Способ цитологического определения катехоламинов в эритроцитах Советский патент 1992 года по МПК G01N1/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к гистохимическим методам исследования, и может быть использовано для контроля за скоростью и активностью адаптивных процессов у животных и человека в эксперименте и клинике.

Целью является повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

На хорошо обезжиренном предметном стекле приготавливают мазок крови. Стекло помещают в сосуд с концентрированными парами формалина на 1-2 мин, а затем погружают в смесь следующего состава, мас.%:

Формалин10-15

Бихромат калия1-5

Ацетат натрия0,2-0,4

Хлорид натрия0,9-1,6

ВодаОстальное

Обработку мазков проводят при комнатной температуре в темноте 40-50 мин, причем все компоненты смеси приготовляются на основе 1,5%-ного раствора NaCI во избежание гемолиза эритроцитов. Затем мазки ополаскивают дистиллированной водой и импрегнируют 5%-ным раствором азотнокислого серебра 3 мин. Избыток красителя смывают дистиллированной водой и окрашивают цитоплазму эритроцитов 1 %- ным раствором эозина в 1 мин. Стекла подсушивают на воздухе и микроскопируют под иммерсией. В эритроцитах на фоне розовой цитоплазмы наблюдают темно-коричневые глыбки - включения катехоламинов. Пары формалина и добавление его в состав смеси необходимы для надежной фиксации мазков крови.

П р и м е р 1. Информативность метода была проведена серией опытов на 5 крысах Ч СА О СЛ

сл

СЛ

самцах, которым внутримышечно был введен адреналин в дозе 2,5 мг/кг.

Для контрольного исследования кровь взята из хвостовой вены до введения препарата. Последующие заборы крови произведены через 5,45 и 120 мин после инъекции. Оценка результатов опытов проводилась по проценту распределения эритроцитов с различными размерами гранул и плотностью их в клетках. Учет величины гранул проводили по 3-бальной системе: мелкие - средние - крупные гранулы; плотность расположения гранул по 4-бальной системе. Приведенные данные свидетельствуют, что в контрольных мазках из 100 просмотренных эритроцитов 28 не содержат гранул, остальные содержали в основном мелкие гранулы, заполнявшие наполовину (34%) или полностью (24%) эритроцит.

Через 5 мин после введения адреналина в 2,8 раза уменьшилось количество пустых эритроцитов и до 49% (по сравнению с 13% в контроле) увеличилось количество эритроцитов с гранулами среднего размера.

Через 45 мин количество пустых эритроцитов становится близким к контрольному (25%) и наблюдается снижение количества эритроцитов с мелкими (2%) и средними (20%) гранулами и резкое увеличение числа эритроцитов с крупными гранулами (с 4 до 53%). Через 120 мин становится явной тенденция к возврату эритроцитов к контрольным значениям (21% пустых, 35% эритроцитов с мелкими, 34% со средними и 10% с крупными гранулами).

Таким образом, введение адреналина сопровождается максимальным увеличением количества гранул по размерам и плотности к 45-й мин и тенденцией к нормализации к 120-й мин, выразившейся в появлении значительного количества пустых эритроцитов и уменьшении эритроцитов с крупными гранулами.

П р и м е р 2. Следующая серия опытов была проведена с экстравазированной кровью 5 крыс-самцов, в которую добавлялся адреналин в разных концентрациях: 0,000001, 0,00001, 0.0001, 0.001% и 0,01%- ные растворы. В мазке крови без добавления препарата преобладают мелкие и средние гранулы, полностью заполняющие клетки. При добавлении в кровь минимальной концентрации адреналина наблюдается увеличение крупных гранул с 7% в

контроле до 18%. При добавлении адреналина в концентрации 0.00001% продолжается увеличение количества эритроцитов с крупными гранулами до 43% при резком

снижении их числа (с 39 до 8%) с мелкими гранулами. Добавление адреналина в концентрации 0,0001% мало меняет предыдущие результаты. Однако при концентрациях 0,001 и 0,01% наблюдается резко выраженная тенденция к увеличению количества эритроцитов с крупными гранулами (до 65 и 83% соответственно) и уменьшению их числа с мелкими и средними гранулами, что объясняется включением механизмов неспецифической рецепции катехоламинов.

Следовательно, предлагаемый способ является чувствительным для оценки и изучения различных физиологических состояний организма, связанных с воздействием

на симпато-адреналовую систему.

Заявленный способ может быть использован в научно-исследовательской и клинической практике в тех случаях, когда оказывается невозможным оценить состояние симпато-адреналовой системы по количеству катехоламинов в тканях, а также требует минимального количества исследуемого материала, в связи с чем может быть с успехом использован для изучения нормальных физиологических и патологических процессов в организме и динамике.

Формула изобретения Способ цитологического определения катехоламинов в эритроцитах путем фиксации мазков в среде, содержащей бихромат калия, с последующей их импрегнацией в азотнокислом серебре и определением катехоламинов по интенсивности окрашива- ния, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, мазок перед фиксацией обрабатывают парами формалина, а фиксатор дополнительно содержит ацетат натрия, формалин и хлорид натрия при следующих соотношениях компонентов. мас.%:

Бихромат калия1-5

Ацетат натрия0,2-0,4

Формалин10-15

Хлорид натрия0,9-1,6

ВодаОстальное

при этом импрегнацию проводят в 4-8%- ном растворе азотнокислого серебра в течение 2-4 мин.

Изобретение относится к области меди- цины, а именно к гистохимическим методам исследования. Целью является повышение точности определения катехоламина в тканях и клетках организма. Цель достигается тем, что мазки перед фиксацией обрабатывают парами формалина, а фиксатор дополнительно содержит ацетат натрия, хлорид натрия при следующих соотношениях компонентов, мас.%: бихромат калия 1-5; ацетат натрия 0,2-0,4; формалин 10-15; вода - остальное. При этом импрегнацию проводят в 4-8%-ном растворе азотнокислого серебра после фиксации, а клетки докрашивают в 1 %-ном растворе дозина. Способ позволяет выявить все гранулы катехоламина в клетке.