Способ определения функциональной активности клеток крови доноров Советский патент 1991 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к медицине, в час- к клинической иммунологии и трансфу- зионной терапии, и может быть использовано при переливании крови больным.

Цель изобретения упрощение и повышение точности способа за счет расширения спектра оценки функций клеток.

Способ осуществляется следующим образом.

Из 10-15 мл гепаринизированной венозной крови человека получают суспензию лимфоцитов методом центрифугирования в градиенте плотности фиколл-гипака. Концентрацию лимфоцитов доводят до 2 -106 клеток в 1 мл среды 199 и по 0,2 мл разливают в четыре пробирки, после чего проводят инкубирование при 37° С в течение 40 мин. При этом в первой (контрольной) пробирке содержатся интактные лимфоциты, во вторую пробирку перед инкубированием добавляют 0,2 мл М раствора гидрохлорида адреналина, в третью пробирку - 0,2 мл 10 М раствора креатининсульфата серотонина,в четвертую - 0,2 мл 10 М раствора гидрохлорида гистамина. После инкубации все четыре пробы подвергают центрифугированию, из осадков готовят мазки, последние фиксируют реактивом Севки (12 мл 40%-ного раствора формалина, 50 мл 5%-ного раствора двухро- мовокислого калия, 20 мл 1 М раствора уксуснокислого натрия, до 100 мл дистиллированной воды) в течение 16-18 ч. Фиксированные мазки 1,5 ч отмывают в дистиллированной воде, .затем 30 мин окрашивают по методу Романовского. В готовых мазках определяют раздельным подсчетом процентное содержание (по отношению к общему количеству лимфоид- ных клеток) БГЛ, имеющих гранулы фиолетового цвета - адреналинсодержащие. оранжевого цвета - серотонинсодержащие, красного цвета - гистаминсодержащие. По результатам определения рассчитывают СКА

СКА Кадр + Keep Кгист.

ь

Ь

о

CTJ

JO (А) О

где К - коэффициент, характеризующий количественное соотношение БГЛ для каждого способа инкубирования в присутствии тестируемых биогенных аминов. В свою очередь

с 4-с -г +а -г

К

а

а с +сг +а г где а - процент БГЛ, несущих гранулы адреналина; с - процент БГЛ, несущих гранулы серотонина; г - процент БГЛ, несущих гранулы гистамина. В числителе - результаты определения для лимфоцитов, инкубированных с одним из биогенных аминов; в знаменателе - показатели для интактных лимфоцитов. Значения СКА в интервале от 2,1 до 3,6 говорят о пребывании натуральных киллеров в состоянии функциональной активности. СКА 2,0 расценивается как показатель насыщения гранулярного аппарата натуральных киллеров у данного субьекта биогенными аминами, а СКА 3,7 свидетельствует об истощении аминосодержащих гранул.

Пример. Проведено исследование функциональной активности больших гранулярных лимфоцитов в крови 43 доноров в процессе консервации, у 60% проб исходная функциональная активность, выраженная в значениях СКА, находилась в интервале от 2,1 до 3,6. Исследования повторяли каждые 3 дн. Было показано, что в течение 6 дн. от момента забора крови СКА находятся в этом же интервале, а после 6 дн. консервации принимал значения выше 3,6 или ниже 2,1. В эти же сроки начинал статистически достоверно снижаться и процент жизнеспособных клеток с 87±2,3 до 75±1,9%, определяемый в пробе с трипановым синим.

В 24% проб исходная функциональная активность выражалась в величинах СКА больше 3,6, а в 16% - меньше 2,1. В этих пробах исходный процент жизнеспособных

клеток статистически достоверно был ниже (79±2,1%) и начинал снижаться после 3 дн. консервации.

Таким образом, суммарный коэффициент аминосодержания, отражающий функциональную активность больших гранулярных лимфоцитов, может служить критерием при контроле клеток крови доноров в процессе консервации и при значениях от 2,1 до 3,6 показывает пригодность крови к трансфузии.

Фомула изобретения Способ определения функциональной активности клеток крови доноров путем исследования больших гранулярных лимфоцитов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности за счет расширения изучения спектра функций клеток и упрощения способа, лимфоциты инкубируют параллельно в средах, содержащие адреналин, серотонин, гистамин и не содержащие их, в течение 40 мин при 37РС, далее пробы центрифугируют, из каждого осадка готовят мазок, обрабатывают по методу Севки,

определяют в каждом количество больших гранулярных лимфоцитов, содержащих адреналин, серотонин и гистамин, вычисляют процент клеток, содержащих моноамины во всех исследованных мазках, рассчитывают

суммарный коэффициент аминосодержания и при его значении от 2,1 до 3,6 определяют клетки функционально активными.

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии и переливанию крови. и может быть использовано для оценки функциональной активности больших гранулярных лимфоцитов (5 гл). Целью изобретения является повышение точности способа Способ заключается в определении суммарного коэффициента аминосодержания (СКА) больших гранулярных лимфоцитов цитохимическими методами и.если величина СКА находится в интервале от 2,1 до 3 6, БГЛ считают функционально активными, а кровь донора пригодной для трансфузии