Способ диагностики сепсиса у новорожденных детей Советский патент 1991 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, и может быть использовано для диагностики сепсиса у новорожденных.

Целью изобретения является повышение точности, ускорение и удешевление способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Определяют наличие естественного ингибирования активности макромолекуляр- ных антител в сыворотке крови новорожденных. Для этого в реакции непрямой гемагглютинации определяют естественное ингибирование иммуноглобулинов класса М и при величине ингибирующего индекса (ИИ) - отношения суммарного титра контрольного ряда к суммарному титру опытного ряда больше 1,2 определяют наличие естественного ингибирования активности иммуноглобулинов класса М и, следовательно, наличие сепсиса у новорожденного.

Пример 1. Мальчик М. Переведен из родильного дома на 10 день жизни в тяжелом состоянии с диагнозом: внутриутробная инфекция, пневмония, омфалит. Ребенок от 1 преждевременных родов на 37 неделе беременности, которая протекала с токсикозом на фоне хронического пиелонефрита, анемии. Рожден путем операции кесарево сечение Масса тела при рождении 2500 г, длина 46 см, оценка по шкале Апгар 7/7 баллов. Поступил в городскую детскую больницу в отделение реанимации в связи с тяжестью состояния. Были выражены явления интоксикации: желтушность кожных покровов, вялость, угнетение сосательного рефлекса. Пупочная ранка влажная, с выраженной периумбиликальной реакцией, из глаз гнойное отделяемое. Дыхательные расстройства в виде брадипноэ (до 20-34 в 1 мин), в легких влажные хрипы Тоны сердца приглушены, ЧСС 134 в 1 мин. Печень и селезенка не увеличены. В гемографе: лейкоцитов 16,7-10 /л, нейтрофилез со сдвигом влево (ю-2, п-37, с-36), СОЭ 7 мм/ч С-реакО 00

ю о о

тивный протеин . Позднее была выявлена стафилококковая природа заболевания, при посевах крови обнаружен эпидермальный стафилококк, дважды, эта же флора выделена из отделяемого пупочной ранки и глаз. На основании клинико-лабораторных данных поставлен диагноз: внутриутробный сепсис стафилококковой этиологии, септи- копиемия (пневмония, гнойный конъюнктивит, омфалит), острое течение. У ребенка в разгар септического процесса, на высоте токсикоза, доминирования очагов инфекции произведен забор крови из подключичной вены через катетер. Кровь центрифугирована (1500 об /мин). Предварительно в пробирку помещали 1,0 мл 0,9%- ного раствора хлористого натрия, с помощью механической пипетки из этой пробирки взяли 25 мкл раствора, а затем внесли такое же количество исследуемой сыворотки больного, таким образом получили разведение 1:40. Тест-сыворотка - неадсорбированная сыворотка к сальмонеллам группы А, кроличья для РИГА. Титр 1:6400. Непосредственно перед постановкой реакции ее разводили 1:20 изотоническим раствором хлористого натрия. Диагностикум - сальмонеллезный - 0, эритроцитарный 1, 2, 12, т.е. соответствующий используемой сыворотке, выпускаемый предприятием по производству бактериальных препаратов Московского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им, Г.Н.Габричевского, затем в лунку полистиролового планшета для иммунологических исследований вносили механической пипеткой 50 мкл тест-сыворотки в рабочем разведении и к ней добавляли 50 мкл исследуемого материала (в разведении 1:40). Параллельно ставили 2 контроля, где 50 мкл тест-сыворотки смешивали с 50 мкл изотонического раствора хлористого натрия. На крышку планшета помещали фильтровальную бумагу, смоченную 0,9%-ным раствором хяористого натрия, планшет плотно закрывали крышкой и помещали в термостат при температуре 37°С на 4 ч. После этой инкубации из опытных и контрольных смесей готовили двукратные серийные разведения в изотоническом растворе хлористого натрия в объеме 50 мкл, начиная с 1:80 до 1:10240 (на другом планшете). В каждую из лунок с разведениями вносили по 25 мкл зритроцитарного диагностикума и помещали вновь в термостат на 2 ч при температуре 37°С, после чего проводили оценку результатов по четырехплюсовой системе: 4+ - все эритроциты агглютинированы и равномерно покрывали дно лунки, 3+ - агглютинированы почти все эритроциты, на фоне

