлюпозы с фосфатным буфером (рН 8,0).
Вьщеленный иммуноглобулин IgG кон югируют с помощью 4,2%-ного раствора глютаральдегида со щелочной фосфа- тазой.
Субкомпонент комплемента С1д выделяют из свежей сыворотки свиньи двух этапным преципитированием с 0,03 и 0,069 М ЭДТА. Вьщеленный С1д разбавл ют в карбонатно-бикарбонатном буфере (рН 9,6) и связывают на полистироль- ном планшете .
С С1д связывают ЦИК из сывороток обследуемых лиц. Содержание специфи- ческого липопротеида в ЦИК определяют с помощью конъюгата щелочной фосфа- тазы к специфическому липопротеиду печени. Освобождение щелочной фосфа- тазы определяют по оптической плот- ности субстратного реактива паранит- рофенилфосфата. Оптическую плотность определяют при длине волны 405 нм счетчиком Dynatech.
При 0,3 ед. оптической плотности реакционного продукта определяют поражение клеточной мембраны печени.
Способ позволяет при остром и хроническом гепатите выявить в крови больного ЦИК, содержащие специфический липопротеид печени - антиген мембраны печеночной клетки, имеющий большое патогенетическое значение для развития аутоиммунных и вирусных гепатитов.
Формула изобретения
сах
Способ определения липопротеида пчени в циркулирующих иммунных комплев крови, включающий связывание циркулирующих иммунных комплексов субкомплементом комплемента СЦ я определение оптической плотности субстратного реактива, отличающийся тем, что, с целью повышения специфичности определения липопротеида, выделяемого при нарушении клеточных мембран, после связывания иммунных комплексов, добавляют раствор коншгата иммуноглобулина IgG к специфическому липопротеиду печени с щелочной фосфатазой и при наличии 0,3 и более единиц оптической плотности определяют липопротеид, выделяемый при нарушении клеточных мембран.
Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано при исследовании специфического липопро- теида в циркулирующих иммунных комплексах (ЦИК) в крови больных с острыми и хроническими заболеваниями печени.Целью изобретения является повышение специфичности определения липопротеида, выделяемого при нарушении клеточной мембраны печени. Согласно способу, циркулирующие иммунные комплексы в крови связывают субкомпонентом комплемента CU и определяют оптическую плотность суб- страктного реактива. Определение липопротеида в ЦИК производят по связыванию конъюгата щелочной фосфатазы с иммуноглобулином IgG сыворотки бараньей крови к специфическому лияо- протеиду печени. Начиная с 0,3 ед. оптической плотности субстрактного реактива, диагностируют поражение клеточной и мембраны печени. Определение клеточного липопротеида позволяет диагностировать нарушение клеточных мембран при патологических процессах . а
| Способ количественного определения иммунных комплексов в крови | 1985 |
|
SU1327005A1 |
| Печь для непрерывного получения сернистого натрия | 1921 |
|
SU1A1 |
