Способ диагностики активных форм туберкулеза легких Советский патент 1991 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики активных форм туберкулеза легких и неспецифической пневмонии и для оценки состояния иммунитета к микробактериям туберкулеза у этой группы больных.

Цель изобретения - повышение точности за счет дифференциального выявления активного туберкулеза легких и неспецифической пневмонии.

Способ осуществляется следующим образом.

Кровь из капиллярных сосудов пальца, взятую общепринятым методом, в количестве 0,002-0,005 мл переносят в среду физраствора на 0,1 М фосфатном буфере. рН 7,4,

в объеме 0,2 мл, содержащую вакцину БЦЖ в концентрации 1 мг/мл производства Ставропольского НИИ вакцин и сывороток, хорошо перемешивают и оставляют на 1 ч при комнатной температуре (21 ± 3°С) По истечении 1 ч реакцию останавливают добавлением в пробу 0,02 мл 25%-ного глютаральдегида, перемешивают для равномерного распределения фиксатора и через 3-5 мин из полученной смеси готовят препарат раздавленной капли, который микроскопируют при увеличении 40 х 10 х 1,5 (при наличии бинокулярной насадки) или 40 х 15 без нее. Учету подлежат нормальные формы эритроцитов - дискоциты (клетки двояковогнутой формы с гладкой поверхностью) и эхиноциты (шиповидно-деформироо

00

ю ел

00

ванные клетки) разной степени выраженности (I, II, III и IV степени по классификации M.BessIs). Подсчитывают не менее 200 клеток в каждом препарате, встречающихся в поле зрения, подсчитывают их среднеарифметическое значение на 100 клеток для выражения результата в процентах и вычисляют затем показатель эхииоцитар- ной трансформации эритроцитов (ПЭТЭ) по формуле:

ПЭТЭ ( эхиноцитов 1 ст). + ( Ј эхиноцитов II ст. х 10) + (Ј эхиноцитов III

СТ. X 100) + ( ЭХИНОЦИТОВ IV СТ. X

1000). Далее больному не позже чем через 1 ч после первого забора крови ставят реакцию Манту с внутрикожным введением 2 ТЕ туберкулина, а через 24 ч повторяют взятие крови из пальца для повторного проведения всех вышеописанных манипуляций и вычисления ПЭТЭ после туберкулиновой нагрузки. Для решения вопроса о специфике воспалительного заболевания в легких рассчитывают индекс соотношения между ПЭТЭ до и ПЭТЭ после туберкулиновой пробы путем деления первого показателя на второй:

Индекс ПЭТЭ - ПЭТЭдоППД индекс lid id пэтЭпослеППД

приготовлен препарат раздавленной капли. Для этого на предметное стекло наносили 1 каплю реакционной смеси и накрывали ее тонким покровным стеклом,

окантованным тонким слоем вазелина. Микроскопическое изучение красных клеток крови показало наличие в препарате 46% эхиноцитов I степени, 16,5% эхиноцитов И степени и 4% эхиноцитов III степени. Показатель эхиноцитарной трансформации эритроцитов (ПЭТЭ)

ПЭТЭ 46+ (16,5x10)+ (4x100) 611.

Сразу же после взятия крови больному

сделана реакция Манту с 2 ТЕ туберкулина,

а на следующий день в это же время (т.е. через 24 ч) проведено повторное исследование крови по уже описанной методике с вычислением ПЭТЭ после туберкулиновой пробы:

ПЭТЭ 65,5+ (5,5x10) +(2x100) 320,5.

Для решения вопроса о специфичности воспалительного процесса в легких был рас- считан индекс соотношения ПЭТЭ до и после проведенной пробы Манту:

30

611 320,5

1,9

Изобретение относится к области медицины, преимущественно к пульмонологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики активных форм туберкулеза легких Целью изобретения является повышение точности способа за счет дифференциальной диагностики активных форм туберкулеза и неспецифических пневмоний. Цель достигается тем, что эритроциты крови исследуются в реакции эхиноци- тарной трансформации эритроцитов, которую проводят до и через 24 ч после постановки пациенту реакции Манту с 2ТЕ турберкудина ППД-Л, при этом реакцию трансформации осуществляют посредством инкубации крови в присутствии вакцины БЦЖ в течение 1 ч при комнатной температуре с последующей фиксацией клеток и подсчетом показателя эхиноцитарной трансформации эритроцитов и отношения показателей до и после туберкулиновой нагрузки и при значении отношения 1,1 и выше диагностируют неспецифическую пневмонию, а при значении, меньшем 1,1, диагностируют активный туберкулез легких. Положительный эффект способа заключается в отличие от известного способа в достижении дифференциальной диагностики. W Ё

При значении индекса 1,1 и более ставится диагноз неспецифической пневмонии, а при значении менее 1,1 - активной формы туберкулеза легких.

Способ иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения.

Для удобства одновременного обследования группы пациентов были использова- ны 96-луночные планшеты для иммунологических реакций с максимальным объемом лунки 0,25 мл и герметичной пластиковой крышкой. Время инкубации смеси в каждой лунке учитывали индивидуально.

