Способ оздоровления картофеля от вирусов Советский патент 1991 года по МПК C12N5/04 A01H4/00 

Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству, в частности к технологии ведения семеноводства картофеля на безвирусной основе

Целью изобретения является ускорение и повышение выхода оздоровленных растений.

Способ состоит в том, что исходные, зараженные вирусами растения выдерживают в течение 1,5-2 сут в растворе с антивирусными веществами (ABB), выделяют эксплантаты размером 400-500 мкм и помещают их на питательную среду Ван Гофа, содержащую ABB, где в качестве ABB используют разветвленный маннан (РМ) в количестве 0,15-0,25 г/л или РМ с синтетическими ингибиторами цианогуанидином и диоксогек- сагидротриазином при следующем соотношении компонентов, г/л:

РМ.0,15-0,25

Цианогуанидин -0,5

Диоксогексагидротриазин0,5

П р и м е р 1. Растения картофеля гибрида 3731, пораженные Х-вирусом картофеля (ХВК), выдерживают в течение 1 сут в растворе РМ в концентрации 0,10 г/л, затем выделяют эксплантаты от этих растений размером 200-250 мкм (0,20-0,25 мм) и помещают на среду Ван Гофа. содержащую РМ в концентрации 0,10 г/л. Растения контрольного варианта выдерживают в течение суток в дистиллированной воде, затем выделяют эксплантаты размером 200-250 мкм и помещают на среду Ван Гофа, не содержащую РМ, т.е. без добавки антивирусного вещества.

В результате опыта из 10 растений-ре- генерантов только одно не содержит ХВК (10%). Аналогичный результат получен и в контрольном варианте.

П р и м е р 2. Растения картофеля гибрида 3731, пораженные ХВК, выдерживают в течение 1 сут в растворе РМ в концентрации 0,15 г/л, затем выделяют эксплантаты от

О 00 Ю W 00 00

этих растений размером 200-250 мкм и помещают на среду Ван Гофа, содержащую РМ в концентрации 0.15 г/л. Растения контрольного варианта, как и в примере 1, не подвергают воздействию антивирусного вещества РМ. В результате опыта из 10 расте- ний-регенерантов два не содержат ХВК (20%) в то время, как в контрольном варианте все растения содержат ХВК.

П р и м е р 3. Растения картофеля сорта Невский, пораженные М-вирусом картофеля (МВК), выдерживают в течение суток в растворе РМ в концентрации 0,20 г/л, затем выделяют эксплантаты от этих растений размером 200-250 мкм и помещают на среду Ван Гофа, содержащую РМ в концентрации 0,20 г/л. Растения контрольного варианта выдерживают в течение суток в дистиллированной воде, затем выделяют эксплантаты размером 200-350 мкм и помещают на среду, не содержащую РМ. В результате опыта из 15 растений-регене- рантов пять не содержат МВК (33%). Все растения-регенеранты контрольного варианта содержат МВК,

П р и м е р 4. Растения картофеля с. Невский, пораженные МВК, выдерживают в течение 1 сут в растворе РМ в концентрации 0,25 г/л, затем выделяют эксплантаты размером 200-250 мкм и помещают на среду Ван Гофа, содержащую РМ в концентрации 0,25 г/л. Растения контрольного варианта, как и в примере 3, не подвергают воздействию антивирусного вещества (РМ). В результате опыта из 12 растений-регенерантов четыре не содержат МВК (33,3%). Все растения контрольного варианта содержат МВК.

П р и м е р 5. Растения картофеля с. Невский, пораженные МВК, выдерживают в течение 1 сут в растворе РМ в концентрации 0,75 г/л, затем выделяют эксплантаты размером 200-250-350 мкм и помещают на среду Ван Гофа, содержащую РМ в концентрации 0,75 г/л. Растения контрольного варианта, как и в примере 3, не подвергают воздействию антивирусного вещества (РМ). В результате опыта все эксплантаты размером 200-250 мкм погибают. Из трех рас- тений-регенерантов, полученных из эксплантатов размером 350 мкм, в одном МВК не обнаружен. Результаты опыта показывают, что при высокой концентрации РМ проявляется фитотоксичность.

П р и м е р 6, Растения картофеля с. Невский, пораженные МВК, выдерживают в растворе РМ в концентрации 0,20 г/л (оптимальный вариант) в течение:

а)1 сут;

б)1,5 сут,

в)2 сут,

г)3 сут.

Затем выделяют эксплантаты размером

300-450 мкм и помещают на среду Ван Гофа, содержащую РМ в концентрации 0.2 г/л. Растения контрольных вариантов выдерживают в течение 1; 1,5; 2 и 3 сут, в дистилли- рованной воде, выделяют из них

эксплантаты размером 300-450 мкм и помещают на среду Ван Гофа, не содержащую РМ (без антивирусного вещества). Отмечено угнетающее действие РМ на эксплантаты, выделенные из растений, выдержанных в

растворе с РМ в течение 3 сут: вялость и слабая приживаемость выделенных эксплантатов.

