Питательная среда для выявления SтарнYLососсUS aUReUS Советский патент 1991 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии, и может быть использовано для ускоренного выявления в исследуемом материале Staphylococcus aureus.

Широко применяется для выявления названных микроорганизмов питательная среда кровяной агар. Она содержит двухпроцентный мясопептонный стерильный агар, в который добавлено 5-10% дефибри- нированной стерильно взятой крови лошади, кролика или барана -1.

Однако при посеве материала от больного на данную среду выделенные культуры стафилококков требуют проведения допол- нительио1чьисследования, чтобы их можно было отнести к виду Staphylococcus aureus.

Наиболее близкой в предлагаемой среде, позволяющей культивировать стафилококки, является питательная среда Чистовича, содержащая мясопептонный агар (рН 7,2-7,4), 10% поваренной соли и 20% стерильной желточной взвеси (1 желток куриного яйца на 150-200 мл стерильного физиологического раствораА 2.

Через 48 ч после посева исследуемого материала на данную среду отмечают наличие лецитовителлазной активности исследуемой культуры стафилококков (появление мутной зоны и радужных венчиков вокруг выросших колоний).

К недостаткам известной среды относится медленный рост стафилококков и невозможность одновременного выявления других факторов патогенности. Так, после

о о со

о о о

выявления лецитовителлазной активности исследуемой культуры стафилококков на среде Чистовича необходима дальнейшая идентификация стафилококков, например Определение ДНК-ной активности на среде, содержащей ДНК, Следовательно, удлиняется время проведения анализов, увеличивается расход питательных сред и трудоемкость исследования возрастает.

Целью изобретения является ускорение выявления Staphylococcus aureus в исследуемом материале.

Используемая в качестве компонента диагностической среды 1,3-ди- гидрокси-1-(4-нитрофенил)пропил-2- аммониевая соль 4-хлор-фенилтиоук- сусной кислоты (ВМ-3-86) формулы 4- С1СбН45СН2СОО МНзСН(СНОН)СН20Н

C6H4N02 4

(вещество ВМ-3-86) - первые синтезированное соединение, водорастворимое, без запаха, слегка окрашенное, дешевое и доступное.

Соединение получают взаимодействием соответствующей кислоты с алканолами- ном в среде низших спиртов (этанол, метанол, пропанол) при 70-85°С и соотношении реагентов 1:1 в течение 0,1-0,5 ч по схеме

4-С1СбН45СН2СООН+ + Н2СН (СН2ОН(СНОН (СеН4М02-4) 4-С1СбН45СН2СОСГх х+МНзСН(СН2ОН)СНОН (СбН4МО2-4) Питательную среду готовят следующим образом.

К 900 мл расплавленного мясопептон- ного агара (МПА) добавляют 0,0001 г ВМ- 3-86 и 70 г NaCI, учитывая, что при приготовлении МПА добавляют 5 г NaC на 1 л МПА, рН полученного солевого агара доводят до 7,2-7,4. Затем в солевой агар вносят водный раствор ДНК. Для этого 0,25-0,5 г ДНК растворяют в 7-10 мл дистиллированной воды. Для лучшего растворения ДНК в ее водный раствор добавляют раствор 3--5 капель 10% NaOH. Стерилизацию среды, содержащей солевой агар и ДНК, проводят текучим паром в течение 30 мин.

Перед розливом в чашки Петри в среду добавляют 0,2-0,3 г CaCI2 и 50-100 г желточной взвеси. Желточную взвесь готовят из свежего куриного яйца известным путем (в стерильных условиях отделяют желток и помещают в емкость с 150-200 мл физиологического раствора). Емкость энергично встряхивают в течение нескольких минут.

П р и м е р 1. Готовят питательную среду для выявления стафилококков следующего состава, г/л:

ДНК0.25

CaCI20,2

NaCI70,0

1,3-Дигидрокси-1 -(4-нитро- фенил)-пропил-2-аммоние- вая соль 4-хлор-фенилтиоуксусной кислоты0,0001

Желточная взвесь50

МПАДо 1 л

При посеве Staphylococcus aureus на данный вариант среды видимый рост куль- туры отмечается через 6 ч, ДНК-ная и леци- товителазная активность - через 9 ч.

П р и м е р 2. Готовят питательную среду для выявления стафилококков следующего состава, г/л:

ДНК0,4

CaCI20,25

NaCI72,5

1,3-Дигидрокси-1-(4-нитро- фенил)-пропил-2-аммоние- вая соль 4-хлор-фенилтиоуксусной кислоты0,0015

Желточная взвесь75

МПАДо 1 л.

При посеве Staphylococcus aureus на данный вариант среды видимый рост культуры отмечается через 6 ч, ДНК-ная и леци- товителазная активность - через 9 ч.

П р и м е р 3. Готовят питательную среду для выявления стафилококка следующего состава, г/л:

ДНК0,5

CaCI20,3

NaCI75,0

1,3-Дигидрокси-1-(4-нитро- фенил)-пропил-2-аммоние- вая соль 4-хлор-фенил- тиоуксусной кислоты0,001

Желточная взвесь100

МПАДо 1 л

При посеве Staphylococcus aureus на данный вариант среды видимый рост культуры отмечался через 6 ч, ДНК-ная и леци- товителазная активность - через 9 ч.

Из полученных данных следует, что среда предлагаемого состава для идентификации Staphylococcus aureus обладает значительным преимуществом перед известными средами - средой Чистовича и Мордвиновой, а именно обеспечивает быстрое (в течение 9 ч вместо 48 ч) выявление стафилококков в исследуемом материале и, следовательно, позволяет ускорить время проведения анализов при одновременном снижении материальных затрат.

Формула изобретенияследующем соотношении ингредиентов,

г/л:

Питательная среда для выявленияХлористый натрий 70-75

Staphylococcus aureus содержащая мясо-Желточная взвесь 50-100

пептонный агар, хлористый натрий, жел-5 ДНК 0,25-0,50

точную взвесь, отличающаяся тем,Хлористый кальций 0,2-0,3

что, с целью ускорения выявления1,3-Дигидрокси-1-(4-нитроStaphylococcus aureus в исследуемом мате-фенил)пропил-2-аммониериале, она дополнительно содержит ДНК,вая соль 4-хлорфенилтиохлористый кальций и 1,3-дигидрокси-1-(4-10 уксусной

нитрофенил)пропил-2-аммониевую соль 4-кислоты 0,001-0,0001

хлорфенилтиоуксусной кислоты приМясопептонный агар До 1 л,

Изобретение относится к области медицины, в частности к микробиологии, и касается выявления Staphylococcus aureus. Цель изобретения - ускорение выявления Staphylococcus aureus в исследуемом материале. К 900 мл расплавленного мясо- пептонного агара (МПА) добавляют 0,001-0,0001 г ВМ-3-86 и 70,0-75,0 г NaCI, рН полученного солевого агара доводят до 7,2-7,4. Затем в солевой агар вносят водный раствор ДНК, для чего 0,25-0,5 г ДНК растворяют в 7-10 мл дистиллированной воды. После стерилизации среды перед разливом в чашки Петри в среду добавляют 0,2-0,3 г CaCIa и 50-100 г желточной взвеси. При посеве Staphylococcus aureus на среду видимый рост культуры отмечается через 6 ч в средах без препарата - через 9 ч; ДНК-ная и лецитовителазная активность - через 9 ч (в средах без препарата - 24-48 ч). сл