Штамм гриба FUSаRIUм oxY SроRUм (SснLеснт) SNYD.ет наNS.VaR.оRтносеRаS (арр ет W @ ) В @ @ , используемый для оценки сои на устойчивость к фузариозу Советский патент 1991 года по МПК A01N63/04 C12N1/14 

1

(21)4666886/13 (22)27.03.89 (46)30.10.91. Бюл. №40

(71)Институт экологической генетики АН МССР

(72)Л. С. Корецкая, Ж. Г. Простакова и А. И, Бронштейн

(53)63.576.8(088.8)

(56) Простакова Ж. Г. и др. Патогенная микрофлора сои. Кишинев, 1986, с. 11-19, 57.

Методика оценок устойчивости сои к болезням и вредителям (Методические рекомендации СГИ) /Под ред. Бабаянц Л. Г., Одесса, 1985, с. 30.

(54)ШТАММ ГРИБА FUSARIUM OXYSPORUM (SCHLECHT) SNYD. ET HANS VAR.ORTHOCERAS(APP. ET.WR)BILAI, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ОЦЕНКИ СОИ НА УСТОЙЧИВОСТЬ К ФУЗАРИОЗУ

(57) Изобретение относится к сельскому хозяйству и представляет собой новый штамм гриба Fusarium oxysporum, используемый для создания искусственного фона при оценке сои на устойчивость к фузариозу. Целью изобретения является получение нового штамма гриба, обладающего более высокой вирулентностью по отношению к сое. Штамм гриба Fusarium oxysporum (schlecht) snyd. et Hans var. orthoceras (app. et. nr) Bllal 693-4 выделен из растений сои, пораженных фузариозом, идентифицирован по сис- еме Билай В. И., депонирован в коллекции ВНИИСХМ под № 36. В полевых условиях при заражении устойчивой линии сои ВИР- К-8845 через почву вирулентность штамма Fusarium oxysporum N 693-4 (ВНИИСХМ 36 превышала вирулентность природного изолята 693 на 12,6%. 4 табл.

Ё

Изобретение относится к сельскому хозяйству и представляет собой новый штамм гриба Fusarium oxysporum (schlecht) snyd. et. Hans. var. orthoceras (app. et. Wr) Bllal, используемый для создания искусственного инфекционного фона при оценке сои на устойчивость к фузариозу.

Цель изобретения - получение нового штамма, обладающего более высокой вирулентностью по отношению к сое.

Штамм гриба Fusarium oxysporum (schlecht) snyd. et. Hans var. orthoceras {app. et. Wr) Bllal 693-4 выделен из растений сои, пораженных фузариозом, идентифицирован по системе Билай ВЦ, депонирован в коллекции Всесоюзного научно-исследовательского института сельскохозяйственной микробиологии под № 36.

Культурально-морфологические и физи- олого-биохимические признаки штамма.

Хорошо растет на сусло-агаре, карто- фельно-декстрозном агаре, на стерилизованных отходах овса, пшеницы и на жидкой среде Чапека при поверхностном и глубинном культивировании.

При культивировании штамма на сусло- агаре при 22-25°С в течение 7 сут образуются колонии размером 7,0-7.3 см, круглые с ровными краями, мицелий паутинистый, плотный, обратная сторона лилово-карминовая. Макроконидии отсутствуют на 15-й день культивирования, микроконидии одноклеточные, обильные образуются в воздушном мицелии (7,0±0,04 мкм), хламидоспоры промежуточные и верхушечные, гладкие, неокрашенные.

О 00

sj

ю ел

На картофельно-декстрозном агаре при выращивании в тех же условиях колонии размером 6,8-7,2 см, круглые, край ровный, невысокие, слабопушистые, поверхность темно-лилового цвета с карминовым оттен- ком, обратная сторона темно-лиловая.

Спорообразующий, макроконидии отсутствуют, микроконидии одноклеточные, обильные, образуются в воздушном мицелии (6,8+0,02 мкм), хламидоспоры промежу- точные и верхушечные, гладкие, неокрашенные.

На твердой среде Чапека колонии размером 5,0-6,1 круглые, невысокие, неровные, пленчатые, слабопушистые, с возрастом уплотняющиеся от белого до слаборозового цвета, обратная сторона белая или желтоватая.

Спорообразующий, макроконидии отсутствуют, микроконидии одноклеточные, обильные, образуются в воздушном мицелии (7,6+0,03 мкм), хламидоспоры промежу- точные и верхушечные, гладкие, неокрашенные.

Штамм растет при 4-37,5°С, оптималь- ная температура роста 22-25°С, рН среды 5,4-8,2, оптимальное значение рН среды 6,0-6,2.

Отношение к источникам углерода: усваивает сахарозу и крахмал. Отношение к источникам азота: усваивает МаМОз, КМОз, казеин, соевый белок, альбумин.

Штамм не имеет маркерных признаков. Обладает способностью к биосинтезу фуза- риевой кислоты, ее содержание в культу- ральной жидкости 14-дневной культуры 40,8-53,5 мкг/мл (при выращивании в стационарных условиях на жидкой среде Чапека при 22-25°С).

Активность протеолитических ферментов при использовании в качестве субстрата казеина - 0,590 усл. единиц, при использовании М2-бензоил-0,-аргинин-п-нитроани- лида -0,140 усл.ед.

Признаки штамма устойчивы. Штамм хранят на сусло-агаре под вазелиновым маслом при 4°С 3-6 мес, затем пересевают.

Штамм гриба Fusarlum oxysporum (schlecht) Snyd. et. Hans var. ortoceras (App. et. Wr) Bilai 693-4 отобран из 451 изолятов, выделенных из больных растений сои на стадии всходов и в фазе цветения в различных экологических зонах Молдавии.

