Способ диагностики гиперфибринолиза Советский патент 1991 года по МПК G01N33/86 

Изобретение относится к медицине, а Именно к гемокоагулологии, может быть использовано для диагностики гиперфибрино- лиза.

Целью изобретения является повышение специфичности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Определяют степень естественного лизиса по количеству выделяющихся форменных элементов (Рз фракции), образование которой обусловлено плазминовым разрушением сгустка. Для этого кровь для исследования набирают в три силиконированные центрифужные пробирки; сухую 2 мл, опытную (содержащую 0,1 мл 0,15 М NaCI) и кон- тоольную (содержащую по 0,1 мл 6%-ного раствора е-АКК-Ј-аминокапроновой кислоты в 0,15 М раствора NaCI. Удобно набирать 4 мл крови в сухую силиконированную пробирку, а затем с помощью силиконирован- ной или пластиковой пипетки переносить по 1 мл в опытную и контрольную пробирки. Параллельно приблизительно 0,05 мл крови для определения гематокрита вносят в пробирку с капилляоами, Опытную и контрольную пробирки закрывают пробками, погружая якорь в кровь. Все три пробирки помещают в водяную баню (37°С). Наблюдают момент образования сгустка я момент начала ретракций (сгусток отслаивается от стенки пробирки). В этот момент (обычно не более 20 мин после образования сгустка) пробки осторожно поворачивают, не вынимая их из пробирок, для полного отделения сгустков от стенок. Пробирки помещают в

сх

а

XI

vj 4

баню еще на 10 мин. Сгусток в пробирке без якоря (сухая силиконированная пробирка) отделяют от стенок стеклянной палочкой. Пробирку центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин, Отделившуюся сыворотку по 0,5 мл переносят в две центрифужные пробирки, обозначаемые также как опытная и контрольная, причем в последнюю предварительно вносят 3 мг е-АКК. Сформировавшиеся сгустки на якорях осторожно извлекают из пробирок и, промыв их в стакане с 50 мл 0,15 М раствора NaC (сначала опытный, затем контрольный), переносят в соответствующие пробирки, содержащие сыворотку. После этого сгустки инкубируют при 37°С до появления видимых признаков лизиса сгустка в опытной пробирке, но не более 1 ч. Затем их извлекают, а пробирки с сывороткой и взвешенными в ней форменными элементами (Рз) центрифугируют 2 мин при 3000 об/мин, удаляют из каждой по 0,4 мл сыворотки, измеряют пипеткой оставшийся объем сыворотки и форменных элементов, ресуспендируют форменные элементы в сыворотке и заполняют этой взвесью гематокрит- ные капилляры. Капилляры центрифугируют и определяют процентное соотношение сыворотки и форменных элементов.

Показатель спонтанного фибринолиза (СФ, %) вычисляют по формуле

гь. Z F-рпыт П tonbiT 2j Рконтр. h Хконтр, „ ЬФHhX

х 100,

где 2 F суммарный обьем сыворотки и форменных элементов соответственно в опытной и контрольной пробирках, мл;

ht- процентная концентрация форменных элементов во взвеси соответственно для опытной и контрольной пробирок, %;

Ht - гематокритный показатель исследуемой крови, %.

Пример. Больной С-0., д-з: эритре- мия, ст. ПА. Кровь из вены взята широкой иглой в сухую силиконированную центрифужную пробирку в количестве 5 мл. По 1 мл крови перенесено в опытную и контрольную пробирки. Через 20 мин инкубации образовавшиеся сгустки отслоились от стенок пробирок, попоротом пробок они полностью отделены от стекла и через 10 мин перенесены соответственно в опытную и контрольную пробирки с аутосывороткой. После 1 ч инкубации F в опытной пробирке (после удаления 0,4 мл сыворотки) 0,245 мл, в контрольной 0,215 мл,

пгопытн. -32,03%, пГконтр. 19,10%, Ht 67%,СФ 5,58%.

Описанным способом исследовали естественный лизис сгустков крови 36 здоровых доноров. Обнаружено отсутствие достоверных различий между степенью разрушения сгустков, определяемой по величине Рз, в опытных и контрольных пробах крови, что ограничивает достоверные диагностические возможности предлагаемого способа лишь состояниями гиперфибринолиза (повышения фибринолитической активности крови).

Гиперфибрмнолиз диагностируется в том случае, если показатель СФ исследуемой крови превышает максимальное его

значение для крови здоровых доноров: 3,77% (Х +3,4а, Р 0,001).

Показатели фибринолитической активности у гематологических больных приведены в таблице (диагноз: ХЛЛ - хронический

лимфолейкоз, ХМЛ - хронический миело- лейкоз, ОЛ - острый лейкоз, МБ - миелом- ная болезнь, Эр - эритремия, ГВ - геморрагический васкулит, Сч - рак, Т - тромбофилия).

Из приведенных данных видно, что в

абсолютном-большинстве определений величина третьей фракции (форменные элементы, выделившиеся из сгустка) при полном выключении фибринолиза Ј-аминокапроновой кислотой уменьшается весьма незначительно и составляет от 20.4 до 98,6% от величины третьей фракции в ин- тактной крови при определении известным способом. В среднем эта величина

для 76 определений составляет 64,3± ±2,89% (X ± Sx). Это доказывает весьма низкую специфичность известного способа в отношении диагностики активации фибринолиза, что и отражено в литературе. Иззестный способ регистрирует не столько процесс фибринолитического разрушения сгустка крови, сколько те механизмы, не относящиеся к фибринолитической системе, которые препятствуют включению форменных элементов з этот сгусток. Предлагаемый способ позволяет учитывать только фибринолитическое разрушение сгустка крови, диагностировать истинную активацию фибринолиза.

Предлагаемый способ имеет преимущество благодаря высокой специфичности, простоте и доступности и может быть применим в клинической лабораторной практике для оценки функции плазминовой

системы.

Формула изобретения Способ диагностики гиперфибринолиза путем забора цельной крови, образования сгустка, ретракции его, инкубации in vitro,

определения количества свободных форменных элементов, отличающийся тем, что, с целью повышения специфичности способа, уже сформировавшийся ретраги- рованкый сгусток инкубируют в аутологиче- ской сыворотке, не содержащей форменных элементов, при этом, в качестве контроля

используют пробу крови, в которой фибри- нопитическая активность ингибирована е- амичокэпроновой кислотой, рассчитывают показатель спонт иного фибринолиза ч, если этот показатель превышает средний максимальный уровень для здоровых доноров, диагкосцируют гиперфибринолиз.

Изобретение относится облас-и медицины, а именно к коагулологии. изобретения является повышение специфичности способа диагностики гигерфибоиколиза. Для этого определяют количество форменных элементов, выделившихся из уже сформированного ретрагированкого сгустка, для чего после образования и отсла- изания сгустка от стенок пробирки его перенося; в аутслогичнуго сыворотку, не содержащую форменных элементов, и после инкубации сгустка определяют количество выделившихся из него форменных зяементор, в чачест.:е контроля используют пробу хрови, в которой фмбринолитическая активность инггбирована Ј-зминокапро- новой кислотой рассчитывают показатель спонтгнп огофибринолиза и, если этот показатель превышает средней максимальный для здоровых доноров 3,7/, дмлгносцируют гиперфибриколиз. 1 табл. СП с

Степень разрушения сгустка крови с Ј-АКК известным способом. Доля фракции 3, образующейся в присутствии Е -АКК в фракции 3 интактной крови известным способом.