Способ диагностики функциональных заболеваний толстой кишки с нарушением вегетативной нервной системы Советский патент 1993 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности, к клинической иммунологии в проктологии.

Целью изобретения является повышение точности дифференциальной диагностики, сокращение времени инкубирования.

Способ осуществляется следующим образом.

В пробирку с соответствующим разведением гепарина берут 2,5-3 мл крови из локтевой вены, разводят средой 199, наслаивают на раствор фиколл-верографин или фиколл-урографии и центрифугируют при режиме 400 д в течение 40 минут в горизонтальном роторе. Выделяют лимфоциты, подсчитывают и доводят до оптимальной концентрации взвеси клеток - 2 106 в 0,1 мл среды 199. В центрифужную пробирку помещают 0,1 мл суспензии клеток и 0,1 мл раствора адреналина вереде 199. Инкубируют при 37°С в течение 10 мин. Параллельно ставят контрольный опыт, где вместо раствора адреналина к клеткам добавляют 0,1 мл среды 199. Затем ставят реакцию Е-розеткообразования: к 0,1 мл суспензии клеток приливают 0,1 мл 0,5%-ой взвеси эритроцитов барана в среде 199. Перемешивают встряхиванием, инкубируют 10 минут в термостате при 37°С, центрифугируют при 200 д в течение 5 мин, после чего инкубируют при +10°С в течение 60 мин. По истечении инкубации клетки фиксируют глутаральдегидбм и после отмывания готовят мазки. Мазки фиксируют в метаноле и красят по Романовскому-Гимза. Число Е- РОК вычисляют подсчетом 200-300 лимфоцитов в препарате. Эффект препарата

1/ П

определяют по формуле: 100%, где

00

о ю

GJ

00

К - число Е-РОК в контрольной пробе, П - число Е-РОК в опыте.

П р и м е р 1. В пробирки с гепарином взяли 2,5-3 мл крови из локтевой вены 61 здоровых и больных лиц. Взятую кровь развели средой 199 в соотношении 1:1 и наслаивали на 2,5-3 мл смеси фиколуротраст - плотность раствора 1,077 г/мл. Центрифугировали 40 минут при 400 д в центрифуге с горизонтальным ротором. Сняли белое кольцо (выделенную взвесь лимфоцитов) в чистую пробирку, отмыли средой 199 два раза в течение 15 минут при 400 д и произвели подсчет лимфоцитов в 1 мл. К 0,1 мл взвеси лимфоцитов прибавили ЮМ адреналина в 0,1 мл среды 199. Инкубировали при 37°С в течение 12 мин, центрифугировали 15 мин при 400 д и с осадком поставили реакцию Е-розеткообразования. Параллельно поставили контрольный опыт, где вместо раствора адреналина к клеткам добавили 0,1 мл среды 199. Реакция Е-розеткообразования: к 0,1 мл суспензии лимфоцитов прибавили 0,1 мл 0,5%-ой взвеси эритроцитов барана. Смесь выдержали в термостате при 37°С 10 мин, центрифугировали в течение 5 мин при 200 д и инкубировали при +Ю°С в течение 60 мин, Затем фиксировали клетки глутаральдегидом и после отмывания готовили мазки. Мазки фиксировали в метаноле и красили по Романовскому-Гимза. Число Е-РОК вычисляли подсчетом 200-300 лимфоцитов в препарате. Эффект препарата определяли по К-П

формуле:

v3

П

100%. При дозе адреналина ЮМ наблюдалось достоверное уменьшение числа Е-РОК у 28 больных синдромом раздраженной толстой кишки 45%- 33%, не изменялось 24 больных неспецифическим язвенным колитом 46%- 46%, иу9 практически здоровых лиц-53%- 53%.

П р и м е р 2. Повторно провели вышеописанный опыт при концентрации адреналина . Полученные результаты идентичны примеру 1..

Примерз. Повторно провели вышеописанный опыт, но при дозе адреналина . При этой дозе адреналин не влиял на число Е-РОК ни у больных синдромом раздраженной толстой кишки 45%-47%, ни у больных неспецифическим язвенным колитом 46%-44%, ни у практически здоровых лиц53%-57%.

П р и м е р 4. Повторно провели вышеописанный опыт, но при концентрации адреналина . Число Е-РОК у больных синдромом раздраженной толстой кишки уменьшалось статистически недостоверно 45%-38%, у больных неспецифическим язвенным колитом не изменялось 46%-41%,

не изменялось и у здоровых лиц 53%-49%. П р и м е р 5. Опыт произведен также, как и в примере 2 с той лишь разницей, что инкубирование проводили в течение 5 минут. При этом времени инкубирования препарат не оказывал действия ни у больных неспецифическим язвенным колитом, ни у больных синдромом раздраженной толстой кишки, ни у здоровых лиц.

П р и м е р 6. Опыт произведен также,

как и в примере 1, с той лишь разницей, что инкубирование проводили в течение 25-30 минут. Имели результат, подобный опыту № 1, что свидетельствует о нецелесообразности проведения инкубирования более 15

мин.

Использование настоящего предложения в сравнении с базовым объектом позволит повысить точность дифференциальной диагностики за счет нового критерия иммунологического характера и сократить время диагностирования за счет сокращения срока инкубирования.

35

Формула изобретения

Способ диагностики функциональных заболеваний толстой кишки с нарушением вегетативной нервной системы, включающий инкубирование лимфоцитов с адренергическим препаратом и добавление эритроцитов барана с последующей оценкой розеткообразующей способности клеток, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и сокращения времени

диагностики, в качестве адренергического препарата используют адреналин в концентрации 10 3М-10 4М, инкубирование осуществляют в течение 10-15 мин и при снижении розеткообразующей способности

Т-лимфоцитов более чем на 20% диагностируют функциональное заболевание толстой кишки с нарушением вегетативной нервной системы.

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической иммунологии и проктологии. Целью изобретения является повышение точности дифференциальной диагностики, сокращение времени инкубирования. Поставленная цель достигается тем, что в известном способе дифференциальной диагностики функциональных заболеваний с нарушением вегетативной нервной системы и воспалительных заболеваний толстой кишки, включающем двух- этапное инкубирование лимфоцитов с адренергическим препаратом и добавление эритроцитов барана, с последующей оценкой розеткообразующей способности используют адреналин при концентрации 10 М-10 М, который инкубируют с лимфоцитами в течение 10-15 мин и при снижении розеткообразующей способности Т-лимфо- цитов более чем на 20% диагностируют функциональное заболевание толстой кишки с вегетативными нарушениями нервной системы. ел С