В результате опыта:

а) из 15 растений-регенерантов, полученных от растений, выдержанных в растворе с РМ в течение суток, пять не содержит МВК (33,3%);

б)из 21 растения-регенеранта, полученных от растений, выдержанных в растворе с

РМ в течение 1,5 сут, 17 не содержат МВК (81,0%);

в) из 12 растений-регенерантов, полученных от растений, выдержанных в растворе с РМ в течение 2 сут, 10 свободны от

МВК(83,3%).

Полученные результаты показывают, что предварительное выдерживание растений в растворе с РМ должно быть в течение 1,5-2 сут (оптимальный вариант).

В контрольных вариантах все растения- регенеранты (39 шт.) содержат МВК.

Пример. Растения картофеля с. Невский, пораженные МВК, выдерживают в течение 2 сут в растворе РМ (концентрация 0,2 г/л) с комплексом известных синтетических ингибиторов цианогуанидина (ЦГ) и диоксогексагидротриазина (ДГТ) в концентрации по 0,04 г/л каждого. Затем выде- ляют эксплантаты от этих растений

размером 400-600 мкм и помещают на среду Ван Гофа, содержащую РМ (0,2 г/л) в комплексе с ЦГ и ДГТ по 0,04 г/л,

В результате опыта из 7 растений-регенерантов получено четыре здоровых (57%).

ПримерВ. Растения картофеля с. Невский, пораженные МВК, выдерживают в течение 2 сут в растворе РМ (концентрация 0,2 г/л) с комплексом ЦГ и ДГТ в концентрации по 0,10 г/л каждого. Затем выделяют

эксплантаты от этих растений размером 400-600 мкм и помещают на среду Ван Гофа, содержащую РМ (0,2 г/л) в комплексе с ЦГ и ДГТ по 0.100 г/л. В результате опыта из 5 растений-регенерантов получено три здоровых (60%).

П р и м е р 9. Растения картофеля с.При- гожий-2, пораженные комплексом вирусов: Х-вирус картофеля (ХВК) + М - вирус картофеля (МВК) + S-вирус картофеля (SBK) + вирус скручивания листьев картофеля (ВСЛК или L-вирус), выдерживают в течение 2 сут в растворе РМ (концентрация 0,2 г/л) с комплексом ЦГ и ДГТ в концентрациях по. 0,05 г/л каждого. Затем выделяют эксплантаты от этих растений размером 300-450 мкм и помещают на среду Ван Гофа, содержащую РМ (0,2 г/л) в комплексе с ЦГ и ДГТ по 0,05 г/л.

В результате опыта из 10 растений-ре- генерантов 9 являются свободными от виру- сов (90%). Растения контрольного варианта содержат комплекс вирусов (X + S + М + L).

Как указано в примере 9, оздоровлены сорта: Ласунок, Добро, Изора, Невская горка. Вирусологический анализ опытных рас- тений проведен методами: серологии, электронной микроскопии и иммунофер- ментного анализа.

Таким образом, оптимальным является предварительное выдерживание поражен- ных вирусами растений в растворе с ман- наном разветвленным в концентрации 0,15-0,25 г/л в течение 1,5-2 сут с последующим выделением эксплантатов размером 400-500 мкм и посадкой их на среду Ван Гофа. содержащую маннан разветвленный в той же концентрации. Эффективность использования маннача разветвленного повышается при применении его в комплексе с цианогуанидином и диоксогексагидротри- азином а концентрации по 0,05 г/л. Формула изобретения Способ оздоровления картофеля от вирусов, включающий вычленение меристем с последующим культивированием их на питательной среде в присутствии антивирусных веществ, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения выхода оздоровленных растений, перед вычленением меристем исходные растения обрабаты- вают в течение 1,5-2 сут раствором, содержащим антивирусные вещества, вычленяют меристемы размером 400-500 мкм и культивируют их на питательной среде Ван Гофа, при этом в качестве антивирусных веществ в составе среды используют разветвленный маннан в количестве 0.15- 0,25 г/л или в сочетании с цизногуаниди- ном в количестве 0,05 г/л и дезоксигидротриазином в количестве 0,05 г/л.

Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству, в частности к технологии ведения семеноводства картофеля на безвирусной основе. Целью изобретения является ускорение и повышение выхода оздоровленных растений. Способ состоит в том, что исходные растения обрабатывают антивирусным препаратом, вычленяют меристемы и культивируют их на питательной среде Ван Гофа в присутствии антивирусных веществ, при этом в качестве антивирусных веществ используют маннан разветвленный или композицию его s сочетании с цианоцианидином и дезокси- гидротриазином.