Штамм 124-р, предназначенный для производства энтомопатогенного препарата боверина Советский патент 1980 года по МПК C12K1/06 

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и может быть использовано при наработке микробиологических средств защиты растений. Для получения энтомопатогенного пр парата боверина в настоящее время используют штамм 113Н-278 i . Однако такой штамм облацает высокой продуктивностью и вирулентностью только при культивировании в питательных средах, содержащих дорогостоящее дефицитное сырье-пептон и сахарозу. При замене же пептона и сахарозы на дешевое промышлоггаое сырье - молочну сыворотку, кукурузный экстракт, дрожж казеин и другие, культура вследствие низкой физиологической активности исп зует все компоненты среды и вместо конйциоспор формирует гонидии и бласт споры, быстро теряющие свою активнос Продуктивность штамма в глубинных условиях на регламентной среде составляет всего 300 млн спор на 1 м культуральной жидкости, выхоц составляет 4 г с 1 л культуральной жидкости и вирулентность в LK - 0,02-0,002Г,. Длительность культивирования при оптимальной температуре 27 С составляет 72 час. Целью изобретения является пол5чение щтамма B-bassiano отвечающего требованиям производства и обладающего более высокой физиологической активностью, продуктивностью, вирулентностью, а также более коротким циклом развития. Штамм имеет следующие характеристики. Морфологические признаки На агаризованной среде Сабуро образует колонии круглые, плоские, прижатые к субстрату, с валиком на краю, без вторичного роста и коремий. Конидиальный слой меловой консистенпии. Пигментация конидиального слоя кремового , пигментация субстрата рыжеватая. Лиаметр 7-аневных кологгий 10,1 i 0,08 мм.

Л1Ю.. поверхностных коиициоспор 3,2 ±0,01 мкм.

На агаризованной среде Чапека колонии круглые с размытыми краями. Конидиальный слой морщинистый в центре. Нижняя часть колонии имеет радиальную складчатость, riifT мен та ПИЯ конициального слоя от меловато-белой до пепельно - серой окраски,На среде сусло-агар образует плоские колонии круглой формы с валиком по кра и выпуклой средней частью. Нижняя част колонии рыжеватая. Конидиальный слой бело-кремового цвета. ,

В глубинных условиях в питательной среде, содержащей, %: сахар или сухую молочную сыворотку 1,0 , ЫоЫ O-i 0,9, МдгбО 0,075, - 0,225, CaClg, -1,25, конидиоспоры прора.стают одной или двумя ростковыми трубками. Основная масса спор прорастает через 12 час, В течение 36-48 час интенсивно развивается мицелий, отщепляются гонид и и вторично/ прорастают Одновременно на мицелий формируются конидиеносцы бутылевндной формы с расширенным основанием. Конидиоспоры расположены на конидиеносиах базипетально на коротких стеригмах. Заверщение спорообразования и лизис мицелия наступает через 62 час. Диаметр глубинных конидиоспор 3-5 мкм.

Физиологические признаки. Отношение к углеводам. Хорошо усваивает сахарозу, глюкозу, лактозу, мальтозу, арабинозу, рамнозу, фруктозу. Слабо развивается на ксилозе. Не усваивает целлюлозу. Крахмал интенсивно гидролизует.

Отношение к источникам азота. Хорошо усваивает альбумин, казеин. Интенсивно развивается на пептоне. Свободные аминокислоты стимулируют конидие образование в концентрации 15,мг % в среде. При концентрации от 20 до

50 мг% конидиеобразованяе нарушается, образуются гонидии и бластоспоры. Хорошо усваивает аммонийный азот.

(,(,NH4)HPO ,«ИдН,,

и нитраты (NQMOg).

Отношение к органическим кислотам. Усваивает пировиноградную, уксусную, щавелевую кислоты. Не усваивает янтарHyifj кислоту.

