Способ диагностики аллергии Советский патент 1991 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии, и может быть использовано для выявления причинно-значимых аллергенов у больных с аллергическими заболеваниями.

Целью изобретения является повышение точности и ускорение диагностики.

Способ осуществляют следующим образом,

Выявление активности глюкозо-6-фос- фат-дегидрогеназы в полиморфно-ядерных лейкоцитах проводят по методу Altman P.P. (1972).

В ячейки планшета для иммунологических реакций вносят по 0.02 мл растворов аллергенов, разведенных до 10 в 199 ере- де на растворе Хенкса (используются коммерческие серии аллергенов, содержащие 10000 pNU/мл). В другую ячейку планшета вносят 0,02 мл 199 среды на растворе Хенкса. Затем в эти ячейки вносят по 0,04 мл гепаринизированной крови (гепарин из расчета 10 ед/мл) и проводят инкубацию в течение 20-30 мин при 37°С. После инкубации делают мазки крови на предметных стеклах и высушивают. Затем готовят инкубационную смесь для выявления активности глюко- зо-6-фосфат-дегидрогеназы, для чего в химический стаканчик последовательно вносят:

Вода дистиллированная, мл3,0

D-глюкозо-б-фосфат-натриевая

соль, М.м 358,2 (Serva), мг44,0

-Никотинамид эдениндинуклеотидфосфат натриевая соль

М.м 801,4 (Serva). мг57,5

0,2 М раствор трис-HCI буфер.

рН 7,60,мл12,5

Натрия цианид, мг14.0

Декстран, М м. 500000

( Pharmacia Sweden), г3.0

0,15%-ный раствор ТНСТ

(тетранитросиний тетразолий)

М.м. 907,7 (Serva). мл4.15

1 %-ный раствор ФМС

(феназинметасульфат)

Ё

О 00

о

00 00

М м - 30h 3) мл051

Вода дистиллированная до общего обнемл, мл25,0

На предметное стекло с сухим нефиксированным мазком кропи наносят 1,0 1,5 мл приготовленной ex temporae инкубацией ной среды и помещают в термостат на 20 мин при t - 37°С Затем стекла промывают в дистиллированной воде фиксируют мазок 2 3 мин в 10%-ном забуференном формалине и повторно промывают дистиллированной водой Стгкла высушивают Ядра клеток докрашивают 3 мин 0.1% ным раствором нейтрального красною на 0.1 М ацетатном буфере рН - 5 0 Промывают высушивают, микроскопируют

Высчитывают средний цитохимический коэффициент (СЦК). условно принимая интенсивность образования гранул диформа- тана п неигрофилах за слабо положительную 1 положительную 2 резко положительную 3

СЦК -nx1-tnx2 t n x 3 100

(де KI значение СЦК исходное,

К значение СЦК после инкубации крови с аллергеном

Диагностически значимым считается

прирост активности фермента на 40% от исходного и больше.

Способ подтверждается следующими примерами.

Пример. Больная Л., 11 лет Диагноз: астматический бронхит, атопический (сенсибилизация к пыли), легкое течение, внеприступный период Сопутствующий диагноз аллергический ринит Пищевая ял5 лергия (сенсибилизация к группе облигат- ных аллергенов)

Из анамнеза известно, что у ребенка с отягощенной агонической наследственностью первые проявления пищевой аллергии 1аблюдались с 2-месячного возраста в виде себоррейной экземы, которая в дальнейшем трансформировалась в нейродермит Обострение кожных проявлений отмечалось при употреблении в пищу цитрусовых, шоколада, фруктовых соков, яиц, рыбы.

