СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ и ПОЛИСАХАРИДОВ Советский патент 1964 года по МПК C07D473/00 C08B37/00 

Известны способы выделения нуклеиновых кислот и полисахаридов из растворов осаждением их органическими растворителями, кислотами, переводом в не растворимые в воде соли. Эти способы недостаточно количественны в случае использования сильно разбавленных растворов и трудоемки.

Предлагается способ выделения нуклеиновых кислот и полисахаридов из растворов с малой концентрацией, содержащих большое количество примесей, жидкостной флотацией не растворимых в воде производных.

Способ заключается в том, что к раствору рибонуклеиновой или гиалуроновой кислоты добавляют раствор цетавлона и диэтилового эфира. Цетавлоновая соль т-РНК или гиалуроновой кислоты количественно переводится в интерфазу, образованную двумя иесмешивающимися жидкостями посредством флотации. Получающийся при этом слой осадка отделяют удалением верхней и нижцей фаз в делительиой воронке. Предлагаемый способ позволяет легко извлекать указанные полианионы из чрезвычайно разбавленных растворов

(до 0,000 Ю/о).

Выход продуктов НО данному способу может достигать 98-100%.

Пример. К 50 жл раствора хлористого натрия или фосфатного буфера рН 6,0 исследуемой молярности, помещенного в делительиую воронку иа 100 мл, добавляют 0,5 жгили

более т-РНК или высокополимерной РНК, растворенной в 0,5 }лл воды, и 5 мл раствора цетавлона в концентрации 10 мгД мл и 20 мл диэтилового эфира. Смесь встряхивают и выдерживают при 34° С 15 мин, затем вновь встряхивают и охлаждают до комнатной температуры до полного просветления фазы. Последнюю здаляют, а цетавлоновую соль РНК в интерфазе сливают из делительной воронки в центрифужную пробирку. После центрифугирования в течение 3 мин при 3000 об/мин верхнюю и нижнюю фазу сливают, а осадок суспендируют в 0,5 мл 2М хлористого натрия и натриевую соль РНК осаждают при 20° С добавлением 1,5 мл 96о/о-ного этанола. Переосаждение из 0,5 ил 2М хлористого натрия новторяют еще раз. После центрифугирования осадок растворяют в 3 мл дистиллированной воды и определяют содержание вещества в спектрофотометрических единицах при 260 ммк. При концентрации полианиона выще 0,1% все операции проводят непосредственно в центрифужной пробирке.

Предмет изобретения

Способ выделения нуклеиновых кислот и полисахаридов из солевых и бессолевых водных разбавленных растворов при помощи цетавлона, отличающийся тем, что в образовавщуюся соль полианиона добавляют диэтиловый эфир и встряхиванием переводят в интерфазу.