Изобретение относится к микробиологическим исследованиям и токсикологии и может быть использовано при сравнительной токсикологической характеристике водорастворимых веществ и препаратов, а также на промышленных предприятиях для биологического контроля за токсичными водорастворимыми веществами.
Цель изобретения - повышение чувствительности способа и сокращение времени определения
Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа определения токсичности водорастворимых веществ путем экспозиции исследуемого вещества с инфузориями Fetrahymena pyriformis подсчет количества погибших клеток осуществляют после воздействия на культуру сублетальной температуры
Способ осуществляют следующим образом
Суточную культуру инфузорий Tetrahymena pyriformis культивированную в глюкоэно-дрожжевой среде (рН 7,1) и содержащую определенное количество особей в 1 мл, разливаю в пробирки. В эти же пробирки добавляют исследуемое вещество в нескольких концентрациях (максимальная из концентраций, вносимых в культуру, допжна не вызывать гибели инфузорий после тридцатиминутного контакта с веществом при температуре культивирования, но вызывать их гибель, близкую к 100%, после пятиминутного воздействия при сублетальной температуре) Культуру с
О СП
о
-N СЛ i.
добавленным исследуемым веществом выдерживают 30 мин в термостате при температуре культивирования, после этого пробирки помещают на 5 мин в термостат с сублетальной температурой и проводят подсчет количества погибших клеток. Далее высчитывают процент погибших клеток от начальной плотности культуры. Исследовав таким образом ряд концентраций веществ, строят график зависимости процента погиб- ших клеток от концентрации на пробит-ло- гарифмической сетке и графически находят концентрацию вещества, вызывающую 50%-ную гибель инфузорий. Данные заносят в таблицу для сравнения степени токсич- ности различных веществ путем сравнения концентраций, вызывающих 50%-ную гибель клеток.
Пример 1. Суточную культуру инфузорий Tetrahymena pyriformis, культивиро- ванную в глюкозно-дрожжевой среде (0,1 г дрожжевого экстракта, 1,5 г глюкозы, 0,1 г NaCI, 100 мл дистиллированной воды, рН 7,1) при 27°С и содержащую 69 тыс. особей в 1 мл, в количестве 1 мл помещают в 5 пробирок и добавляют исследуемое вещество - 1,2-дихлорэтан в пяти концентрациях: 0,6 мг/мл, 0,65 мг/мл, 0,7 мг/мл, 0,91 мг/мл и 1,3 мг/мл (по предварительным опытам концентрация 1,2-дихлорэта- на 1,3 мг/мл не вызывает гибели инфузорий после 30-ти минутного контакта при 27°С, а при 38°С в течение 5 мин наблюдается почти 100%-ная гибель инфузорий). Пробирки помещают в термостат и инкубируют в течение 30 мин при 27°С. После этого пробирки помещают в термостат при 38°С на 5 мин. Затем проводят подсчет количества погибших клеток в камере Горя- ева и высчитывают процент погибших клеток от начальной плотности культуры. Так, после воздействия сублетальной температуры в пробирке с концентрацией 1,2-дихло- рэтанаО,60мг/мл погибло 15594 особей, что соответственно от первоначальной плотности составляет 22,6%. Аналогично определяют процент погибших инфузорий при других концентрациях.
Данные по проведенным экспериментам приведены в табл. 1.
Получают пять точек, по которым методом пробит-анализа графическим путем находят концентрацию 1,2-дихлорэтана, вызывающую 50%-ную гибель инфузорий - 0,62 мг/мл.
Пример 2. Постановку опыта и подсчеты проводят также, как в примере 1, но исследуют другие вещества - диметил- формамид и ацетонитрил.
Результаты проведенных экспериментов представлены в табл. 2.
Формула изобретения Способ определения токсичности водорастворимых веществ путем инкубации исследуемого вещества с инфузорией и подсчета количества погибших клеток, о т- личающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и сокращения времени определения, перед подсчетом на инфузорию воздействуютеублетальнойтемпературой.
Таблица 1
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
Способ определения генотоксичности водорастворимых веществ | 1990 |
|
SU1755194A1 |
Способ определения токсичности водных сред | 1988 |
|
SU1597722A1 |
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИЧНОСТИ ПОЧВЫ МЕТОДОМ БИОТЕСТИРОВАНИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РАВНОРЕСНИЧНЫХ ИНФУЗОРИЙ PARAMECIUM CAUDATUM EHRENBERG | 2011 |
|
RU2482478C2 |
Способ определения токсичности водорастворимых веществ | 1983 |
|
SU1257518A1 |
Способ определения токсического воздействия химических веществ, содержащихся в водной среде, на культуру планктонных гидробионтов | 1987 |
|
SU1688161A1 |
СПОСОБ ОЦЕНКИ ТОКСИЧНОСТИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ АНТИГЕНОВ | 2004 |
|
RU2281507C2 |
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ ПИЩЕВЫХ ИНГРЕДИЕНТОВ С ПОМОЩЬЮ КЛЕТОЧНЫХ ТЕСТ-СИСТЕМ | 2015 |
|
RU2604802C1 |
Питательная среда для культивирования инфузорий ТетRанYмеNа рYRIFоRмIS | 1990 |
|
SU1717035A1 |
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ РАСТИТЕЛЬНЫХ МАСЕЛ | 2009 |
|
RU2415417C1 |
Среда для поддержания культурыиНфузОРий | 1978 |
|
SU810813A1 |
Изобретение относится к микробиологическим исследованиям и может быть использовано для экспрессной сравнительной токсикологической характеристики водорастворимых веществ и препаратов, а также на промышленных предприятиях для биологического контроля за токсичными водорастворимыми веществами Цель изобретения - повышение чувствительности способа и сокращение времени определения Для этого культуру инфузории Tetrahymena pynformis выдерживают с добавленным исследуемым веществом при температуре культивирования, воздействуют из нее сублетальной температурой и подсчитывают количестоо погибших клеток. Строят график зависимости процента погибших клеток от концентрации исследуемого вещества 2 табл. Ё
Таблица 2
Определено графическим путем методом пробит-анализа.
Продолжение табл. 2
Способ определения токсичности водорастворимых веществ | 1983 |
|
SU1257518A1 |
Печь для непрерывного получения сернистого натрия | 1921 |
|
SU1A1 |
Игнатьева А.Д | |||
Шаблий В.Я | |||
Использование инфузорий тетрахимена пириформис как тест-обьекта при биологических исследованиях о с/х М., 1978, с | |||
Устройство для усиления микрофонного тока с применением самоиндукции | 1920 |
|
SU42A1 |
Авторы
Даты
1991-06-15—Публикация
1989-03-23—Подача