Изобретение относится к медицине, а именно аллергологии, и может быть использовано для выявления причинно-значимых аллергенов у больных с аллергическими заболеваниями. Целью изобретения является повышение точности и ускорение диагностики. По методу Airman P.P. (1972) определяют активность глюкозо-6-фос- фат-дегидрогеназы до и после инкубации крови с аллергеном в концентрации 100- 10 pNU/мл в течение 20-40 мин. При увеличении активности фермента на 40% от исходного и более диагностируют аллергию к исследуемому аллергену

|де СЦК средний цитохимический коэффициент

п количество нейтрофилов с данной степенью интенсивности образования гра мул,

1, 3 степень интенсивности образования гранул,

100 количество просмотренных в мазке клеток

О приросте активности фермента судят по разнице значений СЦК после инкубации с аллергеном и исходной активноеги фер- мента, выраженной R процентах по огноше нию к исходной

Прирост активности фермента.%

( К2 -Ki )ч 100 Ki

Домашняя пыль сории257 То же серии 2R1 То же серии 236 Гыба (треска) Яйцо ( куриное цельное) Мо/юко

1ыльца береты Тест контрольная жидкос По данным обе гедонанич оыясленл ген сибилизация к спедующпм аллерн нам до

машнрй пьыи герип

тс,

яйцам что подтверждено кожными склрифика ЦИОННЫМИ ПР И Т ,1 Д1НМК1ГЧ1 гГ ЛРрГ Н.Ч

ми

С 7 лет отмечалась заложенность носа с периодическими приступами многократного чихания. С 9 лет появились явления брон- хиальной обструкции впервые после работы в школьной библиотеке, которые купировались эуфиллином солутаном С 11 лет типичные приступы затрудненного дыхания

i

Проведено обследование согласно предлагаемому способу

Получены следующие результаты: исходная активность глюкозо-6-фосфат-де- гидрогеназы СЦК- 2.14

1 Активность фермента после стимуляции аллергенами

СЦК% прироста активности

3,5867.2

3,3255,1

3,2155,0

23710,7

2 297.0

Пример 2. Больная Л 7 лет Диагноз, бронхиальная астма типичная.атоническая (сенсибилизация к домашней пыли), средне- тяжелое течение Внеприступный период

Из анамнеза известно, что у ребенка с отягощенной атонической наследственно

глью впервые явления бронхиальной об глрукции появились R возрасте 1 года на фоне ОРВИ Типичные приступы удушья стали возникать с 1,5 лет на фоне полною благополучия дома во время игры г. игрушками, часто в ночное время, Приступы возникают с предвестников в виде чуда слизистой носа, чихания После проведения двух курсов специфической гипосенсибили

Домашняя пыль серии 257 То же, серии 261 То же, серии 236 Тест-контрольная жидкость

По данным обследования выявлена сенсибилизация к следующим аллергенам до- ,машней пыли серии 257 и домашней пыли серии 261, что подтверждено кожными скл- рификационными пробами с данными аллергенами.

Пример 3. Больной Я , 13 лет. Диагноз: поллиноз, риноконьюнктивальный синдром. Из анамнеза известно, что у мальчика

Мятлик Тимофеевка Овсяница Береза

По данным обследования выявлена сенсибилизация к аллергенам пыльцы мятлика, тимофеевки, овсяницы ; не выявлена сенсибилизация к аллергену пыльцы березы что подтверждено кожными скарификаци- онными пробами с данными аллергенами. Формула изобретения Способ диагностики аллергии по изменению цитохимических характеристик

з.чции с аллергенами домашней пыпи огме ллся положительный эффект

Было проведено обследование Пол,и ны следующие результаты, исходная лмин ность глюкозо-б-фосфат-дегидроген.элы С ЦК 1,21. активность фермента после сти муляции аллергенами

10

СЦК% прироста активности 2 2787,6

2,0972,7

с 9 лет в летние месяцы, начиная с июня, : отмечаются риниты, конъюнктивиты. В лесу, за городом - ухудшение, на одуванчик отмечался отек Квинке.

Проведено обследование согласно способу,

Получены следующие результаты, исходная активность глюкозо-6-фосфл г-дс- гидрогеназы - СЦК 1,16, после стимуляции аллергенами пыльцы:

% прироста активности 112 124 150,8 28,4

нейтрофилов крови в присутствии аллергена, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и ускорения диагностики, определяют активность глюкозо-6- фосфат-дегидрогеназы до и после инкубации крови с аллергеном, и при увеличении активности фермента на 40% от исходного и более диагностируют аллергию к исследуемому аллергену