и

равномерного осадка имеется малозаметное кольцо из неагглютинированных эритроцитов, 2+ - на фоне равномерного осадка на дне лунки имеется осадок из неагглютинированных эритроцитов в виде маленького колечка или пуговки, 1+ - большинство эритроцитов не агглютинировано и осело в центре дна лунки в виде маленького колечка с неровными краями, - - все эритроциты

не агглютинированы и осели в центре дна лунки в виде маленького колечка с ровными краями или пуговки. Полученные результаты реакции показаны в таблице.

Подсчитав суммарный титр реакции (общее количество плюсов во всех лунках опытного и контрольного ряда), рассчитывали индекс ингибирования (ИИ) реакции по формуле

20

ИИ

JK

То

где Tk суммарный титр контрольного ряда; То - суммарный титр опытного ряда.

В результате получили 1,4. Реакция признается положительной, так как величина ИИ превышает 1,2.

П р и м е р 2. Мальчик А„ переведен из родильного дома на 10 день жизни в тяжелом состоянии, с направительным диагнозом: недоношенность - III ст. Ребенок от преждевременных родов на 29 неделе беременности, с весом 1300, длиной 37 см, со слов матери беременность и роды протекали без особенностей. Тяжесть состояния в роддоме была обусловлена морфологической и функциональной незрелостью. При поступлении в отделение реанимации де- сткой больницы состояние тяжелое. Признаки недоношенности, отечный синдром. Очень вялый, скованный, застывает в позе, токсические явления, которые постепенно нарастали. Из очагов инфекции доминировали омфалит, флебит пупочной вены, в легких определялись хрипы, нарушения дыхания. Наряду с нарастанием токсикоза присоединились острая почечная недостаточность, токсический парез кишечника. В лабораторных исследованиях: из крови роста патологической микрофлоры нет, из пупочной ранки высев клебсиэллы, из кала клебсиэлла, из ликвора роста нет. В гемограмме: лейкоцитоз 32,5-10 /л, нейтрофилез 59%, СОЭ 2 мм/ч, С-реактивный протеин ++.

На основании клинико-лабораторных данных поставлен диагноз: пупочный сепсис, септикопиемия (омфалит, флебит пупочной вены, пневмония). В фазе разгара септического процесса, на фоне токсикоза, острой

почечной недостаточности, пареза кишечника из подключичной вены взято 0,5 мл крови.

Произведено исследование на присутствие естественного ингибирующего фактора (ЕИФ) по описанию примера 1. Суммарный титр в сыворотке больного составил 20, в контроле - 25. ИИ 1,25, т.е. в сыворотке больного присутствует естественный ингибирующий фактор. Несмотря на проводимую терапию, ребенок умер. Основной патологоанатомический диагноз - пупочный сепсис.

Таким образом, предлагаемый способ является наиболее точным и информатив0

5

ным в постановке диагноза сепсиса у новорожденных, прост в исполнении, ускорен по сравнению с прототипом на 42 ч, осуществляется с помощью недорогих реактивов. Формула изобретения Способ диагностики сепсиса у новорожденных детей путем оценки иммунологических показателей сыворотки крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, ускорения и удешевления способа, в сыворотке крови определяют естественное ингибирование активности иммуноглобулинов класса М и при наличии ингибирования диагностируют сепсис.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для диагностики сепсиса у новорожденных детей. Целью изобретения является повышение точности, ускорение и удешевление диагностики Цель достигается тем, что в реакции непрямой пассивной гемагг- лютинации определяют естественное инги- бирование активности иммуноглобулинов класса М и при наличии ингибирования диагностируют сепсис. Способ прост в осуществлении, позволяет повысить точность диагностики и ускорить ее. 1 табл.

Результаты исследования естественного ингибирующего фактора у больного М. в разгар заболевания