Этими изолятами проведено искусст- венное заражение изолированных корней сои устойчивой линии К-8409 и восприимчивого сорта Букурия по модифицированному методу Kendall, Leath 1984, Выделенные изоляты гриба выращивают на чашках Петри на твердой среде сусло-агар в течение 2

нед. при 25°С. Для заражения отдельных корней, помещенных в чашках Петри, используют диски мицелия, вырезанные сверлом диаметром 1,5 мм.

Для искусственного заражения сои используют корни 5-дневных растений, выращенных в простерилизованном песке при увлажнении до 60% или в рулонах увлажненной фильтровальной бумаги при 25°С из семян, предварительно простерилизован- ных в течение 2 мин последовательно 96%- ным этиловым спиртом и водным раствором КМп04.

Результаты, полученные при инфицировании корней сои восприимчивого сорта и устойчивой линии сои, представлены в табл. 1 и2.

Из полученных данных следует, что наибольшую длину гниения корня при контакте с культурой гриба (без нанесения повреждений) восприимчивого сорта Букурия и устойчивой линии К-8409 вызывает штамм F. oxysporum var. orthoceras № 693, превышающий по патогенности все выделенные и исследованные изоляты (табл. 1).

Пример использования штамма для полевого инфекционного фона.

Рассевают хранящиеся культуры на жидкую среду Чапека, выращивают 5 дн. на качалкеили Юдн. в стационарных условиях. Увлажненный субстрат (отходы пшеницы, овса - 1 ч. воды на 2,5 ч. субстрата) стерилизуют при 1 атм., 1 ч. Заражение субстрата проводят жидкой средой, содержащей 10000 спор/1 мл культуральной жидкости. Выращивают при комнатных условиях (18- 25°С) в течение 15 дн.

Пример использования штамма для оценки сои на устойчйвост1 ь к фузариозу.

Полученный описанным способом ино- кулюм вносят в почву при посеве семян из расчета 100 г инфекционного материала на 1м2.

Оценку поражэемости сортов сои проводят по поражению корневой системы при раскапывании 10 растений из каждого ряда и оценки поражаемости по площади поражения данного органа:

0- растения здоровые, без признаков заболевания;

1- поражение очень слабое, наблюдаются отдельные мелкие точечные пятна, занимающие не более 10% поверхности органов растения;

2- поражение слабое - 11-25% повер-1 хности;

3- поражение среднее - 26-50%;

4- сильное поражение (свыше 50%, но не более 75%), растения сильно угнетены;

5 - очень сильное поражение (свыше 75%), наблюдается гибель растений.

Для диагностики резистентности набора сортов использовали шкалу (табл. 3), где развитие (индекс болезни), в котором число (%) больных растений и степень (балл) поражения, вычислялось по формуле

,

где R - развитие болезни;

- сумма произведений числа растений с одинаковыми признаками поражения на соответствующий им балл поражения;

п - общее число растений;

К - высший балл шкалы учета.

Набор из 12 исследованных сортов сои и гибридов распределялся по группам устойчивости следующим образом:

средневосприимчивые - Prldesay, Приморская 529, гибрид 676, Nair-2;

восприимчивые - Скычтея, Хабаров- ская-53 х Adepta, Чайка х Adepta, Аурика, Mapl Presto;

сильновосприимчивые - Кишиневская- 16, Букурия, Бельцкая-82 (табл. 4),

В полевых условиях при заражении через почву показатели патогенности на 12,6% превышали показатели, полученные при заражении природным изолятом.

Характеристика выделенных природных изолятов F,oxysporum var.orthoceras по способности к- поражению корней сои при

искусственном заражении

(У - устойчивая линия; В - восприимчивый сорт

Так как оценка поражаемости проводится по максимальному индексу развития болезни, более высокий уровень патогенности возбудителя позволяет более четко дифференцировать устойчивооть сорта и проводить индивидуальный отбор линий - источников устойчивости к фузариозным корневым гнилям. При этом определяется,что Хабаровская-53 х Adepta, Чайка х

Adepta являются восприимчивыми, а не средн-ьвосприимчивыми, Prldesoy Приморская 520 - соедневосприимчипыми, а не ус- тойчивыми, что имеет место при использовании прототипа. Сорта и гибриды

со стабильным уровнем реакции по тверж- даютсвою характеристику. Поэтому использование для создания инфекционного фона штамма № 693-4 обеспечивает более четкую иммунологическую характеристику, т.е. достигается ускорение селекционного процесса с меньшими затратами труда, полевыми площадями и инфекционной нагрузкой на природную среду.

Формула изобретения

Штамм гриба Fusarium oxysporum (s chlecht) snyd. et Hans var. orthoceras (app et Wr) Bllai, ВНИИСХМ N 36. используемый для оценки сои на устойчивость к фузарио- зу.

Таблица)

1687195-8

Таблица 2

Определение патогенности моноспоровых клонов изолята 693 по результатам искусственного заражения корней сои

ТаблицаЗ .

Шкала для диагностики устойчивости образцов сои к фуэариозу

Поражение проростков сои при искусственном заражении через почву штаммов 693-Н по сравнению с исходным известным

штаммом

Скынтея61,8

Кишиневская-1650,0

Букурия86,0 Хабаровская-53 х

Adept 34 °

Чайка х Adept 40,0

Pridesoy20,0

Приморская 52920,0

Бельцкая-8267,0

Аурика65 4

Mapl Presto52,0

Гибрид 67047,5

Noir-228,0

Примечание

Таблица

7,4

30,0

5,9

24,9 21,0 8,3 8,3 18,3 2,4 . 10,7

1,0 13,2

: среднее значение превышения 12,6%.