Способ получения регенерантов картофеля IN VIтRо Советский патент 1991 года по МПК A01H4/00 

Изобретение относится к биотехнологии и может применяться в гене- тичесой инженерии растений, а также в сельском хозяйстве при микрокло- нальном размножении безвирусных растений картофеля.

Целью изобретения является ускорение получения регенерантов при сохранении их генетической стабильности.

Способ осуществляется следующим образом.

Стеблевые междоузлия пробирочных растений картофеля вычленяют и помещают на,питательную среду, содержащую NH4N03 40-60 мг/л„ CaCli Ю0 150 мг/л, ИУК 8-15 мг/л, БАИ 10 15 мг/л, агар 0-8000 мг/л, воду до 1 л, и инкубируют при 24°С, освещен 3

ности 4000 лк и 16-часовом фотопериоде в течение 20-30 ч. Затем эксплантаты переносят на модифицированную питательную среду Мурасиге -Скуга, .содержащую сахарозу 1000-1500 мг/л, маннит 3000-5000 мг/л, ИУК 0,005- 0,3 мг/л, БАЛ 2-3 мг/л, агар 0- 0,8000 мг/л и культивируют при тех же условиях в течение 6-8 сут„ Затем эксплантаты переносят на модифицированную среду Мурасиге-Скуга, содержащую 12000-20000 мг/л сахарозы, 2- 3 мг/л БАЛ, 3-6 мг/л гибберелловой кислоты и 0-8000 мг/л агара, и куль- тивируют в течение сут при тех же условиях до получения реге- нерантов.

Пример I. Стеблевые эксплантаты растений картофеля сорта Сме-

Јь .Ј

00 СО

на вычленяют и помещают на среду, содержащую з 40 мг/л, CaCl 100 мг/л, ИУК 8 мг/л, БАЛ 10 мг/л, агар 8000 мг/л. После инкубации на данной среде в течение 20 ч при 24°С, освещенности 4000 лк и 16-часовом фотопериоде культивирование продол жают при тех же условиях на модифи- цированной среде Мурасиге-Скуга, со держащей 1000 мг/л сахарозы, 3000 мг/ маннита, 0.,005 мг/л ИУК и 2 мг/л БАП После культивирования в течение 6-8 сут растительный материал переносят на модифицированную питательную среду Мурасиге-Скуга, содержащую сахарозу 12000 мг/л, БАП 2 мг/л, гибберелловую кислоту 3 мг/л На 20-е сутки образуются регенеранты, которые в дальнейшем укореняют и

адаптируют к условиям открытого грун- та.

Пр.имеры 2, 3 осуществляют аналогично примеру 1, при этом эксплантаты помещают на питатель ные среды, содержащие компоненты в концентрациях, соответствующих верх ним и средним значениям заявленных интервалов, в исследования включают гибрид 1 и гибрид 750 Регенеранты получают на 22-е сутки после помещения на последнюю модифицированную среду. Результаты представлены в табл. 1, 2.

Из представленных материалов вид но, что способ является очень эффективным: большое число регенерантов получают в течение недель при обычном их получении через 13-18 недель культивирования Кроме того, при отсутствии стадии недифференцированного роста клеток возможно получение генетически стабильного материала, который можно использовать в генетической инженерии растений.

Формула изобретения

Способ получения регенерантов картофеля in vitro, включающий по- садку стеблевых эксплантатов на питательную среду и культивирование до

получения регенерантов, о тли - чающийся тем, что, с целью ускорения получения регенерантов при сохранении их генетической стабильности, культивирование осуществляют в следующей последовательности: сначала эксплантаты помещают на 20-30 ч на питательную среду следующего состава , мг/л:

МНфШз CaClo

40-60 1 ОСЫ 50

8-15 10-15 0-8000

ИУК БАП Агар Вода дистиллированнаяДо 1 л затем культивируют в течение 6- 8 сут на модифицированной питательной среде Мурасиге-Скуга, содержащей сахарозу в количестве 1000- 1500 мг/л, маннит 3000-5000 мг/л, ИУК 0,005-0,3 мг/л, БАП 2-3 мг/л, после чего переносят на модифицированную питательную среду Мурасиге- Скуга, содержащую сахарозу в коли- честве 12-20 г/л, БАП 2-3 мг/л и гибберелловую кислоту 3-6 мг/л, на которой осуществляют получение регенерантов.

Таблица 1

Таблица 2

Изобретение относится к биотехнологии и может применяться в генетической инженерии растений, а также в сельском хозяйстве при микро- клональном размножении безвирусных растений картофеля. Целью изобретения является ускорение получения ре- генерактов при сохранении их генетической стабильности. Способ предусматривает предварительное культивирование на агаризовачной среде, содержащей макроэлементы и ряд фитогормонов с последующим переносом ткани на модифицированную среду Мурасиге-Скуга для получения регенерантов 2 табл. а 8 (Л

Способ

Предлагаемый

Известные

Количест- во регене- рантов с измененными морфологически-ми признаками,%

Не обнаружено5О-60