Способ проведения реакции титрования Советский патент 1991 года по МПК G01N31/16 

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано в лабораторной практике.

Целью изобретения является упрощение способа.

Способ характеризуется тем, что один из компонентов реакции отделяют от другого с помощью полупроницаемой мембраны, а оценку результатов проводят по смещению границы окраски прореагировавших веществ.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

П р и м е р 1. Одну часть сосуда емкостью 1 мл, отделенную от другой полупроницаемой мембраной, заполняют разбавленным в 10 раз раствором для фиксирования кинофотоматериалов для определения в нем тиосульфата натрия, а другую часть сосуда с внутренним сечением 0,5 см2, вносят 0,1 н. водный раствор йода с крахмалом (индикатор).

В результате реакции граница обесцвечивания синей окраски йода продвигается на 3,2 см, т.е. объем обесцвеченного (прореагировавшего) раствора составляет 3,2 х 0,5 1,6 см , или 1,6мл, 1 мл 0,1 н. раствора йода

содержит 12,7 мг йода. Следовательно в описанной выше реакции прореагировало 20,32 мг йода.

Йод реагирует с тиосульфатом натрия по следующей схеме:

12 + N328203 2Na I + N32S406. Отсюда следует, что для связывания 20,32 мг йода требуется 25,32 мг тиосульфата натрия, т.е. в 1 л анализируемого раствора содержится 25,32 г этого вещества.

Пример 2. В одну из частей удлиненного сосуда, разделенного (полу-) проницаемой мембраной, наливают водный раствор перекиси водорода, и в другую подкисленный серной кислотой раствор перманганата калия. Молекулы перекиси водорода, проникая сквозь мембрану, вступают в реакцию с прилежащими слоями раствора перманганата калия по уравнению

2KMnOs +5H202 + 3H2S04 K2S04 + +2MnS04 + 8H20 + 502, в результате чего эти слои обесцвечиваются из-за превращения окрашенного в темно- пурпурный цвет перманганата калия в свет- лорозовый сульфат марганца. По мере истощения прилежащих слоев раствора перманганата калия, в реакцию вовлекаютЁ

О

ю XI

CJ

ся все более удаленные слои, в результате чего граница окраски, обусловленной пср- манганатом калия, все дальше отодвигается от мембраны. Этот процесс продолжается вплоть до полного исчезновения перекиси водорода, содержание которой будет точно определяться объемом обесцвеченного раствора перманганата калия. Количество оттитрованной перекиси -водорода определяют по формуле

Р- 17,01 S L Т, где Р - количество перекиси водорода, мг;

S - внутреннее сечение реакционного сосуда (та его часть, в которую налит раствор перманганата калия), см ;

L - расстояние, на которое отодвинулась граница (фронт) обесцвечивания раствора перманганата калия от мембраны, см;

Т - титр раствора перманганата калия, выраженный в нормальности (N),

При S 0,5 см2, L 2,5 см и Т 0.1N количество оттитрованной перекиси водорода составляет

Р 17,010,5 2,5 0,1 2,13мг.

П р и м е р 3. Определение активности сукцинатдегидрогеназы в грудных мышцах насекомых. Отпрепарированные грудные мышцы пчелы заключают в цилиндрическую капсулу, изготовленную из полупроницаемой мембраны (например, очень тонкого целлофана). Размещают такую капсулу точно в центре лунки предметного стекла и залипают раствором метиленового синего (МС) с сукцинатом натрия, приготовленном на фосфатном буфере (рН 7,5) так, чтобы капля -jToro раствора выступала над повер- предметного стекла, а затем обеспечивают анаэробные условия. Для этого выступающую часть капли срезают так, чтобы в заключенной между стеклами емкости с расположенным в ней исследуемым образцом в растворе МС не оказалось пузырьков воздуха. Подготовленную таким образом опытную пробу термостатируют на водяной бане, следя по секундомеру за скоростью расширения границы обесцвеченной (лейкоформа МС) зоны на общем

светлосинем (голубом) фоне и достижением ею условленной конечной границы.

Определение активности сукцинатдегидрогеназы осуществляют по формуле

5-.eo-v-Q

А-

где А - активность сукцинатдегидрогеназы, выраженная в мг МС, восстановленного 1 г ткани за 1 ч; V - обьем восстановленного

раствора МС, мм ; Q - содержание МС в 1 мм раствора, мкг; Р - масса навески ткани (мышц), мг: t - время, необходимое для достижения обесцвеченной зоны МС условной конечной границы, мин.

При V 100 мм3; 0 1,0 мкг; Р 10мги t 7,5 мин активность сукцинатдегидрогеназы в мышцах медоносных пчел составляет:

20

А 60-100-1,0 оло ..- . 10 75 80-8 мг МС на 1

ткани в 1 ч.

Таким образом, способ титрования прост в осуществлении, надежен в работе, дает воспроизводимые, корректные результаты, не требует сложной и дорогостоящей аппаратуры. По точности он практически не отличается от традиционных методов титрования, а по затратам времени на проведение серии анализов в 2,0-2,75 раз

экономичнее. При этом, по мере увеличения количества опытных проб в серии относительные затраты времени еще больше снижаются.

Формула изобретения

Способ проведения реакции титрования, включающий подготовку титрующего раствора и исследуемого образца, смешивание титрующего раствора и образца, оценку результатов по изменению окраски раствора, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, для титрования используют емкость, разделенную полупроницаемой мембраной, через которую происходит смешивание титрующего раствора с образцом, а оценку результатов проводят по смещениюграницы окраски.

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано в лабораторной практике. Целью изобретения является упрощение способа. Способ осуществляется тем, что один из компонентов реакции отделяют от другого с помощью полупроницаемой мембраны, а оценку результатов проводят по расчету границы смещения окраски прореагировавших веществ.