Штамм хламидий СнLамYDIа рSIттасI, используемый для изготовления биопрепаратов для диагностики и профилактики хламидиоза серебристо-черных лисиц Советский патент 1991 года по МПК A61K39/118 C12N1/20 

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к средствам лабораторной диагностики и специфической профилактики. Цель изобретения - штамм chlamydla pslttaci БЛ-84, обладающий высокой антигенной и иммуногенной активностью, что позволяет его использовать для

изготовления биологических препаратов для диагностики и профилактики хламидийных инфекций серебристо-черных лисиц.

Штамм выделен от абортированного плода серебристо-черной лисицы в хозяйстве, где наблюдаются случаи абортов, мерт- ворождения и слаборождения у пушных

зверей; адаптирован к размножению в куриных эмбрионах (КЭ), прошел 42 пассажа при последовательном культивировании на желточных оболочках КЭ.

Штамм депонирован в банке штаммов Всесоюзного научно-контрольного института ветеринарных препаратов и хранится под № 8 в коллекции специальной лаборатории штаммов Всесоюзного научно-исследо- вательского института (г.Казань).

Штамм C.psittaci ВГНКИ Ms 8 имеет следующие морфологические и физиологические характеристики.

Элементарные тельца штамма имеют округлую форму размером 200-300 нм, по методу Стэмпа окрашиваются в красный цвет. Возбудитель находится внутри и вне клеток, располагаясь одиночно или группами. В мазках-отпечатках из паренхиматозных органов (печень, селезенка, легкие) лабораторных животных (морских свинок, белых мышей) и норок, инфицированных этим штаммом, в реакции непрямой имму- нофлуоресенции обнаружены цитоплазма- тические включения в виде полиморфных одиночных и множественных желто-зеленых образований.

Штамм хорошо культивируется в эпителиальных клетках желточных оболочек КЭ, вызывая их гибель на 4-10 день после зара- жения в зависимости от дозы вводимого инфекционного материала. Для КЭ инфекционный титр составляет 10 - 10 ЭЛД50/0.3 мл.

Штамм устойчив к действию стрептоми- цина; чувствителен к действию антибиотиков тетрациклинового ряда, в меньшей степени - пенициллина.

Штамм chlamydla psittaci ВГНКИ № 8 (БЛ-84) не токсичен, патогенен для серебри- сто-черных лисиц и норок. Характеристика патогенности штамма для лабораторных животных представлена в табл.1.

Штамм обладает выраженной антигенной активностью, которую изучают в реак- ции связывания комплемента путем сравнения титров антител в гипериммунных сыворотках морских свинок, полученных к штаммам хламидий: ВГНКИ № 8 и Лори, а также антигенов из этих штаммов. Характеристика антигенности штамма в сравнении со штаммом Лори представлена в табл. 2.

Приведенные данные показывают, что

по антигенной активности при исследова нии с гомологичной сывороткой штамм

ВГНКИ N; 8 в 16 раз превосходит штамм

орнитоза Лори, а с иммунной орнитозной

5

0

5

0

5

0

45

5

50

сывороткой в 5 раз уступает эталонному штамму.

Антиген из штамма ВГНКИ № 8 выявляет специфические хламидийные антитела в реакции энзиммеченых антител в сыворотках крови больных, переболевших и экспериментально зараженных лабораторных животных и пушных зверей в титрах 1:10 - 1:10240.

Штамм обладает высокой иммуноген- ной активностью и вызывает невосприимчивость к заражению у 90-100% белых мышей через 14-20 дн после их иммунизации.

Пример 1. Исходным материалом для получения специфического хламидиоз- ного антигена служит 20%-ная взвесь, приготовленная на 0,2 М фосфатно-буферном растворе (рН 7.2) из 300 желточных оболочек КЭ, инфицированных штаммов ВГНКИ № 8. Очистку и концентрацию возбудителя хла- мидиоза лисиц производят путем центрифугирования дифференциального и в ступенчатом градиенте сахарозы. Затем элементарные тельца обрабатывают смесью, содержащей додецилсульфат натрия (ДСН) и этилмеркаптан (ЭМ) в конечной концентрации 0,1 и 1 % соответственно. Непрореагировавшие ДСН и ЭМ удаляют, диализируя суспензию против 0.15М хлористого калия в течение 48 ч Получено 30 мл антигена, который в РСК имеет титр 1:128.

Пример 2. Для изучения иммуноген- ны,: свойств выделенного штамма очищенный и сконцентрированный, как указано в примере 1, инфекционный материал штамма, содержащий 30 мг/мл белка, инактиви- рованный 0,4-ным (в конечной концентрации) формалином в течение 5 сут при 30°С, вводят белым мышам внутрибрю- шинно в дозе 0,5 мл. В качестве контроля используют неиммунизированных белых мышей. По истечении 20 дн опытных и контрольных белых мышей заражают интрана- зально 10%-ной взвесью желточных оболочек КЭ, инфицированных штаммом БЛ-84 с инфекционным титром 10 ЭЛДю/О.З мл в дозе 0,05 мл. В результате опыта выявлено, что однократное внутри- брюшинное введенир инактивированных хламидий штамма ВГНКИ № 8 защищает 90% белых мышей от интраназальног о заражения этим же штаммом.

Формула изобретения Штамм хламидий Chlamydfa psittaci ВГНКИ-8, используемый для изготовления биопрепаратов для диагностики и профилактики хламидиоза серебристо-черных лисиц.

-6

Таблица 1

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к средствам лабораторной диагностики и специфической профилактики. Целью изобретения является штамм CHLAMYDIA PSITTACI "БЛ - 84", обладающий высокой антигенной и иммуногенной активностью, что позволяет его использовать для изготовления биологических препаратов для диагностики и профилактики хламидийных инфекций серебристо-черных лисиц. Штамм "БЛ - 84", впервые выделенный от абортированного плода серебристо-черной лисицы, адаптирован к размножению в желточном мешке куриных эмбрионов (КЭ), вызывает их гибель на 4 - 10 день после заражения. Для КЭ инфекционный титр составляет 10^-5 - 10^-6 ЭДЛ₅₀/0,3 мл. Штамм нетоксичен, патогенен для серебристо-черных лисиц, норок и лабораторных животных (белых мышей и морских свинок). Антиген из штамма "БЛ - 84" обладает выраженной активностью при изучении в реакциях связывания комплемента и энзиммеченных антител в сравнении с эталонным биофабричным хламидийным антигеном, изготовленным из штамма орнитоза "Лори". Штамм обладает высокой иммуногенной активностью и вызывает невосприимчивость к заражению у 90 - 100% белых мышей через 14 - 20 дней после их иммунизации. Размеры возбудителя, его морфологические, тинкториальные, физиологические, иммунохимические и антигенные свойства подтверждают, что штамм "БЛ - 84" относится к бактериям рода CHLAMYDIA, виду CHLAMYDIA PSITTACI. Штамм депонирован в банке штаммов Всесоюзного научно-контрольного института ветеринарных препаратов и имеет регистрационный N8. 2 табл.

Примечания, в/в - внутривенно, и/н - интраназельно; и/ц - интрацеребПримечание. - обратная величина титров антител.

рально; в/б - внутрибрюшно; п/к - подкожно: н.и. - не исследовано.

Таблица 2