Способ диагностики раннего срока беременности Советский патент 1991 года по МПК G01N33/577 

исследуемой разведенной мочи, 40-60 мкл взвеси зерен диагностикума (в 1 мл 5000- 6000 зерен), инкубируют при комнатной температуре в течение 15-20 мин, отмывают троекратно ФБР путем центрифугирования пробирки при 1000-1500 об/мин в течение 1-1,5 мин. К осадку приливают 50,0-60,0 мкл кроличьих моноспецифических антител к ХГЧ, меченных флуоросцеи- низотиоцианатом (ФИТЦ), встряхивают пробирку, повторно инкубируют при комнатной температуре в тчение 15-20 мин, отмывают троекратно ФБР путем центрифугирования. Учет результата реакции осуществляют под люминесцентным микроскопом. 1 каплю суспензии зерен наносят на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и исследуют при увеличении х110-160 с использование фильтров ФС-1- 2, СС-15-2, Б-С-8-2,

В случае положительной реакции наблюдают яркое краевое свечение зерен диагностикума. При постановке реакции обязательно проводят исследование контрольных образцов мочи: положительного (содержащего ХГЧ) и отрицательного (не содержащего ХГЧ).

Пример 1. А-Я И.Р., задержка месячных 7 дней. Взято 0,5 мл мочи, прибавлено 0,5 мл ФБР с рН 7,2, добавлено 40 мкл суспензии зерен агарозы,соединенной с моно- клональными антителами к (3 -ХГЧ, смесь проинкубирована в течение 20 мин при комнатной температуре, отмыта троекратно ФБР, отцентрифугирована при 100 об/мин в течение 1 мин, прибавлены 50 мкл кроличьих моноспецифических антител к ХГЧ, меченных ФИТЦ, смесь проинкубирована в течение 20 мин при комнатной температуре, троекратно отмыта ФБР, отцентрифугирана при 1000 об/мин в течение 1 мин, осадок исследован в люминесцентном микроскопе, по наличию краевого свечения зерен диаг- нос.,ирован ранний срок беременности. Спустя 3 недели диагноз беременности под- твержден при гинекологическом обследовании и ультразвуковом исследовании. Срок беременности установлен 5-6 недель.

Таким образом, при иммунологическом исследовании предлагаемым способом беременность была диагностирована в срок 2-3 недели.

Составитель Р

Редактор А. Огар

Техред М.Моргентал

0

5

0

5

Пример 2. П-ва Г.А., задержка месячных 8 дней. Взято 0,5 мл мочи, прибавлено 0,5 мл ФБР с рН 7,2, к пробе мочи прибавлены 50 мкл суспензии зерен агарозы, соединенной с моноклональными антителами к/9-ХГЧ, смесь проинкубирована 20 мин при комнатной температуре, отмыта троекратно ФБР, отцентрифугирована при 1000 об/мин в течение 1 мин, прибавлены 50 мкл кроличьих моноспецифических антител к ХГЧ, меченых ФИТЦ, смесь повторно проинкубирована в течение 15 мин при комнатной температуре, отмыта троекратно ФБР, отцентрифугирована при 1500 об/мин в течение 1,5 мин. Осадок исследован в люминесцентном микроскопе, отсутствие краевого свечения свидетельствует, что ХГЧ в моче не выявлен - беременности нет.

задержка месячных обуслолвена нарушением менструального цикла. Диагноз подтвержден.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет выявлять беременность у 100% женщин при сроке 3-4 недели при оценке результатов через 1 ч.

Формула изобретения Способ диагностики раннего срока беременности путем определения содержания хорионического гонадотропина человека в моче, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа, пробу мочи разводят равным объемом фосфатного буферного раствора с рН 7,2-7,4, добавляют к ней суспензию агарозы,соединенной с моноклональными антителами к (5 -субьединице хорионического гонадотропина человека, продуцируемыми клоном Ф12, инкубируют смесь, отмывают троекратно буферным раствором, центрифугируют, к осадку добавляют кроличьи моноспецифические антитела к хорионическому гонадотропину человека, меченные флуоресцеинизотиоцианатом, повторно инкубируют, отмывают фосфатным буферным раствором, центрифугируют и исследуют осадок в люминесцентном микроскопе и при наличии краевого свечения диагносцируют ранний срок беременности.

Гуменюк

нтал

Корректор Э. Лончакова

Изобретение относится к медицине, в частности к акушерству, и гинекологии, и предназначено для диагностики раннего срока беременности. Целью изобретения является повышение точности и ускорение способа. В основе способа - реакция непрямой иммунофлуоресценции с использованием твердофазного диагностикума - зерен цианогенбромированной агарозы, коньюгированной с омоноклональными антителами к β-субъединице хорионического гонодотропина человека, продуцируемыми гибридомным клоном Ф 12. Для осуществления способа пробу мочи женщин разводят равным объемом фосфатного буферного раствора (ФБР) с PH 7,2 - 7,4, добавляют к ней 40,0 - 60,0 мкл суспензии агарозы, соединенной с моноклональными антителами к β - ХГЧ. ИНКУБИРУЮТ СМЕСЬ ПРИ КОМНАТНОЙ ТЕМПЕРАТУРЕ 15 - 20 МИН, ОТМЫВАЮТ ТРОЕКРАТНО ФБР, центрифугируют при 1000 - 1500 об/мин в течение 1 - 1,5 мин. К осадку добавляют 50,0 - 60,0 мкл кроличьих моноспецифических антител к ХГЧ, меченных флуоресцеиназотиоцианатом, инкубируют смесь повторно при комнатной температуре в течение 15 - 20 мин. Троекратно отмывают ФБР, центрифугируют и исследуют осадок в люминесцентном микроскопе, и при наличии краевого свечения зерен диагностикума диагностируют ранний срок беременности. Предложенный способ позволяет выявлять у 100% женщин при сроке 3 - 4 недели беременности. Время анализа ускоряется в 5 - 6 раз при оценке результата через 1 ч.