Отношение к спиртам. Усваивает маннит, дульцит, сорбит, глицерин. Слабо развивается на ксилите. Не усваивает этанол, изопропанол, н-бутанол, Оптимальная температура культивирования 25-27 С. Интенсивность аэрации О,5-1,О г 0 /п/час,

Предлагаемый штамм получен методом селекиии на основе моноспорового рассева культуры /B.bQssiQna после пассажа черезколорадского жука. Исходный щтамм был получен из Института биологии АН Латвийской ССР, Поскольку исходный штамм в глубинных условиях формировал только го 1идии и бластоспоры, . изучение основных свойств нового штамма проводят в сравнении со штаммом-прототртом 113Н-278, который используется в настоящее время в микробиологической промышленности для получения глубинных конициоспор.

В таблице приведены данные продуктивности и вирулентности предлагаемого и известного штаммов в жидких питательных средах - в регламентной Череда № 1, с сахаром), и в среде, содержащей вместо сахара молочную сыворотку (среда № 2).

Как видно из данных таблицы, предлагаемый штамм превышает известный по выходу биомассы и титру конидиоспор в 1,5-2,0 раза, а по вирулентности в 1О раз. При этом форчтирование спор у предлагаемого штамма проходит в более 5 короткий срок (на 10 часов быстрее).

72 0,29±0,037 113Н-278 72 0,3910,120 Р-- Q-05 3,9 0,О0500 4.3 0,00210 Формула изо.бретенн Штамм bassSuna ( ЬоЫ Vn , предназначенный для произпоцст энтомопатогенного препарата бовернна. Хранится в коллекции Всесоюзного на учно-исследовательского института микр биологических средств защиты растений и бактериальных препаратов. Морфологические признаки На агариэованной среде Сабуро образует колонии круглые, плоские, прижатые к субстрату, с валиком па краю, без вторичного роста и коремий. Кониднальный слой меловой консистериши. Пигмеитация конидиального слоя кремового цвета, пигментация субстрата рыжеватая. Диаметр 7-дневных колоний 10,ЦО,08 м Диаметр поверхностных конидиоспор 3,2i 0,01 мкм. На агаризованной среде Чапека колонии круглые с размытыми краями. Конидиальный слой морштиютый, к центре. Нижняя часть колонии имеет радиальную складчатость. Пигментация конидиальнего слоя от меловато-белой до пепельно-серой окраски. .На среде сусло-агар образует плоские колонии круглой формы с валиком по кра и выпуклой средней частью. Нижняя част колонии рыжеватая. Конициальный слой бело-кремового цвета. В глубинных условиях в питательной среде, содержащей сахар или молочную сы воротку 1,0%, NaHOj О, . 0,07 ТУ 1Л о о /- iН Г) г-п/ 0,225%, CaCt/, 1,25%, конидиоспоры прорастают одной или двумя ростковыми трубками. Основная масса спор прорастает через 12 час. В течение 36-48 час интенсивно развивается мицелий, опдепляются гонидии , и вторично прорастают. Одновременно на мицелии формируются конидиеносш бутылевианой формы с расширенным основанием. Конидиоспоры расположотгы на конидиеносцах базипетально на коротких стеригмах. Завершение спорообразования и лизис мицелия наступает через 62 час. Диаметр глубинных конициоспор 3-5 мкм. Физиологические признаки Отношение к углеводам. Хорошо усваивает сахарозу, глюкозу, лактозу, мальтозу, арабинозу, рамнозу, фоуктозу. Крахмал интенсивно гидролизует. Слабо развивается на ксилозе. Не усваивает Оеллюлозу. Отношение к источникам азота. Хорошо ycBaHBieT альбумин, казеин. Интенсивно развивается на пептоне. Свободные аминокислоты стимулируют конидиеобразование в концентрации 15 мг% в среде. При концентрации от 20 до 50 мг% конидиеобразование нарушается, образуются гонидии и бластоспоры. Хорошо усваивает аммонийный азот и нитраты. Отношение к органическим кислотам. Усваивает пировиноградн ю, уксусную, щавелевую кгслоты. Не усваивает янтарную кислоту. Отношение к спиртам. Усваивает манит, дульцит, сорбит, глицертг. Слабо разви ется на ксилите. Не усваивает этанол, изопропанол, н-бутанол. Оптимальная температура культивиования 25-27 С. Интенсивность аэраии 0,5-1,0 г Ол/л/час. Источники информациии , принятые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР 507645, кл. С 12 К 1/06, 1975 (прототип).