Способ приготовления гистологических пленочных препаратов, расслоенных на пластины Советский патент 1991 года по МПК A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии и анатомии, и может быть использовано для изучения морфологических изменений, возникающих в пленочных препаратах, при моделировании различных заболеваний на животных, ведущих к утолщению оболочек (пленок) органов.

Целью изобретения является получение максимального выхода высокой информативности пленочных препаратов с одновременным выявлением сосудов, нервов и соединительнотканного состава,а также сокращение времени импрегнации.

Предлагаемый способ реализуют следующим образом.

Свежие, тотальные полоски фасций, взятые вдоль оси голени, в расплавленном виде закрепляют на плотном картоне и фиксируют от 14 сут до 1 года в 10%-ном растворе нейтрального формалина (рН 7,3-7,5), приготовленного на отстойной воде промывают в проточной воде 6-12 час и ополаскивают в дистиллированной воде, промокают фильтровальной бумагой и оставляют в 80° спирте на 25-30 мин. Ополаскивают (2-3 с)

дистиллированной водой, слегка осушают фильтровальной бумагой. Помещают в свежеприготовленный раствор 23-25%-ного раствора азотнокислого серебра при 37- 38°С в термостате на 30-35 мин в закрытых стаканчиках (бюксах). Ополаскивают отстойной (кипяченой, остуженной до комнатной температуры) водой, проводят каждую пластину отдельно через 5 стаканчиков 2%- ного раствора формалина (рН 7,3-7,5). Ополаскивают 0,5-1 мин дистиллированной водой, слегка осушают фильтровальной бумагой и погружают в аммиачное серебро (приготовленное перед его применением) на 3-4 мин, затем проводят через 0,5-1 %- ный раствор кислого формалина при рН 6,5-7,0 до приобретения коричневатого цвета.

П р и м е р 1. Собака № 8312 (Интактное животное. Контроль). После эвтаназии брали полоски фасций вдоль оси голени, в расправленном состоянии закрепляли на плотном картоне, фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина в течение 75 дн (ежемесячно меняя формалин при той же концентрации), промывали в течение

ё

Ј

2

00

О 00

12 ч в проточной воде и расслаивали на пластины, толщиной не более 100 мкм. Затем промывали в дистиллированной воде 25 мин, промокали фильтровальной бумагой, оставляли в 80° спирте на 35 мин. После этого быстро проводили через дистиллированную воду (2-3 с), слегка осушали фильтровальной бумагой и помещали в 25%-ный раствор азотнокислого серебра при 38°С в термостате на 30 мин в закрытых стакан- чиках (бюксах). Пластины преобретали желтовато- бежевый оттенок. Ополаскивали в отстойной воде (кипяченой, остуженной до комнатной температуры), проводили через 5 стаканчиков 2%-ного раствора формалина (рН 7,3-7,5), ополаскивали дистиллированной водой 0,5 мин, слегка осушали фильтровальной бумагой и погружали в аммиачное серебро на 3 мин (готовят перед применением). Проводили через 0,5-1%-ный раствор кислого формалина (рН 6,5-7,0), до приобретения пластинами коричневого оттенка.

Для прекращения импрегнации пластины переносили на 10 мин в аммиачную воду, приготовленную на дистиллированной воде в соотношении 70; 80; 96(Т); 96{И); 100°. Просветляли в толуоле, заключали в канадский бальзам, тщательно расправляли каждую пластину, плотно прижимая к стеклу. При микроскопии выявляется сосудистое русло, пучки волокон основного слоя и сопровождающие нервные волоконца.

П р и м е р 2. Методика выполнения способа строго соответствует приведен но-

му. Отличие состояло лишь в том, что используют 23%-ный раствор азотнокислого серебра при температуре 37°С. При микроскопическом исследовании одновременно выявляют сосуды микроциркулярного русла, соединительно тканые структуры и нервные волокна.

П р и м е р 3. При соблюдении всех условий предварительной подготовки примеров 1 и 2 при использовании 26%-ного азотнокислого серебра волокна основного слоя импрегнируются неравномерно, сосуды с явной передозировкой окраски от тем- нокоричневого до черного цвета.

П р и м е р 4. Снижение концентрации серебра в растворе до 22% с сохранением других параметров приводило к неравномерной импрегнации звеньев сосудистого русла и слабому выявлению пучков волокон основного слоя.

Формула изобретения Способ приготовления гистологических пленочных препаратов, расслоенных на пластины, путем фиксации формалином, промывки в воде и окраски в растворе азотнокислого серебра, отличающийся тем, что, с целью одновременного выявления сосудов нервов и соединительнотканного состава, импрегнацию осуществляют в 23-25%-ном растворе азотнокислого серебра при 37-38°С в течение 30-35 мин, проводят через аммиачное серебро с восстановлением в 0,5-1 %-ном растворе кислого формалина.

Изобретение относится к способам приготовления пленочных препаратов. С целью одновременного выявления сосудов, нервов и соединительнотканного состава, импрегнацию осуществляют в 23-25%-ном растворе азотнокислого серебра при 37-38°С в течение 30-35 мин, проводят через аммиачное серебро с восстановлением в 0,5-1 %-ном растворе кислого формалина.