Способ определения токсичности водорастворимых веществ Советский патент 1986 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к микробиологии, токсикологии и может быть использовано для биологического контроля за токсичными водорастворимыми веществами.

Целью изобретения являетсясокращение времени и упрощение способа определения токсичности за счет исклчения стадии микрофотографирования.

Способ заключается в определении двигательной активности инфузорий путем диспергирования их в культу- ральной среде и регистрации динаци- ки изменения величин светопропускани культуры до и после экспозиции с ис- следуемым веществом.

Пример 1. Суточную культуру инфузории Tetrahymena pyriformis, культивированную на аминопептидной среде (0,6% раствор аминопептида и 0,2% раствор дрожжевого экстракта) при 27°С и содержаЕОгю в 1 мл 40-60 т особей, помещают в кювету с расстоянием мелоду рабочими гранями 20 мм. Кювету устанавливают в правый кю- ветодержатель калориметра-нефелометра М. В качестве источника света используют лампу накаливания СЦ-98 со светофильтром, имеющим максимум пропускания при длине волны j582 , В левый кюветодержатзль устанавливают кювету с аминопептидной средой.

Инфузории перемешиванием дис-. .пергируют в кювете (контроль) и, вращая левый барабан нефелометра, в течение 3 mm после прекращения перемешивания поддерживают стрелку измерительного прибора на О, регистрируя ка/вдые 10 с значения на шка- ле светопропускания вращаемого барабана.

Результаты измерений в качестве контроля заносятся в таблицу (см, табл. 1).

Затем (опыт) в кювету вводят 1,2- -дихлорэтан в концентрации 7,5 мг/мл (7,5 мг/мл концентрация 1,2-дихлор- этапа, которая в течение 30 MIH не приводит к гибели инфузорий). Куль- туру перемешивают, диспергируют и помещают в термостат при 27 С на 30 №ш, т.е. экспонируют. Затем вновь культуру перемешиванием диспергируют и проводят измерения таким же образом, как и в контроле, т.е. вращая левый барабан нефелометра. В течение 3 посла прекращения перемешивания поддерживают стрелку измерительного прибора на О, регистрируя каждые 10 с значения на шкале светопропускания вращаемого барабана. Результаты измерений в качестве опыта занесены в табл. 1.

Двигательная активность инфузорий определяется по сумме разниц между соседними значениями светопропускания.

Контроль;

3,0 + 1,С + 1,5 + 3,5 + 2,5 +

+ 2,5 + 2,0 + 0,5 + 1,5 + 2,0 + + 1,0 + 0,8 н- 1,2 + 1,5 + 1,5 26,0

Опыт;

1,0 + 2,5 + 0,5 + 2,0 + 1,5 +

+ 0,5 + 0,5 + 0,5 + 0,5 + 0,5 10,0

Изменение двигательной ак1 ивности инфузорий в результате 30-минутного воздействия 1,2-дихлорэтана в концентрации 7,5 мг/мл составляет

i « 55-25..,ooz 6,,5.

При концентрации 7,5 мг/мл 1,2- -дихлорэтан дал снижение двигательной активности на 61,5%, поэтому следующие исследуемые концентрации должны быть больше и меньше 7, 5 мг/м

Измерения в конт1 |оле (до введения исследуемого вещества) и в опыте (после введения исследуемого вещества) , расчет двигательной активности и ее изменения осуществляют так же, как и при исследовании коцентрации 7,5 мг/мл. Исследуют концентрацию 2,5; 5,0; и 12,5мг/мп Получают соответственно изменения дви1;лтельной активности на 31,1; 37,9, 64,3 и 82,8% (табл. 2). Получают пять точек, по которым методом пробитанализа графическим путем находят концентрацию 1,2-дихлорэтана вызывающую 50%-ное снижение двигательной активности инфузорий - 6,0 мг/мл.

Пример 2. Постановка опыта, измерения и расчеты проводят так же, как в примере 1, но исследуют другие вещества - диметилформамвд и ацето- нитрил. Результаты представлены в табл. 2.

312575184

Сопоставляя значения концентраций, Точность метода характеризуется вызывающих снижение двигательной ак- коэффициентом вариации (v±Sv) тивности на 50%, и учитывая, что 12,4+2,2%. чем ниже концентрация, приводящая

к данному снижению двигательной ак- 5Формула изобретения тивности, тем вещество токсичнее, находят, что изученные вещества по ток- Способ определения токсичности сичности на основании рассматриваемо- водорастворимых веществ путем ч)цен го показателя распределяются следую- ки их влияния на двигательную актив- щим образом: наиболее токсичен 1,2- 10 ность инфузории Tetrahymena pyrifor- -дихлорэтан, далее следует ацетони- mis, отличающийся тем,

что, с целью сокращения времени и упрощения способа, двигательную активность инфузорий определяют дис- 5 пергированием их в культуральной среде и регистрацией динамики изме-

трил и диметилформамид.

Исследование одной концентрации изучаемого вещества проводится за 40-60 мин, в то время как аналогично исследование методом Bovee, принятым в качестве прототипа, осуществляется за 12 ч.

нения величин светопропускания культуры до и после зкспозиции с исследуемым веществом.

58,0 61,0 62,0 60,5 60,5 64,0 66,5 69,0 71,.О 71,5 73,0 75,0 76,0 76,8 78,0

нения величин светопропускания культуры до и после зкспозиции с исследуемым веществом.

Таблица

57,0 56,0 58,5 59,0 61,0 62,5 63,0 63,5 63,5 64,0 64,0 64,0 64,5 64,5 65,0

Продолжение табл.1

Изобретение относится к микробиологии, токсикологии и может быть использовано для биологического контроля за токсичными водорастворимыми веществами, цель изобретения - сокращение времени и упрощение способа определения токсичности за счет исключения стадии микрофотографирования. Инфузории диспергируют в куль- туральной среде. Регистрируют динамику изменения величин светопропускания культуры до и после экспозиции с исследуемым веществом. Рассчитывают двигательную активность инфузорий и ее изменение при воздействии i исследуемого вещества различной концентрации. 2 табл. i (О