Штамм хламидий СнLамYDIа рSIттасI, используемый для изготовления биопрепаратов для диагностики и профилактики хламидиоза песцов Советский патент 1991 года по МПК A61K39/118 C12N1/20 

Штамм депонирован в банке штаммов Всесоюзного научно-контрольного института ветеринарных препаратов и хранится под № 9 в коллекции специальной лаборатории штаммов Всесоюзного научно-исследователь- ского ветеринарного института (г.Казань).

Штамм имеет следующие морфологические и физиологические характеристики.

Элементарные тельца штамма имеют округлую форму размером 200-300 нм, по методу Стемпа окрашиваются в красный цвет. Возбудитель находится внутри и вне клеток, располагаясь одиночно или группами. В мазках-отпечатках из паренхиматозных органов (печень, селезенка, легкие) лабораторных животных (морских свинок, белых мышей) и норок, инфицированных штаммом ПП-87, в реакции непрямой имму- нофлуоресценции обнаружены цитоплаз- матические включения в виде полиморфных одиночных и множественных ярких желто- зеленых образований.

Штамм хорошо культивируется в эпителиальных клетках желточных оболочек КЭ, вызывая их гибель на 4-10-й день после за- ражения в зависимости от дозы вводимого инфекционного материала. Для КЭ инфек- ционн-ый титр составляет - 10б ЭЛДбО/0,3 мл.

Штамм устойчив к действию стрептоми- цина, чувствителен к действию антибиотиков тетрациклинового ряда, в меньшей степени - пенициллина.

Штамм Chlarnydia psittacl ВГНКИ № 9 (ПП-87) нетоксичен, патогенен для песцов и норок. Характеристика патогенности штамма для лабораторных животных представлена в табл.1,

Пример 1 . Исходным материалом для получения специфического хламидий- ного антигена служит 20%-ная взвесь, приготовленная на 0,2М фосфатно-буферном растворе (рН 7,2) из 20 желточных оболочек КЭ, инфицированных штаммом ПП-87. Очистку и концентрацию возбудителя хламиди- оза производят путем центрифугирования дифференциального и в ступенчатом градиенте сахарозы. Затем элементарные тельца обрабатывают смесью, содержащей доде- цилсульфат натрия (ДСН) и этилмеркаптан (ЭМ) в конечной концентрации 0,1 и 1 % соответственно. Непрореагировавшие ДНС и ЭМ удаляют, диализуя суспензию против 0,15 М хлористого калия в течение 48 ч. Получено 20 мл антигена, который в РСК имеет титр 1:128.

Пример 2. Для изучения иммуноген- ных свойств штамма очищенный и сконцентрированный, как указано в примере 1, инфакционный материал, содержащий 30 мг/мл белка инактивированный 0,4%-ным (в конечной концентрации) формалином в течение.5 сут при 37°С вводят белым мышам внутрибрюшинно в дозе 0,5 мл. В качестве контроля используют неиммунизированных белых мышей. По истечении 20 дн опытных и контрольных белых мышей заражают инт- раназально 10%-ной взвесью желточных оболочек КЭ, инфицированных штаммом ПП-87, с инфекционным титром 10 , ЭЛДбО/0,3 мл н дозе 0,05 мл. В результате опыта выявлено, что однократное внутрибрюшинное введение инактивировэнных хламидий штамма ПП-87 защищает 95% белых мышей от интраназаль- ного заражения этим же штаммом.

Пример 3 . Штамм обладает выраженной антигенной активностью, которую изучают в реакции связывания комплемен- тя путем сравнения титров антител в гипериммунных сыворотках морских свинок, полученг.ых к штаммам хламидий: ПП-87 и Лори, а также антигенов из этих штаммов. Характеристика антигенности указанного штамма в сравнении со штаммом Лори представлена в табл.2.

Приведенные данные показывают, что по антигенной активности при исследовании с гомологической сывороткой штамм ПП-87 превосходит штамм орнитоза Лори в 64 раза, а с имунной орнитозной сывороткой в 5 раз уступает эталонному штамму, Антиген из штамма ПП-87 выявляет специфические хламидийные антитела в реакции энзиммеченных антител в сыворотках крови больных, переболевших и экспериментально зараженных лабораторных животных и пушных зверей в титрах 1:10- 1:10240.

Формула изобретения

Штамм хламидий Chlamydla psittacl ВГНКИ Ns 9, используемый для изготовления биопрепаратов для диагностики и профилактики хламидиоза песцов.

Таблица 1

Примечание. обратная величина титров антител.

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к средствам лабораторной диагностики и специфической профилактики. Целью изобретения является штамм CHLAMYDIA PSITTACI "ПП - 87", обладающий высокой антигенной и иммуногенной активностью, что позволяет его использовать для изготовления биопрепаратов для диагностики хламидиозов серологическими реакциями (РСК, РНГА, ИФА, РИА и др.), а также специфической профилактики хламидийных инфекций. Штамм "ПП - 87" впервые выделен от абортировавшей самки песца, адаптирован к размножению в желточном мешке куриных эмбрионов (КЭ), вызывает их гибель на 4 - 10 день после заражения. Для КЭ инфекционный титр составляет 10^-5 - 10^-6 ЭЛД₅₀/0,3 мл. Штамм нетоксичен, патогенен для песцов, норок и лабораторных животных (белых мышей и морских свинок). Антиген из штамма "ПП - 87" обладает выраженной активностью при изучении в реакциях связывания комплемента и энзиммеченных антител в сравнении с эталонным биофабричным хламидийным антигеном, изготовленным из штамма орнитоза "Лори". Штамм обладает высокой иммуногенной активностью и вызывает невосприимчивость к заражению у 90 - 100% белых мышей через 14 - 20 дней после их иммунизации. Размеры возбудителя, его морфологические, тинкториальные, физиологические, иммуногенные и антигенные свойства подтверждают, что штамм "ПП - 87" относится к бактериям рода CHLAMYDIA, виду CHL. PSITTACI 2 табл.