СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ДЕГЕНЕРИРОВАННЫХ НЕРВНЫХ ВОЛОКОН И ИХ ОКОНЧАНИЙ Советский патент 1971 года по МПК G01N1/30 C12N5/00 

Изобретение относится к биологии и Медицине. Пзвестеп способ выявления дегенерироваиных нервных волокон и их окончаний путем фиксации ткани в 10%-ном растворе формалина, подготовки срезов, их промывки, обработки растворами фосфорпомолибденовой кислоты и пермапганата калия и импрегнации азотнокислым серебром. Однако указанный способ не обеспечивает достаточно полной импрегнации окончаний дегенерированных нервпых волокон. Цель изобретения - более полное выявление дегенерированных нервных волокон и их окончаний. Это достигается тем, что срезы перед импрегнацией обрабатывают кислым раствором соли пятивалентного ванадия, например пятиокиси вападия. Для выявления дегеперированных нервных Волокон и их окончаний в соответствии с изобретеиием ткань мозга фиксируют 10%иым раствором формалина, приготовленным На 0,85%-ном растворе хлористого натрия. Фиксацию проводят Методом прижизненной перфузии через левый желудочек сердца или аорту. После извлечения мозговую ткань дополнительно фиксируют в 10%-ном растворе формалина в течение 10-14 дней. Срезы толщиной 25-40 мк дважды промывают дистил лпровагнюй водой (но 5 мин) и иомеш,ают в кислый раствор метаваиадата аммония или пятнокнси ванадия на 15-40 мин. Затем срезы вновь дважды нромывают но 5 мин дистиллироваппой водой, помещают па 20-30 мин в 3%-ный раствор азотнокислого серебра н ополаскивают дистиллпрованпой водой. Далее срезы помещают на 1 -1,5 мин в аммиачное серебро, иосле чего их перепосят в редуцирующий раствор Паута и выдерживают в нем 2-3 мин. После промывки в теченне 2 мин в днстиллированной воде срезы номещают на 1-2 мин в 0,5%-пый раствор гипосульфита иатрия, вновь промывают 10-15 мин дпстиллированпой водой и наклеивают на предметные стекла сппртовым раствором желатпны. После высуп1нвания и обезвоживания в синртах возрастающс концентрации срезы иросветляют в ксилоле и заключают в каиадский бальзам под нокровпое стекло. Дегенерировапные нервные волокна и их окончания выглядят черными деформированными па желтом или желтокорнчневом фоне. Для приготовления кислого раствора пятиокиси вападпя 1 г химически чистого препарата смешивают со 100-150 мл воды, добавляют 10 мл копцентрированиой серной кислоты, нагревают при перемешивании до растворения, охлаждают и доводят объем смеси до 1 л. Вместо 1 г пятиокиси ванадия можио взять 1,2 г метаванадата аммония.

Для приготовления раствора аммиачного серебра к 50 мл 3%-иого раствора азотнокислого серебра добавляют 6 мл 1,5%-ного раствора едкого натра в 25%-ном аммиаке. Для приготовления редуцирующего раствора к 900 мл воды добавляют 100 мл 96° этилового спирта, 3 мл 40%-ного кислого формалина и 0,3 г лимонной кислоты.

Предмет изобретения Способ выявления дегенерированных нервных волокон и их окончаний путем фнксации ткани в 10%-ном растворе формалина, подготовки срезов, их нромывки и имнрегнации азотиокислым серебром, отличающийся тем, что, с целью более нолного выявления дегеиерировапных иервных волокон и нх окончании, срезы перед нмпрегпацией обрабатывают кислым раство)ом соли нятнвалентиого ванадия, например пятиокиси ванадия.