П р и м е р 1. Больной Антонов С.И. При первичном обследовании была взята капиллярная кровь из пальца в количестве 0,002- 0,005 мл (на кончике пластикового наконечника микропипетки), которая пере- несена в лунку планшета для иммунологических реакций с 0,2 мл физраствора на 0,1 М фосфатном буфере, содержащем вакцину БЦЖ в концентрации 1 мг/мл, хорошо перемешана со средой путем пипетирования, накрыта пластиковой крышкой и оставлена на инкубацию при комнатной температуре. Спустя 1 ч в лунку добавлено 0,02 мл 25%- ного глютаральдегида, вновь проведено пи- петирование смеси и через 3-5 мин был

т.е. более 1,1, поэтому расценен как типичный для неспецифической пневмонии. В дальнейшем в ходе обследования и пробного лечения пациента диагноз пневмонии, поставленный с помощью предлагаемого способа, был подтвержден клиническим диагнозом,

П р и м е р 2. Больной Бурцев Ю.Н. При первичном обследовании с целью дифференциальной диагностики активного туберкулеза легких и пневмонии проведено исследование способности эритроцитов изменять свою форму при инкубации в физрастворе с вакциной БЦЖ до и через 24 ч после постановки реакции Манту с 2 ТЕ туберкулина. В результате величина ПЭТЭ до туберкулиновой пробы составила

50,5+ (9x10) 140,5, а через 24 ч

58,5 + (2,2 х 10) + (1 х 100) 378,5.

Последующее вычисление индекса соотношения ПЭТЭ показало: что величина индекса значительно меньше 1,1:

378 5 0,4, в связи с чем и заболевание

пациента было расценено как активная форма туберкулеза легких. В дальнейшем в ходе дополнительного обследования и пробного

специфического лечения диагноз, поставленный на основе предлагаемого лабора- торного исследования крови, был подтвержден клиническим диагнозом,

Всего под наблюдением с целью диффе- ренциальной диагностики воспалительного процесса в легких было 63 пациента в возрасте от 30 до 65 лет; из них 43 с активной формой туберкулеза легких и 20 с неспецифической пневмонией.

При обследовании пациентов по предлагаемому способу было обнаружено, что в то время как количество эхиноцитов (и величина ПЭТЭ) после туберкулиновой нагрузки у больных с активной формой туберкулеза легких имеет тенденцию к увеличению при среднем значении индекса ПЭТЭ, равном 0,37 ±0.04, у больных пневмонией величина ПЭТЭ - увеличивалась при среднем значении индекса ПЭТЭ, равном 3,75 ± 0,79. При индивидуальной оценке величины индекса у каждого больного было установлено, что у больных с диагнозом активная форма туберкулеза легких этот индекс всегда ниже 1,1, а у больных неспецифической пневмонией равен или выше 1,1, т.е. была определена диагностическая граница, выше которой располагались значения индексов ПЭТЭ у больных с пневмонией, а ниже - у больных с активной формой туберкулеза.

Необходимо отметить, что чрезвычайно высокая чувствительность предлагаемого способа диагностики обусловлена прежде всего инкубацией крови с вакцинным штаммом микробактерий туберкулеза и тем, что способ предусматривает изучение взаимодействия клеток крови с полными оболочными антигенами возбудителей туберкулеза, а не с продуктами их жизнедеятельности (туберкулином) и учет результатов реакции по малейшему изменению формы эритроцитов, а не по их конечному разрушению (гемолизу), как в прототипе.

Таким образом, предлагаемый способ дифференциальной диагностики активных форм туберкулеза легких и пневмонии позволяет в течение 24 ч точно и однозначно определить у больного характер воспалительного (патологического) процесса в легких и своевременно начать его специфическое лечение. Последнее обстоятельство имеет особое значение, так как в настоящее время отмечается заметное изменение клинического течения и патамор- фоза не только всех форм туберкулеза легких, но и неспецифических пневмоний, что обусловливает повышенную частоту диагностических ошибок среди этих заболеваний от 30 до 50%.

Кроме того, предлагаемый способ отличается простотой исполнения, доступностью для любой диагностической лаборатории и неограниченной широтой количественной характеристики результатов реакции в виде показателя эхиноцитарной трансформации эритроцитов, что позволяет изучать у каждого пациента состояние устойчивости к возбудителю в процессе специфической терапии.

Формула изобретения Способ диагностики активных форм туберкулеза легких путем клинического обсле- дования и исследования эритроцитов крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности путем дифференциального выявления активных форм туберкулеза и неспецифических пневмоний, эритроциты крови исследуют в реакции эхиноцитарной трансформации эритроцитов, при этом проводят реакцию до и через 24ч. после постановки пациенту реакции Манту с 2ТЕ туберкулина ППД-Л путем инкубации крови в присутствии вакцины БЦЖ в течение 1 ч при комнатной температуре с после: дующей фиксацией клеток, подсчетом показателя эхиноцитарной трансформации эритроцитов и отношения показателей до и после туберкулиновой нагрузки и при значении отношения 1,1 и выше диагностируют неспецифическую пневмонию, а при значении, меньшем 1,1, диагностируют активный туберкулез легких.